Desarrollo y maduración de los

linfocitos y expresión de los genes de

los receptores de antígeno
Leonardo Ramón León
Tópicos de fisiología de la sangre
Maestría en fisiología
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Revisión de los modelos de desarrollo

Todos los elementos de la sangre se originan de las células madre

pluripotentes (HSC), las cuales tienen la capacidad de autoregeneración y
autosostenimientodd.
Estas son seguidas de varios estadios de maduración que dan lugar a
progenitores que adquieren progresivamente un compromiso con un linaje
restringido
Revisión de los modelos de desarrollo

Al final de la jerarquía se ubican los diversos tipos de células sanguíneas

maduras y elementos.

El proceso ocurre en el microambiente del estroma de la médula ósea donde

citoquinas y otros elementos interactúan con receptores de las células en

desarrollo.
Modelo jerárquico

Las células progenitoras multipotentes (MPP) solo tienen una capacidad

transitoria para repoblarse pero conservan el potencial para diferenciarse en
todos los linajes del sistema hematopoyético.
Modelo jerárquico

Las MPP generan progenitores de linaje restringido: el progenitor linfoide

común y el progenitor mieloide común.
El progenitor linfoide común, que tiene solo capacidad de diferenciación linfoide
y no mieloeritroide produce el linaje linfoide de los leucocitos: las células NK, y
los linfocitos T y B. (Kondo, Weissman, & Akashi, 1997).
Modelo jerárquico

Según el modelo mieloideo, la pérdida de la capacidad mieloidea se perdería

tardíamente en la línea de células comprometidas con los linfocitos.(Doulatov,
Notta, Laurenti, & Dick, 2012).
Principio de diferenciación celular

El desarrollo de células destinadas a convertirse en linfocitos T o B sigue los

principios de la diferenciación celular:
Las propiedades esenciales de la célula madura se van adquiriendo
gradualmente.
Las características propias de las células inmaduras se van perdiendo
gradualmente.
Modelos de determinación

de los linajes celulares en

el ratón adulto y en el

humano. Tomado de

(Doulatov et al., 2012)

Modelo de
determinación
de linajes
celulares en el
humano

Doulatov et al.,

2012
Desarrollo en el estroma de la médula ósea

En la médula ósea las células progenitoras se encuentran en un

microambiente en contacto con las células del estroma del tejido conectivo.
Las células del estroma contribuyen de dos maneras:
Proporcionan contactos adhesivos con los linfocitos en desarrollo por medio de
la interacción de moléculas de adhesión celular y sus ligandos.
Proporcionan citoquinas solubles y unidas a la membrana y quimioquinas que
controlan la diferenciación y proliferación de los linfocitos.
Este proceso de desarrollo de linfocitos
B es, en resumen, una interacción entre
los receptores expuestos en las células
progénicas y las señales presentes en el
microambiente del estroma de la médula
ósea. La célula expone los receptores,
los ligandos se unen a estos e inician la
señal que es conducida hacia el dominio
citoplasmático del receptor
Señalización celular

El proceso de señalización comprende la interacción de un ligando específico

para el receptor expresado en el estadio celular. El dominio citoplasmático del
receptor inicia los procesos de señalización al interior de la célula que muchas
veces terminan en la activación de factores de transcripción que
desencadenan la producción de proteínas determinadas.
 Diferenciación de la célula progenitora
multipotente (MPP)en el progenitor linfoide
común (CLP)
Factores de transcripción

Expresión del receptor

tirosina kinasa FLT3 en
la célula progenitora
multipotente
Expresión del receptor FLT3

La señalización del receptor FLT3 inicia los cambios que hacen que el MPP se
transforme en el precursor mieloide común.
Como otros receptores, FLT3 está codificado por su propio gen, el gen FLT3
(tirosina quinasa 3 similar a fms -fms like tyrosyn kinase 3). Su ligando es la
citoquina FL.
Rol de la quimioquina CXCL12

