ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL AGRONOMIA- OXAPAMPA DESARROLLODE LA SEMILLA
La formación de la semilla tiene tres características
esenciales: 1.el desarrollo del embrión 2.el desarrollo de las sustancias de reserva 3.el desarrollo de la cubierta seminal En los miembros de las gramineae, por ejemplo, las sustancias de reserva se acumulan en el endospermo, en tanto que en otras especies, como el girasol y las leguminosas, la acumulación se produce en los cotiledones (“semilla no endospermicas”). Puede considerarse que el Se ha utilizado una serie de técnicas desarrollo del embrión de las genéticas, biológico molecular y angiospermas tiene lugar en bioquímica para estudiar la embriogénesis tanto en la planta cuatro fases: intacta como in vitro con (1)establecimiento de embriogénesis somatica. polaridad, que conduce ala Los estudios pueden clasificarse en: formación de los ápices (a) acumulacién diferencial de una caulinar y radicular; serie de metabolitos, especialmente proteinas, lipidos y carbohidratos, (b) (2)diferenciación celular. cambio de la actividad fisiologica, como la respiracion y la respuesta a (3)desecación y letargo. reguladores del crecimiento durante (4)germinación. el desarrollo, (c) expresion génica especifica de estadio. Representacion semiesquematica de estadios de la embriogénesis cigotica y somatica de zanahoria .las células inividuales solo se han dibujado en los estadios mas tempranos EXPRESION GENICA DURANTE LA EMBRIOGENESIS
El estudio de la expresión Los objetivos de los estudios
génica diferencial durante la de biologia molecular son embriogénesis requiere la generalmente identificar y construcción de bibliotecas de caracterizar qué genes se genes de estadios específicos expresan en estadios del desarrollo. Existen métodos especificos del desarrollo, con para enriquecer la poblacion el proposito de (a) reconocer de células cultivadas en los elementos que controlan el estadios especificos, como son establecimiento de la las técnicas de cribado o la polaridad, la delineasion de induccion de un cierto grado capas de tejidos y la de desarrollo sincronico segregacion de los apices meristematicos y (b) identificar los marcadores caracteristicos de las células proembrionarias. Sin embargo, se detectaron antigenos raros que eran especificos del embrion y que no persistian ni siquiera en los tejidos diferenciados de la plantula (hojas, peciolos y raices). Se encontro también que los niveles de transcritos que codificaban las proteinas especificas del embrion eran varias veces superiores en el embrion que en las céIuIas desorganizadas. Aunque los anticuerpos frente a dos de las tres proteinas de la zanahoria no dieron reaccion cruzada con los extractos de cualquiera de Ios otros tejidos, se encontro que todos los tejidos producian una proteina de 50 kDa que era inmunologicamente identica a uno de los antigenos de zanahoria. Es interesante observar que el nivel de esta proteina estaba correlacionado con la capacidad de los otros tejidos para llevar a cabo la embriogenesis, siendo por ello util para posteriores análisis. MUTANTES EMBRJONARIOS LETALES Un procedimiento altemativo para seguir los cambios especificos de estadio de la expresion génica consiste en caracterizar los mutantes que no llegan a desarrollar embriones normales. En vegetales, la mayor parte de la investigacion acerca del control genético del desarrollo del embrion se ha llevado a cabo con mutantes de maiz con semillas defectuosas, con mutantes embrionarios letales de Arahidopsis thaliana y con lineas celulares variantes de zanahoria que no completan la embriogénesis somética (Meinke, 19136). Se ha conseguido ya un gran numero de mutantes embrionarios letales, que estén descritos con mas detalle por Meinke (1986). Probablemente, Arabidopsis thaliana sea mucho mas asequible a la investigacion molecular y ha demostrado ser un sistema experimental excelente por varias razones. El ciclo vital de la planta es muy corto, del orden de 5-6 semanas, y puede cultivarse a elevadas densidades en un medio nutritivo determinado, lo que permite la investigacion de un elevado numero de mutantes potenciales. productos de reserva
La biologia molecular de la acumulacion de producios de
reserva de la semilla ya se ha discutido brevemente en relacion a la mejora de la calidad nutritiva y tecnologica. Algunas proteinas de reserva, como los inhihitlores de la quimotrip- sina y la -amilasa de la cebada se sintetizan tanto en el embrion como en el endospermo, pero las hordeinas de la cebada, las o-gIiadinas del trigo y las zeinas del maiz son especificas del endospermo. Desarrollo del fruto Durante el desarrollo de la semilla, la pared del ovario sufre una serie de cambios que culminan con la maduración del fruto, que actúa tanto protegiendo como propagando las semillas. El patron preciso de desarrollo del fruto varia ampliamente de una especie a otra, pero el producio final puede clasificarse en un sentido amplio y en términos morfologicos como fruto seco o carnoso. La mayoria de los estudios recientes del desarrollo han utilizado los frutos carnosos como sistemas experimentales por una serie de razones: se dispone de mutantes de desarrollo de algunas especies; algunos frutos muestran cambios drasticos en la fisiologia metabolica durante su desarrollo y muchos tienen importancia comercial. Realmente es cierto que estan