Molécula de ADN artificial formada de manera deliberada in

vitro por la unión de secuencias de ADN provenientes de dos

organismos distintos que normalmente no se encuentran
juntos.
Al introducirse este ADN
recombinante en un organismo
se produce una modificación
genética que permite la adición
de una nueva secuencia de
ADN al organismo, conllevando
a la modificación de rasgos
existentes o la expresión de
nuevos rasgos.
Conjunto de técnicas nacidas de la Biología
molecular que permiten manipular el cromosoma
gen

genoma Homo sapiens

de un ser vivo.

Mediante la ingeniería genética se pueden introducir genes

en el genoma de un individuo que carece de ellos, se realiza a
través de las enzimas de restricción que son capaces de
"cortar" el ADN en puntos concretos.
Aislamiento y manipulación de fragmentos de ADN
de un organismo para introducirlo en otro (ADN
recombinante)

Nathans D., Arber W., y Smith H. (premio Nobel

de Fisiología Medicina en 1978 por el
descubrimiento de las enzimas de restricción y su
aplicación en Genética Molecular).
Molécula A Molécula B

Digestión de ambas moléculas con la

misma enzima de restricción, BamHI

Extremos
cohesivos

Mezclar

Tratar con ADN-ligasa

ADN recombinante
Corte específico del
ADN en fragmentos
pequeños y manejables
mediante la utilización de
un tipo de enzimas
conocidas como
enzimas de restricción
que pueden considerarse
como las "tijeras
moleculares".
Los fragmentos se pueden separar por tamaños,
mediante la técnica de electroforesis.
En el proceso, los fragmentos se desplazan en
relación inversa a su tamaño, los más pequeños se
mueven rápidamente, mientras que los grandes lo
hacen muy lentamente.
Se realiza en vectores de clonado, que son los
transportadores capaces de introducirlos en las
células hospedadoras.
Los vectores de clonación son pequeñas moléculas
de ADN, que tienen capacidad para autorreplicarse
dentro de las células hospedadoras.
Se utilizan con frecuencia dos tipos de vectores de
clonación: plásmidos y virus.
Moléculas de ADN circular, se replican con independencia
del cromosoma bacteriano ya que tienen su propio origen de
replicación.

Una enzima de restricción ha

cortado el gen y el plásmido,
quedando unos bordes
cohesivos o pegajosos.

La unión del ADN que contiene el

gen que se desea clonar con el
Un gen (color rojo) que interesa insertar en un
vector de clonación, se realiza
plásmido (color turquesa)
por medio de otras enzimas,
denominadas ADN-ligasas, que
unen ambos trozos de ADN. El
resultado es una molécula de ADN
recombinante.
El proceso es similar, se trata de insertar el gen deseado en
un fragmento de ADN vírico.

Posteriormente se ensamblarán las distintas partes del virus.

Así quedará el virus completo. En el siguiente paso se
insertará este ADN por el proceso de la TRANSDUCCIÓN.
Son plasmidos que
contienen el fragmento
de ADN deseado que
poseen un borde
cohesivo procedente del
genoma del fago lambda
(extremo cos) y se
empaqueta en el interior
de un fago. Se construye
el cósmido uniendo los
tres elementos génicos, y
el resultado final es poder
introducir en la célula
receptora fragmentos
largos de ADN.
•Origen de replicación.

•Genes de resistencia a antibióticos. Sirven para

identificar bacterias que contienen el vector de
clonación, porque serán resistentes al antibiótico del
gen marcador.
•Genes de luminiscencia. En este caso, la célula
que contenga el gen que se quiere clonar, tendrá la
propiedad de emitir luz, ya que el marcador que se le
incorpora determina que se exprese esa
característica. Este sistema se emplea cuando la
célula hospedadora es eucariota.
Transformación. Ocurre espontáneamente en ciertos
tipos de bacterias y se consigue artificialmente
sometiendo a la célula bacteriana a tratamientos
físicos y químicos.
La célula capta moléculas de
ADN que se encuentran en el
medio externo, las introduce en
su interior y las incorpora a su
genoma.
Consiste en introducir el ADN en la célula
hospedadora mediante un virus, utilizando como
vector de clonación el genoma del virus.
Una vez conseguida la población de bacterias
transformadas, (gen de resistencia a un antibiótico
por ejemplo un gen de resistencia a la ampicilina),
por lo que las bacterias que se consideran
transformadas, serán aquellas que sobrevivan.
Ciclo lisogénico