Esta es una molécula expresada por el

estroma de la médula ósea y que

interviene en la retención de las células

madre y de las células progenitoras

linfoides en el lugar apropiado del

estroma
Cuando se elimina el
CXCL12 que está presente
en las células ricas en
CXCL12 (células CAR) y en
osteoblastos, se produce
mobilización de las células
precursoras
hematopoyéticas (HPC) y
pérdida de progenitores
linfoideos B. (Greenbaum et
al., 2013)

Nature Reviews Immunology 6, 107-116 (February 2006) |

doi:10.1038/nri1780
Factor de transcripción FU.1

Su expresión varía en intensidad entre las células progenitoras y las células

comprometidas con el linaje de células B.
De su grado de expresión depende el desarrollo de los distintos linajes.
Es silenciado en el desarrollo de eritrocitos, células T y NK y mantienen un
nivel bajo en el desarrollo de los linfocitos.
Del progenitor linfoide común a la célula pro
B

La población de células de progenitor linfoide común en en realidad

heterogénea y es un continuo celular que muestran un potencial multipotente
cada vez más restringido.
Un primer subgrupo tiene el potencial más amplio y es capaz de producir
células B, T y NK. Un segundo subgrupo puede generar solo células B y T.
Hasta llegar a un subgrupo comprometido exclusivamente con la producción
de células B.
Expresión del receptor para interleuquina 7
en el progenitor linfoide común

La producción de progenitores linfoides (CLP,) está acompañada con la

expresión del receptor para la interleuquina 7 (IL-7), la cual es el producto de la
señalización del receptor FLT3 junto con la actividad de PU.1
La señalización del receptor IL7 y el
desarrollo del linaje de células B

La IL-7 fue reconocida como

importante en la
diferenciación del precursor
linfoide común comprometido
con el linaje de células B
(Dias, Silva, Cumano, &
Vieira, 2005)
Etapas en el desarrollo de los linfocitos B

El linaje comprometido exclusivamente con el desarrollo de células B está

compuesto por los siguientes estadios de desarrollo secuencial: pro B
temprano (B temprano), pro B tardío (Pro B), células Pre B grandes (Pre B-I)
células pre B pequeñas (Pre B-II), células B inmaduras y finalmente las células
B maduras.
Cuando se elimina el
CXCL12 que está presente
en las células ricas en
CXCL12 (células CAR) y en
osteoblastos, se produce
mobilización de las células
precursoras
hematopoyéticas (HPC) y
pérdida de progenitores
linfoideos B. (Greenbaum et
al., 2013)
Las células Pro B son las

que inician el linaje

comprometido

exclusivamente con células

B
5 etapas en el desarrollo del linfocito B
entre el progenitor linfoide común y la
célula B adulta:

Pro B temprano
Pro B tardío (Pro B)
Pre B grandes (I)
Pre B pequeñas (II)
Células B inmadura
La señalización de IL-7 expresa proteínas
que identifican a las células

La señalización del receptor IL-7, expresado ya en el precursor linfoide común,

contribuye a la supervivencia de las células comprometidos con el linaje B pero
además su señalización es seguida de la expresión en la superficie celular de
proteínas que caracterizan a las células pro B, como B220, CD19 y CD43. La
expresión de B220 se acompaña de la pérdida de la capacidad para poder
diferenciarse en linfocitos T. (Miller et al., 2002).
Expresión de factores de transcripción en el
estadio Pro B

Los factores E2A y EBF (Factor de célula B temprana) actúan conjuntamente

para conducir a la expresión de proteínas que caracterizan al estadio celular
pro B. E2A y EBF inducen además la expresión de otro factor de transcripción,
el Pax5, conocido como activador de proteína de la célula B y que es
indispensable para que la célula continúe su progresión en la línea
comprometida con el linfocito B.
Inicio de la expresión de genes que
codifican los receptores celulares