implicadas facetas de la senescencia, pero las técnicas de la biología molecular han demostrado que la maduracion se encuentra bajo control genético y se caractcriza por la sintesis especifica de estadio de una serie de moléculas y por la expresion coordinada de genes especificos (B md y, 1987). Durante las fases tempranas de la formacion del fruto se produce un rapido incremento de las tasas de división y/o de expansion celular, con acumulación de sustancias de reserve como el aImidon o las grasas. Cicrios frutos muestran un incremcnio en la actividad respiratoria durante la maduracion, denominada «climaterio». Las frutas climatéricas producen también de modo característico etileno durante la maduración y actualmente se cree que es el etileno el que induce el aumento en la actividad respiratoria de estas frutas. La aplicación exógena de etileno adelanta tanto el comienzo de la maduracicin como la inducción de la síntesis de mas etileno. Los mutantes rin y nor tienen un interés especial relacionado con el papel del etileno en la maduración. Las plantas homocigóticas para cualquiera de estas dos mutaciones recesivas, producen frutos que cambian de color (volviéndose amarillos (rin) o naranja palido(nor), pero que no muestran ni un climaterio respiratorio significativo, ni la producción de etileno, ni el ablandamiento de la pared caracteristicos del tipo salvaje. En los mutantes rin, el etileno exógeno induce la actividad de la enzima formadora de etlino, pero no de la ACC sintetasa . Otros mutantes, como el “neverripe”, “greenripe”y “alcobaca”,maduran muy lentamente o de modo incompleto y de nuevo el etileno exógeno no acelera el proceso. Germinación de la semilla y movilización de sustancias de reserva
Si existe agua disponible, la semiIla desecada se embebera y la germinación
tendra lugar con la emergencia de la radicula y de el/los cotiledón/es si además hay un aporte adecuado de oxigeno (que permita la respiracicin aerebica) y unas temperaturas lo suficientemente elevadas. Las semillas de las especies que viven en ambientes humedos, como el arroz (Diyzn snivn) y las tifas (Typlia latifolia), no necesitan niveles altos de oxigeno para germinar. Puede suceder que la germinación de una semilla viable (viva) no se produzca incluso en presencia de agua, oxigeno y calor y en esta situación la sernilla se describe como en «letargo». El letargo puede, no obstante, superarse mediante factores ambientales específicos como la luz o las bajas temperaturas y una vez que la plumula haya atravesado el suelo podra comenzar el crecimiento autotrofo. La información acerca de la biología molecular de la germinación es escasa y todavía esta lejana la identificación de los genes reguladores y la manipulación del proceso. Se sabe que el fitocromo es uno de los factores que desempeñan un papel en la inducción de la germinación de las semillas fotosensibles y mas adelante consideraremos el papel de este pigmento en el desarrollo. La terminación de la maduración de la semilla se caracteriza por una rápida deshidratación de los tejidos, que tienen como consecuencia cambios profundos de la organización subcelular, acompañada de un descenso brusco de las tasas de sintesis proteica y de respiración. Debe observarse que la pérdida de agua no es total, ya que los granos de cereal tienen un contenido de humedad del 10-15%P/P incluso cuando están «secos». Aunque en algunas semillas pueda producirse una pérdida de actividad de la maquinaria de síntesis de proteínas y aminoácidos, este fenómeno no es universal puesto que la semilla de trigo madura require solo mRNAs traducibles para llevar a cabo la sintesis de proteínas y se ha aprovechado como sistema de traducción in vitro (Dure, 1985). La estructura de la semilla de cebada la capa de aleurona esta caracterizada per las células de pared engrosada que contienen granulos de proteína (los «granos de aleurona»). Las paredes de las células de la aleurona son raras porque estan compuestas principalmente por arabinoxilano (85º/o) y solo un 8% de celulosa y un 6% de proteina, siendo su estructura similar a la de las paredes de las células endespérmicas de trigo. Los primeros estudios demostraron que el almidon aislado de endospermo de cebada se hidrolizada si se incuhaha con embriones aislados en un recipiente de cultivo. El fitocromo
EI fitocromo es un sistema de pigmentos que actua
predominantemente en el intervalo del rojo/rojo lejano del espectro. Otros pigmentos sensores incluyen el «criptocromo» (que opera en el intervalo del azul/UV-A) y eI «fotorreceptor UV-B», cuyo espectro de accion muestra un pico agudo a 290 nim. Bioquimicamente, el fitocromo es una cromoproteina constituida por dos formas distintas: P , que absorbe luz de 650 nim de longitud de onda, pasando de un estado metabolicamente inactivo a P , que es la forma activa («r» = rojo; «fr» = rojo lejano) La molécula fitocromica ha sido objeto de estudios biologico moleculares con eI proposito de conocer y posiblemente modificar su regulación. Se ha aislado y purificado el fitocromo a partir de una serie de tejidos tanto por métodos convencionales como por técnicas de inmunoprecipitacion. Esta compuesto por dos monomeros idénticos, cada uno de 124 kDa con un total de 1.100 aminoéci- dos. La abundancia del fitocromo esta condicionada en gran medida por el estado de desarrollo de la planta y por las conGiciones de luz ambiental