INGENIERÍA BIOQUÍMICA

Mario Arias Zabala
Facultad de Ciencias Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín 2007

PROGRAMA RESUMIDO
1. Breve reseña histórica 2. Generalidades de los Procesos Bioquímicos 3. Procesos Fermentativos 3.1. Estequiometría de procesos fermentativos 3.2. Cinética de procesos fermentativos 3.3. Aspectos termodinámicos 4. Técnicas del cultivo celular 4.1. Cultivo discontinuo (batch) 4.2. Cultivo alimentado (fed batch) 4.3. Cultivo continuo 5. Agitación de Medios de Cultivo 6. Aireación de Medios de Cultivo 7. Esterilización 8. Escalado

BIBLIOGRAFÍA (Libros)
1. Doran, P. : Bioprocess Engineering Principles. Academic Press. 1995. 2. Blanch, H. and Clark, D.: Biochemical Engineering. Marcel Dekker. 1997. 3. Casablancas, F. y López, J. (Editores): Ingeniería Bioquímica. Editorial Síntesis.1998. 4. Bailey, J. and Ollis, D.: Biochemical Engineering Fundamentals. McGraw-Hill. 1986. 5. Quintero, R.: Ingeniería Bioquímica. Editorial Alhambra. 1981. 6. Bu¶Lock, J. y Kristiansen, B.: Biotecnología Básica. Edit. Acribia. 1991. 7. Stanbury, P., Whitaker, A. and Hall, S.: Principles of Fermentation Technology. Edit. Butterworth Heinemann. 1995. 8. Nielsen, J. and Villadsen, J.: Bioreaction Engineering Principles. Plenum Press. 1994. 9. Wang, D. y otros: Fermentation and Enzyme Techonology. John Wiley and Sons. 1979. 10. Aiba, S., Humphrey, A. and Millis, N.: Biochemical Engineering. Academic Press. 1973. 11. Shuler, M. and Kargi, F.: Bioprocess Engineering: Basic Concepts. Prentice Hall. 1992.

BIBLIOGRAFÍA (Revistas)
1. Biotechnology and Bioengineering 2. Biotechnology Progress 3. Journal of Fermentation and Bioengineering 4. Biochemical Engineering Journal 5. Chemical and Biochemical Engineering Quarterly 6. The Chemical Engineering Journal and the Biochemical Engineering Journal 7. Process Biochemistry 8. Applied Biochemistry and Microbiology 9. Applied Microbiology and Biotechnology 10. Journal of Applied Microbiology 11. Letters in Applied Microbiology 12. American Journal of Biochemistry and Biotechnology 13. Biotechnology Advances 14. Critical Reviews in Biotechnology 15. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology

AREAS DE INVESTIGACIÓN EN INGENIERÍA BIOQUÍMICA

‡ Optimización de procesos existentes. ‡ Desarrollo de nuevos procesos con base en células microbianas modificadas . genéticamente, células vegetales y células animales. ‡ Procesos con células y enzimas inmovilizadas. ‡ Nuevos diseños de biorreactores. ‡ Desarrollo de biosensores y sensores virtuales. ‡ Monitoreo y control asistido por computador de bioprocesos.

o. no surgen espontáneamente. incluyendo la caja de petri. 1862 Pasteur postula que todos los procesos fermentativos resultan de actividad microbiana y descubre los m. Schwann y Kutzing proponen. 1883 Koch introduce las técnicas del cultivo puro. desmintiendo que los compuestos orgánicos sólo pueden ser sintetizados por organismos vivos. 1675 Leeuwenhoek mejora los lentes del microscopio y descubre formas de vida unicelular. 1828 Wohler sintetiza la urea. que las levaduras son plantas y causan la fermentación. 1837 Cagniar. 1876 Tyndall desarrolla el método de esterilización discontinua por calentamiento.BREVE RESEÑA HISTÓRICA DE LA MICROBIOLOGÍA 1665 Hook describe la estructura celular del corcho. inventadas por Ricardo Petri. anaerobios. 1750 Spallanzani aporta evidencias de que los m. .o. independientemente.