En los linfocitos B la expresión de los genes que codifican los receptores se

antígeno es la producción del antígeno de células B o BCR (B Cell antigen)
Expresión del receptor para interleuquina 7
en el progenitor linfoide común

La producción de progenitores linfoides (CLP,) está acompañada con la

expresión del receptor para la interleuquina 7 (IL-7), la cual es el producto de la
señalización del receptor FLT3 junto con la actividad de PU.1
El receptor es básicamente
una inmunoglobulina
anclada a la superficie
celular; esta, se encuentra
formando un complejo
compuesto por una
molécula de
inmunoglobulina unida a la
membrana (mIG) y por una
proteína transmembrana
conocida como CD79 (del
inglés, Cluster differentiation
79)
Este modelo tridimensional de
la inmunoglobulina, esta
mostrando la nomenclatura
moderna en la que se
aprecian los diferentes
dominios variables V en los
extremos de los brazos, que
le confieren la especificidad
por un epítope determinado
Las regiones variables
se encuentran en los
extremos de las
cadenas de la
inmunoglobulina del
receptor en la célula B
y es la que realiza el
reconocimiento del
antígeno o señal. El
antígeno se reconoce
por su epítope.
Inicio del reordenamiento de genes

La capacidad de reconocer un antígeno requiere un repertorio muy grande de

receptores, en los linfocitos B un repertorio de inmunoglobulinas que se estima
es del orden de 1011 en el ser humano (Kenneth Murphy, 2016).
Todo esto se produce a partir de un conjunto de genes heredados que
comparativamente es mucho menor. La gran variabilidad de las regiones V se
obtiene realizando una recombinación o reordenamiento de segmentos de
genes en un proceso que puede terminar bien o a veces termina en un
resultado no funcional que desencadena la apoptosis del linfocito.
Inicio del reordenamiento de genes

En estadio Pro B se inicia la expresión de los receptores para antígeno que

caracterizan a las células B.
Los factores de transcripción E2A y EBF están relacionados con procesos
que incluyen la activación de genes específicos del linaje B, la represión de
genes de linaje
El factor de transcripción Pax5 está relacionado con el mantenimiento del linaje
comprometido con las células B, reprimiendo la expresión de genes
relacionados con el desarrollo de linfocitos T
Primer reordenamiento en las células pro B

El primer locus en reordenarse es el de las cadenas pesadas IgH.

Para el caso de los receptores de los linfocitos B (BCR) existen los siguientes segmentos de genes::
51 segmentos denominados Vh que codifican la dos primeras partes de la región V hipervariable.
27 segmentos denominados Dh que codifican una parte de la restante región complementaria ( CDR3)
6 segmentos denominados Jh que codifican el resto de la región V.
9 segmentos denominados Ch que codifican la parte constante de la inmunoglobulina.
51 segmentos V, 27 segmentos D, 6 segmentos J, más exones para región C.
Este esquema muestra el
proceso de recombinación o
reordenameinto de las
cadenas pesadas V y D,
primer paso y luego la
recombinación de exones V y
DJ. Este último ocurre en el
estadio pro B tardío.
Regulación del proceso

En ausencia de las transcriptasas E2A o EBF no se produce este evento

Si no se consigue un ordenamiento exitoso la célula entra en apoptosis
Genes activadores de la recombinación:
RAG-1 y RAG-2
Expresión del factor de transcripción Pax5

The regulation of the B-cell gene expression programme by Pax5

Immunology and Cell Biology (2008) 86, 47–53; doi:10.1038/sj.icb.7100134; published online 13
November 2007
Expresión de RAG-1 y RAG-2
Etapas en el desarrollo de células B y
expresión de los genes
Etapas en el desarrollo de los linfocitos T. Tomado de Janeway, Immunobiology, 9th edition, 2016.
Etapas en el
desarrollo de los
linfocitos T.
Proteínas y sus
funciones.
Tomado de
Janeway,
Immunobiology, 9th
edition, 2016.
Problemas con la diversidad