Ciclo lítico
(f) (g) (h)
Técnica que permite duplicar ilimitadas veces
un fragmento de ADN en un tubo de ensayo.
La reacción necesita cantidades de ADN muy
pequeñas y sólo se precisa un tubo de
ensayo, algunos reactivos, una fuente de
calor y unas pequeñas cadenas de
nucleótidos que actúan como cebadores.
La molécula de ADN que va a copiarse se calienta para que se desnaturalice y se separe las dos hebras.
Cada una de las hebras es copiada por la ADN-polimerasa. (Se utiliza la ADN-polimerasa de una bacteria que vive en
aguas termales, Thermus aquaticus, así la enzima puede trabajar a altas temperaturas).
Las cadenas recién formadas son separadas de nuevo por el calor y comienza otro nuevo ciclo de copias.
• Secuenciación

• Estudios evolutivos

• Huellas dactilares del ADN.

Una de las razones mas comunes para el uso
de la PCR es la formación de suficiente
cantidad de ADN molde para su secuenciación.
Es mucho mas sencillo y rápido que la
clonación en células.
La Secuenciación de
ADN es un conjunto de
métodos y técnicas
bioquímicas cuya
finalidad es la
determinación del orden
de los nucleotidos (A, C,
G y T) en un
oligonucleotido de ADN.
La secuencia de ADN es
la información genética
heredable del núcleo
celular, los plasmidos, la
mitocondria y
cloroplastos.6
 ACTTTGTCCACGGCCTAAGCGTTTTTTGCCC
Secuenciación AGTGACTTTGTCCAAC
GTCCAACAGTTACCAAGTGACTTTGTCCAC TTTTGCCC
de genomas AGTGACTTTGTCCA ACGGCCTAAGCGTTTTTTTT

ALINEAMIENTO DE TODAS LAS SECUENCIAS Y RECONSTRUCCIÓN DEL CROMOSOMA

•Detección de mutaciones
Método de diagnóstico rutinario (relación entre enfermedad y mutación puntual)

•Secuenciación de ADNs fósiles

Posibilidad de aislar secuencias de ADN a partir de unas pocas copias (la mayoría
están dañadas o degradadas)

•Diagnóstico de enfermedades genéticas

Diagnóstico prenatal / Diagnóstico preimplantación de enfermedades hereditarias o
determinación del sexo del feto previamente a su implantación en procesos de
fecundación in vitro

•Identificación de especies y control de cruces entre animales

Para descubrir fraudes comerciales, tales como vender carne de una especie más
barata a los precios de otra más cara, o el comercio ilegal de especies en peligro

•Secuenciación de genomas
Conocimiento básico y aplicado de diferentes organismos (incluido el genoma humano)
Mediante la PCR se pueden amplificar genes de
organismos ya extinguidos, como del mamut, o
restos antiguos humanos. Se pueden comparar
estos genes con los genes semejantes de
organismos actuales y poder reconstruir árboles
filogenéticos.
El PCR también se ha utilizado para conseguir el
mapa del genoma humano.
La secuenciación del
ADN de un mamut
obtenido de 10 pelos
provenientes de estos
animales y de origen
siberiano, para ello se
ha utilizado la
pirosecuenciación
genética.
Se ha logrado secuenciar con la misma técnica
unos pedazos de ADN perteneciente al hombre de
neandertal.
Mediante esta técnica es posible comparar
muestras diferentes de ADN para comprobar si
pertenecen al mismo individuo o no, o si existe
parentesco entre ellas.
Esta técnica se aplica actualmente en Medicina
forense e investigaciones policiales, con el fin
de identificar individuos a partir de muestras
biológicas, como sangre, semen, piel o cabellos.
También se utiliza en las pruebas de paternidad.
Las huellas dactilares del ADN presentan
ventajas significativas sobre otros métodos como
son el análisis del grupo sanguíneo, o la
utilización de proteínas como marcadores, para
determinar la paternidad correcta; la
especificidad individual permite tanto la exclusión
y la confirmación positiva de la paternidad, con
un alto grado de certeza. Utilizando diferentes
marcadores se puede llegar a tener una certeza
mayor de 99.9999 por ciento. Estos avances
científicos no están confinados exclusivamente a
laboratorios de investigación, ni limitados a
países desarrollados o del primer mundo.
 Clonación de genes de
ciertas proteínas
humanas en
microorganismos
adecuados para su
fabricación comercial.
Producción de
insulina a partir de la
levadura Sacharomyces cerevisae
Obtención de proteínas de interés médico, comercial, etc...
(insulina, hormona del crecimiento, factores de coagulación antes se obtenían
a partir de los tejidos que las producen o fluidos corporales)
Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente por
ingeniería genética. Como la mayoría de los factores antigénicos son
proteínas lo que se hace es clonar el gen de la proteína correspondiente.
Conociendo la secuencia de nucleótidos de un gen responsable de una cierta
anomalía, se puede diagnosticar si este gen anómalo está presente en un
determinado individuo.
 Mediante ingeniería genética
se construye una sonda de
ADN, marcada (marcaje
fluorescente), con la
secuencia complementaria del
ADN enfermo
ADN sano

