Cocos y Bacilos Gram negativos aerobios:

Familia Brucellaceae

Prof. Olga Francia Arana

Asignatura: Bacteriología
 Género Brucella.- Clasificación
 Dominio : Bacteria
Filo : Proteobacteria
Clase : Alfa Proteobacteria
Orden : Rhizobiales
Familia : Brucellaceae
Género : Brucella
Especie : B. abortus
B. canis
B. melitensis
B. neotomae
B. ovis
B. suis
B. pinnipediae
B. cetaceae
B. microti
 Género: Brucella
 Se conocen pocas especies de Brucella, y se diferencian ligera-
mente en la especificidad de huésped:
 B. melitensis infecta cabras y ovejas,
 B. abortus infecta vacas,
 B. suis infecta cerdos,
 B. ovis infecta ovejas,
 B. neotomae
 B. pinnipediae, recientemente descubierta en mamíferos marinos

 La brucelosis, es una enfermedad zoonotica

 Es transmitida por:
 Ingestión de comida infectada,
 Contacto directo con un animal infectado
 Por inhalación de aerosoles.
 Por exposición ocupacional: exposición al ganado, ovejas, cerdos, pero
también por el consumo de productos lácteos no pasteurizados
Transmisión de Brucella
 Características del Género Brucella
A la luz reflejada las colonias
son brillantes, ligeramente
opalescentes y de color gris
azulado
 Colonias de Brucella
melitensis-Agar sangre
Continúa

 En Agar sangre no produce hemólisis, en agar Mac Conkey

crecen poco y no fermentan la lactosa.
 Las cepas rugosas (R), en TSA, producen colonias semejantes
en la forma pero varían considerablemente en tamaño, color,
consistencia y textura
 En Medio TSI- hay ausencia de ácido y gas
 En agar Citrato, no emplea este substrato como fuente de
carbono, por lo que no se modifica el color verde
 En Medio de SIM.- se observa la inmovilidad de las brucelas y
la ausencia de indol y H2S
 En medio urea se mide el tiempo en que vira el medio a rojo,
debido a la producción de ureasa.
Brucella suis produce la mayor cantidad de ureasa en un tiempo
muy corto comparada con las demás especies que producen
menor cantidad.
 Crecimiento en presencia de colorantes: tionina y fucsina básica
 Estructura y composición química

 La estructura celular de Brucella es semejante a la estructura

clásica de las bacterias Gram negativas. Al microscopio electrónico
se distinguen, de fuera hacia dentro:
La envoltura celular, integrada por:
La membrana externa,
El espacio periplásmico
La membrana citoplasmática rodea al citoplasma, es una
bicapa de fosfolípidos y proteínas de diversos tipos, es muy
vulnerable a los cambios osmóticos del medio ambiente.
Entre la membrana citoplásmica y la membrana externa se
encuentra el espacio periplásmico y la capa de peptidoglucano.
La región apolar (hidrofóbica) de la membrana con un grosor de
4.5 nm, forma una barrera estructural y funcional entre el
periplasma y el exterior de la célula.
Pared celular de Brucella
Continúa

 La supervivencia de la bacteria ya sea en el medio ambiente o

en el huésped, depende de la integridad de su membrana
externa ya que si ésta sufriera algún daño, la bacteria no
sobreviviría por mucho tiempo.

 En la membrana externa (ME) de Brucella, se encuentra el

lipopolisacárido (LPS), abundante y antigénico, y se le conoce
también como endotoxina

 Las propiedades bioquímicas y biológicas de la célula son

diferentes a las del resto de bacterias Gram negativas,
especialmente en cuanto al contenido de ácidos grasos del
lípido A de la membrana extena. La endotoxina de Brucella
presenta baja actividad endotóxica aunque conserva sus
propiedades inmunogénicas.
Continúa

 Las cepas de B. melitensis, B. abortus, B. suis y las brucelas

marinas en fase lisa (S), poseen el S-LPS que está constituido de un
lípido A, formado de diferentes ácidos grasos; una región central
(núcleo) que contiene el ácido 2-ceto 3-desoxioctulosónico, glucosa,
manosa y quinovosamina; y una cadena O, proyectada hacia el
exterior de la ME, constituida de un homopolímero de alrededor de
100 unidades de 4-formamido-4,6-didesoximanosa (perosamina)

 La estructura del LPS de cepas rugosas (R-LPS), es básicamente

similar al S-LPS, excepto por la cadena O, que está ausente o
reducida a unos pocos residuos. Por lo que, la especificidad del R-
LPS estará determinada por el polisacárido del núcleo. La falta de
cadena O modifica la superficie bacteriana de tal modo que las
brucelas no forman suspensiones estables y autoaglutinan
Continúa

 La existencia de otros polisacáridos: el hapteno nativo (HN) y el

polisacárido B (PB). Los antígenos polisacarídicos de impor-
tancia serológica en Brucella son: los polisacáridos A y M y la
forma libre de la cadena O.