La recombinación V(D)J produce un gran incremento en la diversidad, sin

embargo también puede resultar en combinaciones fracasadas.
En el estadio de células pro B existe un sistema para probar la funcionalidad
de las cadenas pesadas, en ausencia de cadenas livianas, ya que los loci de
estas todavía no han sido reordenados.
Prueba de la cadena pesada funcional

Se crean unas proteínas sustitutas que remplazan temporalmente a las

cadenas livianas. Estas cadenas sustitutas con codificadas a partir de genes
no reordenados. Se forma un conjunto que tiene que señalizar un receptor. La
falla de señalización del receptor pre B inducirá la muerte celular.
De célula pro B a célula pre B

La señalización correcta inducirá el desarrollo de las células pre B

Se detiene el reordenamiento de las cadenas pesadas.
Las células son señalizadas por IL-7, produciendo la proliferación celular y la
progresión a células pro B grandes
Eliminando la posibilidad de una doble
expresión

Si un alelo es expresado correctamente, existe la posibilidad de que el

segundo también lo sea y esto produciría una doble expresión.
La señalización de receptor pre B produce la exclusión alélica.
La exclusión alélica es un estado en el cual uno solo de los dos genes se
expresa.
En el proceso se reduce la expresión de los genes RAG-1 y RAG-2 lo que
reduce la actividad de la recombinasa V(D)J
Un nuevo repunte de RAG-1 y RAG-2

Las proteínas RAG nuevamente se incrementan en las células pre B pequeñas

para inducir el reordenamiento de las cadenas livianas
En este proceso también se lleva a cabo la exclusión alélica.
Como existen dos tipos de cadenas livianas μ y λ otro mecanismo denominado
exclusión isotópica será activado. Su proceso de regulación no se conoce.
Prueba final de las células B inmaduras

Finalmente la cadena ligera se une con la cadena pesada y se expresa la IgM

en la superficie celular, la célula preB se convierte en una célula B inmadura
Antes de ser exportada, la célula se prueba para autoreactividad o reactividad
a antígenos propios. Esto garantiza que la célula será tolerante a sus propios
antígenos. La célula finalmente madura es lanzada al torrente sanguíneo. Esta
es una tolerancia central
Tolerancia central
y exportación de
las células B
maduras.
Pasos adicionales de maduración

Se requieren pasos adicionales de maduración en los órganos linfoides

Tolerancia periférica: en el bazo las células son fuertemente expuestas a
antígenos propios Una señalización multivalente producirá la apoptosis celular.
Etapas finales en la maduración de células
B

La mayoría de células B terminan su proceso de maduración en los folículos

del bazo por medio de la señalización TNF y BAFF (B-cell activating factor of
the tumor necrosis factor family)
Desarrollo de los linfocitos T

Las células progenitoras de linfocitos T migran hacia el bazo donde maduran.

El desarrollo de células T es similar en varios aspectos al de las células T
incluyendo el reordenamiento de genes de receptores de antígenos, la prueba
secuencial del reordenamiento de genes y el ensamblaje del receptor.
Linajes de células T

Una diferencia importante es el desarrollo de dos linajes de células T que

expresan receptores de antígenos codificados por distintos genes: γ:δ y ά:β
El compromiso por el linaje T está señalizado por el receptor Notch
Señalización de los linfocitos T y su
diferenciación en linajes
Codificación del receptor T

El receptor de células T TCR es un heterodímero compuesto por cadenas alfa

y beta altamente variables además de una cadena invariable CD3-
En forma similar a lo que ocurre en los linfocitos B, cada cadena tiene 2
dominios un dominio variable V y un dominio constante. La región variable es
la que reacciona y se caracteriza por su diversidad. Los mecanismos de
expresión de genes son similares a los de células B.