acetona. . . 1975 ± . láctico). gasohol. Era post antibióticos: Aminoácidos. Era de los antibióticos: Penicilinas (tecnología de fermentación sumergida). . . otros alimentos fermentados. tratamiento aerobio de aguas . tecnología del ADN recombinante (ingeniería genética). productos lácteos . enzimas (detergentes). transformaciones microbiológicas de esteroides. proteína unicelular (SCP). . . tratamiento anaerobio de aguas residuales (biogás). residuales. butanol. acético. insulina humana.BREVE CRONOLOGÍA DE LA BIOTECNOLOGÍA ± 1865 Era pre-Pasteur: Bebidas alcohólicas (cerveza. glicerol). . vino). 1940 ± 1960 . tecnología de células y enzimas inmovilizadas. (quesos. vacunas contra virus. tecnología de la estructura de la célula animal. polisacáridos bacterianos (goma xantana). gran variedad de antibióticos. 1960 ± 1975 . orgánicos (cítrico. ác. Era de la nueva biotecnología: Tecnología de los hibridomas. yogurt). anticuerpos monoclonales. 1865 ± 1940 Era Pasteur: Solventes orgánicos (etanol.

. Este conjunto de operaciones constituyen los llamados Bioprocesos. Procesos Bioquímicos.Generalidades de los procesos biológicos La Ingeniería Bioquímica se ocupa del estudio del conjunto de operaciones que hacen uso de células (microbianas. para la obtención de bienes (productos útiles) o servicios (tratamiento de desechos contaminantes o aguas residuales) en condiciones económicas. Procesos Biotecnológicos o Procesos Biológicos. vegetales o animales). o de componentes de dichas células (enzimas).

Biocatalizador: Células. Son procesos autocatalíticos. ‡ Procesos Fermentativos: Utilizan células libres en suspensión o inmovilizadas en soportes físicos. Son procesos catalíticos. tejidos celulares u órganos. enzimas o complejos enzimáticos.Bioprocesos ‡ Procesos Enzimáticos: Utilizan enzimas o complejos enzimáticos aislados de las células. como agentes de la biotransformación. libres en suspensión en un medio líquido o inmovilizadas en soportes físicos. .

Proceso Enzimático: S + E P (Producto) + E (Enzima) (Proceso Catalítico) (Sustrato) (Enzima) S (Sustrato) E (Enzima) P (Producto) Proceso Fermentativo: S (Sustratos o Nutrientes) + Xo (Biomasa o Inóculo) X + P (Productos o Metabolitos) (Biomasa) (Proceso Autocatalítico) .

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K u otros metales. Normalmente es la fuente de C y energía. hidrocarburos. etc.). hormonas. sacarosa. caldo peptonado (hidrolizado de proteínas). lactosa. etc. aire enriquecido con O2. celulosa. . amoniaco. harinas de soya o pescado. almidón. aunque en algunos casos puede ser la fuente de N o el O2. ‡ Oxígeno (procesos aerobios): aire. vitaminas. úrea. ‡ Fuente de nitrógeno: nitrógeno elemental (N2). precursores. Sustrato limitante: nutriente presente en menor proporción estequiométrica. etc. sales de amonio. ‡ Micronutrientes: sulfatos (S) y fosfatos (P) de Na. extracto de levadura. oxígeno puro.Nutrientes: ‡ Fuente de carbono y energía: carbohidratos (glucosa. etc.

en condiciones económicas. que contiene los nutrientes necesarios para las células. Vi. ‡ Medios sintéticos o definidos: composición exactamente definida. normalmente acuosa. la fermentación de un volumen. suero de leche. Comúnmente: Vi = 0.Inóculo: volumen. normalmente son medios selectivos (medios de laboratorio). de suspensión de células viables. V.: melazas.05-0. Ej.1 V Medio de cultivo: solución. dado de medio. de concentración adecuada capaz de garantizar. licor de cocción de maíz. ‡ Medios complejos: composición no conocida con exactitud (medios industriales). .

