Mg

Mg. TATIANA DEL CASTILLO DE LOAYZA

CUSCO JUNIO 2017

 DEFINICIÓN DE
INMUNODIAGNÓSTICO O
INMUNOANÁLISIS

Son pruebas de laboratorio fundamentadas

en la reacción antigeno - anticuerpo, que
permiten hoy dia hacer el diagnóstico de
enfermedades endocrinas, infecciosas,
marcadores tumorales, fertilidad,
marcadores cardiacos, y control de drogas de
abuso y de uso restringido.
 ANTICUERPOS O INMUNOGLOBULINAS

Fuente: Regueiro
 PRINCIPIO DEL INMUNOENSAYO
ANTÍGENO + ANTICUERPO

REACCIÓN VISIBLE.
 BONDADES DE LOS INMUNOENSAYOS

Especificidad.
Sensibilidad.
Precisión.
Rapidez.
Versatilidad.
Con la última generación: control de
calidad en tiempo real; muestras
pediátricas; autodilución; software
amigable con ayuda permanente y tutorial
en línea; amplio menú disponible; reactivos
de excelente calidad y con consumo
mínimo.
 ETAPAS DE LA REACCIÓN

UNIÓN DEL ANTIGENO CON EL

ANTICUERPO POR INTERACCIÓN FÍSICO-
QUÍMICA ENTRE LAS MOLÉCULAS.

VISUALIZACIÓN DE LA UNIÓN.
DIAGNOSTICOS FUNDAMENTADOS EN LOS
INMUNOENSAYOS

DETECCION DE FARMACOS
TERAPEUTICAS Y DE ABUSO:
anticonvulsionantes; estimulantes;
benzodiacepinas; barbitúricos.

DX ENFERMEDADES AUTOINMUNES:

ANA; ANCA; ENA; SSA; SSB;
CARDIOLIPINA; GLIADINA;
MIELOPEROXIDASA; FACTOR
REUMATOIDE; ANTITIROGLOBULINA
DIAGNOSTICOS FUNDAMENTADOS EN LOS
INMUNOENSAYOS

INFECTOLOGIA: GRUPO TORCHS;

MARCADORES DE HEPATITIS;
VARICELA; SARAMPIÓN; PAPERAS;
VIH; EPSTEIN BARR; MICOPLASMA;
LEGIONELLA; HELICOBACTER
PYLORI; B. BURGDORFERI

Imagines tomadas de Google

DIAGNOSTICOS FUNDAMENTADOS EN LOS
INMUNOENSAYOS

DETERMINACIÓN DE HORMONAS:
TIROIDES, GLÁNDULAS
SUPRARENALES, PANCREAS, GONADAS,
PARATIROIDES, CRECIMIENTO Y
DESARROLLO.

MARCADORES TUMORALES: AFP; ACE;

PSA TOTAL Y LIBRE; BETA HCG; BETA 2
MICROGLOBULINA; CA 15.3; CA125.

Imágenes tomadas de Google

 Es una técnica
de
inmunoensayo
en la cual un
antígeno
inmovilizado
se detecta
mediante un
anticuerpo
enlazado a una
enzima capaz
Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
de generar un
ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas producto
detectable,
como cambio
de color o
algún otro tipo
FUNDAMENTO
TIPOS DE ELISA
Pasos generales de un ELISA
1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo
2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o
anticuerpos
3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o

4.
antígeno tapizado en el posillo.
Lavado del pocillo para eliminar el exceso de anticuerpo o
5. antígeno no unido
6. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima
7. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
8. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
9. Adición del sustrato
10. Unión del sustrato a la enzima
Desarrollo del color
Inmunoblot o electrotransferencia, es una técnica
analítica usada en biología celular y molecular para
identificar proteínas específicas en una mezcla
compleja de proteínas.
Es una técnica analítica usada para detectar proteínas específicas
en una muestra determinada (una mezcla compleja de proteínas,
como un extracto tisular).

El western blot es una técnica que se utiliza para identificar y localizar

proteínas basada en la capacidad de unión a anticuerpos específicos. Luego
de separar las proteínas en un gel de SDS-poliacrilamida(SDS-PAGE), las
bandas de proteínas se transfieren a una membrana de nitrocelulosa
(electro transferencia), las bandas individuales de proteína (proteína de
interés) se identifican al inundar la membrana de nitrocelulosa con
anticuerpo policlonal o monoclonal radio marcado o unido a enzimas
específicas para la proteína de interés.
PROCEDIMIENTO
 TRANSFERENCIA EN PAPEL
NITROCELULOSA Y REVELACION
RESULTADOS
El Western blot es una de las técnicas más
usadas en el estudio de la biología molecular.

• Prueba de VIH
• Se emplea como prueba definitiva de la encefalopatía
espongiforme bovina, comúnmente llamada enfermedad
• de las vacas locas".
Algunas clases de la prueba para la enfermedad de Lyme
Del inglés (polymerase chain reaction)
es una técnica de biología molecular
 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
Técnica que nos permite amplificar selectivamente un segmento específico de
DNA, hasta obtener una cantidad suficiente para su posterior manipulación

Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de

los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo
cual se emplean ciclos de altas y
bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de
ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación.
 Secuenciación:

Una de las razones mas comunes para

el uso de la PCR es la formación de
suficiente cantidad de ADN molde
para su secuenciación. Es mucho mas
sencillo y rapido que la clonación en
células.
 Estudios evolutivos:

Mediante la PCR se pueden amplificar

genes de organismos ya extinguidos. Se
pueden comparar estos genes con los
genes semejantes de organismos actuales y
poder reconstruir árboles filogenéticos.
El PCR también se ha utilizado para
conseguir el mapa del genoma humano.
 Huellas dactilares del ADN:

La determinación de las huellas

dactilares genéticas constituye una de
las aplicaciones mas interesantes de la
PCR.
Mediante esta técnica es posible
comparar muestras diferentes de ADN
para comprobar si pertenecen al mismo
individuo o no, o si existe parentesco
entre ellas.
 La Reacción en Cadena de la Polimerasa es una técnica muy
sensible, por lo que es de gran importancia evitar
contaminaciones

1. Lugar físico exclusivo para realizar la PCR

2. Uso de instrumental exclusivo para la PCR
3. Utilización de reactivos y tubos estériles
4. Uso de guantes por el manipulador