 Las proteínas de membrana externa (OMPs) son de gran

interés porque las han relacionado con la protección.
 Estructura antigénica

 Brucela, aglutina con sueros monoespecíficos.- Se emplean el suero

monovalente A y monovalente M. El R se utiliza solo cuando se
sospecha de B. canis o de otra especie rugosa natural. Al realizar esta
prueba es muy importante tomar en consideración lo siguiente:

• B. abortus, puede contener antígeno A (biovar 1,2,3 y 6) o antígeno

M (biovares 4, 5 y 9) en forma de antígenos dominantes o ambos
antígenos A y M ( biotipo 7 ) en forma igualmente dominante.

• B. suis, puede tener antígeno A (biotipos 1, 2 y 3) como antígeno

dominante o ambos A y M (biotipo 4).

• B. melitensis, puede tener antígeno M (biotipo 1) o antígeno A (bio-

tipo 2) como antígenos dominantes o ambos A y M (biotipo 3). Por
consiguiente, cualquier cepa que aglutine con suero mono específico
M, no es necesariamente B. melitensis; éste es un error que frecuen-
temente se comete, por desconocer la composición antigénica de los
diferentes biovares de Brucella.
 MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES
PARTICULARES DE CULTIVO

 Como son bacterias intracelulares, necesitan requerimientos nutri-

cionales complejos para crecer. Hay Brucellas que se van a desa-
rrollar bien en medios clásicos como AS y ACH.

 Los medios de cultivo utilizados son:

 Medios líquidos: Caldo tripcasa-soja; Caldo Brucella.
 Medios sólidos: Agar tripcasa-soja; Agar Brucella.
 Medios selectivos (contienen antibióticos) : Modificado Thayer-
Martin.
 A todos los enfermos sospechosos de infección por Brucella se les
debe realizar hemocultivos seriados,
 Las técnicas de hemocultivo son:
 Técnica de Castañeda: Se utiliza un medio bifásico (liquido-
solido) en el mismo frasco. El medio liquido permite el enrique-
cimiento de las Brucellas que se encuentran en la sangre y el
medio sólido sirve para las resiembras
 Factores de Patogenicidad

 Las especies de Brucella son patógenas intracelulares facultativas,

su virulencia está relacionada con la capacidad que poseen para:
 Adherirse, penetrar y multiplicarse en una gran variedad de
células eucarióticas,
 Resistir el efecto bactericida de los componentes del suero
normal tanto fagocíticas como no fagocíticas.

 La localización intracelular las mantiene protegidas de los antibióti-

cos y de factores bactericidas del plasma como complemento y
anticuerpos, lo que determina la naturaleza crónica de la infección.
 La capacidad de producir ureasa aparentemente juega un papel en
la colonización del huésped. La enzima degrada la urea modifican-
do el pH en el sitio en donde se encuentre la bacteria
Continúa

 Brucella se adhiere con cierta facilidad a la superficie de las

mucosas debido a su gran hidrofobicidad, ya que no posee ni
fimbrias ni cápsula; ambas características favorecerían la
colonización y la generación de la enfermedad.

 Alguno de sus componentes celulares con función de adhesina,

promovería específicamente la adherencia a receptores
moleculares específicos de la célula del huésped (FcR, C3bR y
manosa). La unión sería necesaria para inducir una serie de
señales Intracelulares, que faciliten la colonización e invasión
celular, en este fenómeno estarían involucradas la actina y los
microtúbulos. En el caso de los linfocitos humanos, Brucella se
une a la membrana celular a través de moléculas semejantes a
lectinas.
Continúa

 Cuando son fagocitadas por células polimorfonucleares (PMN) o por

células fagocíticas mononucleares, las brucelas se multiplican dentro de
fagosomas, en el interior de los cuales, despliegan diversos mecanismos
que bloquean o suprimen la respuesta bactericida de estas células.

 B. abortus escapa a la muerte dentro de los PMN, al producir gua-nosina

5’ monofosfato (GMP) y adenina que inhiben la fusión fago-lisosoma, la
desgranulación y la activación del sistema mieloperoxidasa y la
producción del factor de necrosis tumoral. Además, Brucella produce Cu-
Zn superoxido dismutasa, que probablemente participa en las fases
tempranas de la infección intracelular.

 Dentro del macrófago, la bacteria debe de enfrentarse a condiciones

adversas como el pH, falta de nutrientes y presencia de intermediarios
reactivos del oxígeno. Brucella debe resistir estas condiciones de estrés,
para poder establecerse en el retículo endoplásmico
Infección de macrófago
Continúa

 La supervivencia de Brucella dentro del macrófago, se ha

asociado con la síntesis de enzimas antioxidantes (KatE y SodC)
y proteínas de variados pesos moleculares: 17, 24, 28, 60 y 62
kDa.

 La mayoría de los casos de brucelosis humana, están

relacionados al consumo de leche, queso fresco, crema y otros
derivados sin pasteurizar. El periodo de incubación suele ser
variable, en general, de 2 a 3 semanas, aunque puede
prolongarse hasta algunos meses. éste depende de: la virulencia
de la cepa de Brucella, la dosis y del estado nutricional e inmune
del individuo.

 Capacidad de vivir dentro de las células.