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homogenización. nivel de espuma. fuerza iónica. Fermentación: conversión de los componentes del medio en biomasa y productos o metabolitos. agitación. concentraciones de O2 y CO2. pH. etc. . por la acción del biocatalizador (células o biomasa).Preparación de medios ‡ Tipo y cantidad de nutrientes a emplear (formulación) ‡ Esterilización ‡ Ajuste de condiciones ambientales (T.) Control del proceso: T. pH.

adsorción. etc. destilación. extracción. disrupción celular. secado. intercambio iónico. pH. etc. separación con membranas. precipitación. filtración. cristalización. cromatografías.Optimización del proceso ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Tipo de fermentador Modo de operación Tipo de células Medio de cultivo Condiciones de operación más adecuadas (T. . agitación.).) Control de variables más importantes Separación y purificación del producto (Down stream processing) Conjunto de operaciones de separación y purificación de la biomasa o de los metabolitos de interés (centrifugación.

Aspectos a estudiar en un bioproceso ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Estequiometría Cinética Termodinámica Fenómenos de Transporte Dinámica y Control Economía .

ESTEQUIOMETRÍA DE PROCESOS FERMENTATIVOS Objetivo Establecimiento de relaciones cuantitativas entre los distintos componentes del proceso. células o biomasa (X) ‡ Productos o metabolitos (P) Aplicaciones ‡ Formulación de medios de cultivo ‡ Requerimientos de enfriamiento de biorreactores ‡ Control por computador de biorreactores . a saber: ‡ Sustratos o nutrientes (S) ‡ Biocatalizador.

Enfoques: Molecular o microscópico: supone el conocimiento del conjunto de reacciones químicas que constituyen el metabolismo celular (modelos de caja blanca) Ingeniería Metabólica. .

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Diseño de Medios de Cultivo a. Restricciones técnico-económicas  Disponibilidad y costos de las materias primas  Facilidad de recuperación de productos  Control de contaminación . SCP)  Mantenimiento celular c. Requerimientos Nutricionales y Ambientales  Necesidades elementales  Necesidades de nutrientes específicos  Requerimientos energéticos  Necesidades ambientales del cultivo b. Objetivos del proceso  Obtención de productos  Producción de biomasa (proteína unicelular.

relaciones estequiométricas empíricas y en el conocimiento de la composición elemental de la biomasa.Enfoque Macroscópico No considera los procesos que a nivel molecular ocurren en las células (modelos de caja negra). . Algunos nutrientes pueden ser limitantes o algunos productos pueden ser inhibitorios. El número de nutrientes en el medio usualmente es muy grande y no todos pueden ser incluidos en los cálculos. No se tienen en cuenta los mecanismos o rutas de reacciones que el sistema emplea. Es aplicable para propósitos ingenieriles como formulación de medios y control de biorreactores. Se basa en balances elementales de materia. Se requiere conocer el contenido celular de todos los elementos para los cuales se deban hacer los cálculos (composición elemental de la biomasa). Características del enfoque macroscópico ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Se deben cumplir los balances de masa y energía.

Conocida la composición elemental de la biomasa. NlOmHn: fórmula genérica para la fuente de nitrógeno. C H O N : ³fórmula empírica´ de la biomasa. es posible asociarle una ³fórmula empírica´. .Ecuación genérica del proceso: ‡ Fuente C + Fuente N + O2 ‡ CaHbOc + NlOmHn + O2 Células + Productos + CO2 + H2O C H O N + CjHvOz+ CO2 + H2O Donde: CaHbOc: fórmula genérica para carbohidratos o hidrocarburos. CjHvOz: fórmula genérica para el producto extracelular.

factores ambientales. Zn. etc. Al. Co. V. Ca2+. ‡ Elementos de la materia orgánica: C.Composición elemental de microorganismos ‡ Sólo 22 elementos químicos. ‡ La composición elemental de las células varía con la especie. B. Fe. Mg2+. Cl‡ Elementos traza: Mn. K+. el sustrato limitante. Si X: Elementos presentes sólo en algunas especies. Mo. P ‡ Iones monoatómicos: Na+. O. I. son componentes esenciales de los organismos vivos. . Cu. la rata de crecimiento celular. N. H.

295N0.Ejemplo: Composición elemental de la bacteria Escherichia coli. Ejemplo: Determine la ³fórmula empírica´ de un microorganismo que tiene la siguiente composición porcentual en peso seco: *10-3 Fórmula empírica: CH1.251 .936O0.