ADN enfermo
ADN complementario
del ADN enfermo
Conocimiento previo de
la secuencia de ADN DIAGNÓSTICO
enfermo

Si aparecen bandas
fluorescentes
demuestra que la
persona presenta la
Biochip anomalía
Microarray
¿Hibridación? Renaturalización Desnatura ADN de la
DNAchip
¿No hibridación? del ADN con la lización persona que se
sonda del ADN quiere
fluorescente diagnosticar
Es una biblioteca génica, En teoría, una genoteca
genómica debería representar el genoma completo
en forma de un conjunto de fragmentos clonados
parcialmente solapados, producidos de modo
aleatorio y mantenidos de forma estable en la que
no haya una mala representación de secuencias.
Genoma de hongos: 44 millones de pares de bases
Huesped: Escherichia coli
Vector: Bacteriófagos
capacidad: 20 mil pares de bases

Genoma humano: 3000 millones de pares de bases

Huesped: Saccharomyces cerevisiae
Vector: YAC (cromosoma artificial de levadura)
MegaYAC (capacidad: 1 millón de pares de bases)
 Agrobacterium tumefaciens es patógena de plantas.
Produce tumores
Agrobacterium
núcleo
Plásmido Ti
inductor de tumores cromosoma
contiene oncogenes
Transgénesis= introducción de (genes onc)
ADN extraño en un genoma, de
modo que se mantenga estable de
forma hereditaria y afecte a
todas las células en los organismos cromosoma
multicelulares.
célula
Ingeniero vegetal
genético
natural tras
sutitución de tumores
genes onc por Proliferación de
genes de hormonas
interés crecimiento. Se
forman tumores en
las zonas de la
lesión
•Resistencia a herbicidas, insectos y enfermedades microbianas
El maíz transgénico de Novartis es resistente al herbicida Basta y también es
resistente al gusano barrenador europeo (contiene el Gen de resistencia a la
toxina Bt de Bacillus thuringiensis) produce su propio insecticida

Problemas:La toxina Bt en las plantas transgénicas tiene propiedades

sustancialmente diferentes a la toxina Bt en su forma natural.
La toxina puede ser transmitida a través de la cadena alimenticia, un
efecto que nunca ha sido observado en la toxina Bt en su forma natural.
Larvas de especies de insectos predadores benéficos (larvas verdes de
crisopa) murieron cuando fueron alimentadas con el gusano barrenador
europeo

Gold rice de Monsanto con color amarillo por los altos niveles de vitamina A

Mejora de la calidad de los productos agrícolas

Producción de aceites modificados

•Síntesis de productos de interés comercial

Anticuerpos animales, interferón, e incluso elementos de un poliéster destinado a la
fabricación de plásticos biodegradables
(por microinyección de zigotos)

