Un protocolo de

aislamiento…
La historia de como gastamos 40 horas hombre para
aislar la bacteria más común sobre la faz de la tierra

Por Ariel Aptekmann y Francisco Duré

 Enterobacterias Pseudomonas Bacilos Lactobacilos

Toma de muestra Parque Centen Parque Centen Arroz Yogurisimo

ario ario
Caldo
Enriquecimiento Caldo M9 Calor de fabrica
McConkey

Agar
Aislamiento Agar EMB Agar Cetrimida Agar MRS
Mossel

Agar
Purificación Agar Nutritivo Agar Nutritivo No realizado
Nutritivo
 Enterobacterias Pseudomonas Bacilos Latobacilos

Caracterización
Cocobacilos GRAM - Bacilos GRAM - Bacilos GRAM + con Bacilos GRA
microscopica Espora Subterminal N M +
o Deformante

Catalasa +
+ - +

Oxidasa
- + NR NR

Agar Hierro Kligle

r Ac/Ac G+ SH- Alk/SC G- SH- NR NR

Amilasa
- - - NR

Proteasa
NR + + NR

Lipasa
NR + + NR

API 20 E
…Suspenso… NR NR NR
Parque Centenario

Posible fuente de
enterobacterias y
Pseudomonas sp

Columba livia (Paloma)

Anas platyrhynchos (Pato)
Homo sapiens (Vagabundo)
Agua, Suelo?
Bacillus y sus amigus

Fuente de los lactobacilos

Contiene Lactobacillus
Fuente de Bacillus sp bulgaricus, Streptococcus
termophilus, Lactobacillus
cassei y una bifidobacteria no
especificada
Enriquecimiento
Enterobacterias Caldo McConkey: Pseudomonas Caldo M9:
-Bilis de Buey desecada -Glicerol
-Purpura de Bromocresol

Bacillus Calor Lactobacilos

-Esporas - El medio acido del yogurt
Aislamiento
Enterobacterias Agar EMB: Pseudomonas sp Agar Cetrimida:

- Lactosa + Peptona de carne + - Cetrimida

Azul de Metileno + Eosina
Yellow

Bacillus sp Agar Mossel: Lactobacilos Agar MRS:

- Peptona de carne + -Tween 80
Manitol + Rojo de fenol
Enterobacterias
Pseudomonas sp
Bacillus sp
Lactobacilos
Catalasa y Oxidasa
 Reaccion de la Catalasa :
 2 H2O2 → H2O + O2 (burbujas)

 Oxidasa:
 Reactivo de Kovacs “diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina” ( rojo es positivo)
 Agar Hierro Kligler
Como interpretarlo:

1-Pico alcalino/fondo ácido (pico

rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico
amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa, y
lactosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico
rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del
medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica
que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.

Enterobacterias: Ac/Ac G+ SH-

Pseudomonas sp Alk/SC
G- SH-
Amilasa, Proteasa y
Lipasa

amilasa
proteasa

 Lo que se puede observar es el halo

de degradación o su ausencia, para
proteínas, almidón, o lipasas.
El halo es indicador de enzimas líticas.

lipasa
 El API 20 E es una batería de pruebas
API 20 E identificatorias, especifico para enterobacterias, se
usa en conjunto con un manual que permite
identificar una especie en base a los resultados.

NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN 5 144 572 1

Escherichia coli con excelente nivel de identificación

Sobre Bacillus,
Pseudomonas y
Lactobacillus
Aunque no hicimos una identificacion completa para estos ultimos,
obtuvimos algunos datos, catalasa, oxidasa, recuento, etc…
Pero no son suficientes para identificar a nivel de especie.
MUCHAS GRACIAS POR
NO TIRAR TOMATES!

Y si lo hicieron, gracias por la salsa gratis!

Ecolini, mascota oficial del equipo .