Solución: ‡ ‡ ‡ ‡ Balance de C: Balance de H: Balance de O: Balance de N: a=1+e ax + cl = + 2d ay + 2b + cm = + d + 2e cn = (Ec. 2) (Ec. 1) (Ec. 4) Conocidas las fórmulas empíricas de las fuentes de carbono y nitrógeno y de la biomasa.Ejemplo: Considere la siguiente ecuación química genérica. . el sistema tendría 4 ecuaciones y 5 incógnitas (los 5 coeficientes estequiométricos). requiriendo otra ecuación para su solución. 3) (Ec. correspondiente al crecimiento celular sin formación de productos extracelulares (metabolitos externos): a CHxOy + b O2 + c HlOmNn CH O N + d H2O + e CO2 x: Coeficientes estequiométricos (5 incógnitas) Establezca las ecuaciones de balance elemental del proceso.

66O0. si la fuente de carbono es el hexadecano. Estas relaciones se conocen genéricamente como Factores de Rendimiento.27N0. .20. la fuente de nitrógeno es amoniaco y la biomasa tiene la fórmula empírica CH1. también conocido como Cociente Respiratorio (RQ). ‡ Ejercicio: Determine los coeficientes estequiométricos del proceso anterior. Se sabe además. por determinación experimental. que el factor de rendimiento Moles CO2 formadas/Moles O2 consumidas.La otra ecuación generalmente es una relación empíricamente obtenida entre algún par de coeficientes estequiométricos.43 moles CO2/mol O2. es 0.

g CO2/g O2). ‡ Yc/o : Rendimiento de CO2 con respecto al oxígeno (RQ). (moles biomasa/mol oxígeno. (moles CO2/mol O2. (moles producto/mol biomasa. . g biomasa/g sustrato). g producto/g sustrato). ‡ Yx/o: Rendimiento de biomasa con respecto al oxígeno. (moles producto/mol sustrato. g producto/g biomasa). ‡ Yp/x: Rendimiento de producto con respecto a la biomasa. (moles biomasa/mol sustrato.Otros factores de rendimiento ampliamente usados ‡ Yx/s: Rendimiento de biomasa a partir del sustrato. ‡ Yp/s: Rendimiento del producto a partir del sustrato. g biomasa/g oxígeno).

podemos definir: (¨F/¨G) = dF/dG = (dF/dt)/(dG/dt) = rF/rG = YF/G (Rendimiento ¨G 0 Instantáneo) rF.Rendimiento Global y Rendimiento Instantáneo YF/G = ¨F/¨G (Rendimiento Global) ¨F. Para un reactor discontinuo (batch). de volumen constante. en el cual la reacción química entre F y G es la única fuente de variación de sus cantidades. Notas  Por definición. los factores de rendimiento son siempre positivos. ¨G: Variaciones en las cantidades de F y G en un intervalo finito de tiempo. rG: Ratas volumétricas de reacción de F y G.  YF/G YFG Lim .

. donde los ¨¶s son los cambios medidos u observados en las cantidades de F y G en un intervalo dado de tiempo. Rendimiento Observado: Dado por la relación ¨F/¨G. Representa el máximo rendimiento posible. sustrato). Ejemplo: Considere el proceso fermentativo de producción de biomasa dado por la ecuación: S X ‡ ¨X: Variación medida u observada en la cantidad de biomasa. Y¶XS = ¨X/-¨ST (Rendimiento observado de biomasa con respecto al .Rendimiento Teórico y Rendimiento Observado ‡ Rendimiento Teórico: Dado por la relación estequiométrica existente entre las sustancias relacionadas en el factor de rendimiento. ¨ST: Variación total medida u observada en la cantidad de sustrato.

transporte activo de sustancias a través de membranas. . Sustrato realmente utilizado para crecimiento celular. entonces.). sustrato). Como ¨SC < ¨ST . hay formación de productos extracelulares: ¨ST = ¨SC + ¨SM + ¨SP Donde: ¨SP: Sustrato consumido para la formación de productos extracelulares. además de la biomasa. YXS > Y¶XS Cuando. Por tanto: YXS = ¨X/-¨SC (Rendimiento Verdadero o Teórico de biomasa con respecto al . recambio de componentes celulares. . etc.En realidad: ¨ST = ¨SC + ¨SM ¨SC : ¨SM: . Sustrato utilizado para mantenimiento celular (movimiento.