Secuencia promotora para

la síntesis de una proteína
Gen humano de la leche

Gen híbrido

humano rata

Ovulos de cerda
fecundados

Desarrollo de una cerda transgénica

(TRANSFERENCIA NUCLEAR DE CÉLULAS EMBRIONARIAS)
(TRANSFERENCIA DEL NÚCLEO DE UNA CELULA SOMATICA: CÉLULA DIFERENCIADA)
Clonan terneros en EE UU para producir anticuerpos
humanos

efe- Washington - agosto 2002

Terneros clonados y manipulados genéticamente (fábrica de anticuerpos humanos)

genes para anticuerpos células dérmicas clonación

humanos recombinantes

Objetivo: Tratamiento de enfermedades inmunológicas

Futuro: Tratamiento de una amplia gama de enfermedades ocasionadas por

bacterias y virus, como hepatitis, ántrax (utilizada como arma biológica)
Clonan cerdos destinados a trasplantar sus órganos a
humanos

La empresa escocesa PPL Therapeutics logra

retirar de los cerditos el gen que provoca el
rechazo en transplantes a humanos "alfa 1,3
galactosil transferasa"

Enero 2002. AP Photo/Roanoke Times, Gene Dalton (IDEAL-EFE)

Paso importante en favor del xenotrasplante (transferencia de células u

órganos de una especie a otra)

Ayudará a superar la escasez de órganos humanos para hacer trasplantes de

todo tipo
Un laboratorio de Texas clona al primer animal
doméstico
"Copycat" es el primer gatito nacido mediante clonación"

El experimento abre las puertas de

la clonación masiva de animales
domésticos, un fin sin explorar cuya
sola posibilidad había
desencadenado ya el
almacenamiento de células de
febrero 2002 Universidad College Station (Texas)
mascotas por parte de sus ricos
propietarios
La clonación humana ya se
esté intentando de forma
clandestina por varios
laboratorios en el mundo
La clonación reproductiva no arroja
los resultados suficientes, no existen
garantías como para decir 'Vamos a
clonar un ser humano'

Por cada intento de clonación

hay detrás miles de fallos, Para obtener a Dolly: 277 fusiones
abortos y malformaciones de ovocitos con células mamarias,
genéticas solo 29 embriones fueron aptos. De
estos solo uno resultó un éxito

OBJETIVO ÚLTIMO: TRATAMIENTO de ENFERMEDADES
1 Cultivo de blastocisto
2 Eliminación de la capa externa
3 Adición de sustancias
que disgregan la masa
celular interna
4 Transferencia de los agregados
celulares a un nuevo pozo
5 Formación de células
diferenciadas a tejidos
dañados
Fecundación
Embrión temprano
6 Adición de factores de
diferenciación seleccionados
CREACIÓN DE UN EMBRIÓN ARTIFICIAL
(con células adultas)
-embrión somático-
OBJETIVO ÚLTIMO: AUTOTRASPLANTES
(no hay rechazo)
Fusión de célula somática
y ovulo enucleado
En caso de existir deficiencias a nivel
genético se puede hacer terápia génica
a nivel de células madre
7 Administración de células
diferenciadas a tejidos
dañados
Una célula madre o célula pendenciera indiferenciada es
una célula que tiene capacidad de autorrenovarse como
PICORO mediante divisiones mitóticas o bien de
continuar la vía de diferenciación para la que está
programada y, por lo tanto, producir uno o más tejidos
maduros, funcionales y plenamente diferenciados en
función de su grado de multipotencialidad.
Declaración Universal de Derecho Humanos y Genoma Humano de la UNESCO (1997),
adoptada en 1998 por la Asamblea General de ONU (busca un balance entre una
continuación en las investigaciones y la salvaguarda de los derechos humanos)

Frente a los múltiples beneficios de la ingeniería genética

pueden surgir algunos problemas

Problemas sanitarios nuevos microorganismos patógenos,

efectos secundarios de nuevos fármacos de diseño, etc...

Problemas ecológicos desaparición de especies con consecuencias

desconocidas, nuevas contaminaciones debidas a un metabolismo incontrolado, etc...

Problemas sociales y políticos en el campo de la producción industrial, agrícola y ganadera,

pueden crear diferencias aún más grandes entre países ricos y pobres. El sondeo génico en
personas puede llevar a consecuencias nefastas en la contratación laboral, por ejemplo, y atenta contra
la intimidad a que tiene derecho toda persona (empleo, agencias de seguros, discriminación..).

Problemas éticos y morales Poder conocer y modificar el patrimonio genético humano

puede ser una puerta abierta al eugenismo "Eugenesia: la ciencia del incremento de la felicidad humana a
través del perfeccionamiento de las características hereditarias".
El sexto día

El ataque de los clones