niger.: Producción de etanol por S. Ej. cerevisiae. .: Producción de antibióticos por mohos. Ej.: Producción de ácido cítrico por A. Ej. Sólo para procesos de la primera clase se puede expresar la estequiometría del proceso por una única ecuación química que relaciona la biomasa acumulada con el sustrato consumido y el producto formado. ‡ El producto surge del metabolismo energético. ‡ El producto es un metabolito secundario.Estequiometría del crecimiento celular con formación de productos extracelulares Casos ‡ El producto principal aparece como resultado del metabolismo energético primario.

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o a partir de un balance de electrones. de la biomasa y el producto.Ecuación genérica: aCwHxOy + bO2 + cNlOmHn CH O N + dH2O + eCO2 + fCHvOz ‡ Conocidas las fórmulas empíricas de las fuentes de carbono y nitrógeno. O. H y N suministrarían 4 ecuaciones. . faltando dos ecuaciones para poder resolver el sistema. ‡ Las dos ecuaciones faltantes se pueden obtener a partir de factores de rendimiento. experimentalmente hallados. se tendrían 6 incógnitas (los 6 coeficientes estequiométricos). ‡ Los balances elementales de C.

N: -3 (NH3).Otra ecuación entre los coeficientes estequiométricos puede obtenerse de un balance de electrones. P: 5. Ejemplo: Considere el sustrato CwHxOyNz. H: 1. S: 6. 5 (NO3 -). Grado de Reducción ( ): número equivalentes de electrones disponibles en aquella cantidad del material que contiene 1 at-gr de C. H2O y compuestos que contienen N.2y ± 3z Grado de reducción ( s): (4w + x . Solución ‡ ‡ No. de electrones disponibles: 4w + x .2y ± 3z)/w . Calcule el número de electrones disponibles y el grado de reducción. C: 4. Electrones Disponibles: número de electrones disponibles en un compuesto para transferir al oxígeno en la oxidación del compuesto hasta CO2. 0 (N2). Se calcula a partir de la valencia de los distintos elementos que constituyen el compuesto. O: -2.

Así. P : Grado de reducción del producto. para la reacción química genérica de producción de biomasa con formación de producto extracelular: aCwHxOy + bO2 + cNlOmHn CH O N + dH2O + eCO2 + fCjHvOz el balance de electrones disponibles. con N2 como fuente de nitrógeno. X : Grado de reducción de la biomasa. es: aw Donde: : Grado de reducción del sustrato.Balance de electrones Los electrones disponibles para transferir al oxígeno son conservados durante el metabolismo. S S± 4b = X + fj P .

provee otra ecuación que relaciona los coeficientes estequiométricos (incógnitas) la cual. Demanda teórica de oxígeno El requerimiento de oxígeno de un proceso fermentativo. pudiendo estimarse su demanda teórica a partir de un balance de electrones. sumada a las ecuaciones de balance elemental y a los factores de rendimiento conocidos. Así. permitirá determinar los coeficientes estequiométricos.La ecuación de balance de electrones anterior. para la fermentación representada por la ecuación genérica: CwHxOy + aO2 + bNlOmHn Balance de electrones: w S cCH O N + dH2O + eCO2 + fCjHvOz ± 4a = c X +fj P La demanda teórica de oxígeno (dada por el coeficiente estequiométrico a) será: a = (w S ± c X ± f j P)/4 . está directamente relacionado con los electrones disponibles en el sustrato para transferir al oxígeno.

oxígeno. fj P/w S: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con el . c x /w S: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con la . En un proceso anaerobio en ausencia de formación de producto: c Por tanto: c = cmax = w S/ x x /w S= 1 . metabolito extracelular. biomasa.De la ecuación: obtenemos: Donde: a = (w S± c S) X± fj x P)/4 1 = ( 4a/w + (c /w S) + (f j P/w S) 4a/w S: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con el .

2. max = w S MX/ x MS Admitiendo como fórmula genérica para la biomasa la fórmula empírica: CH1.8 + 0.Donde: cmax : Máximo rendimiento teórico o termodinámico posible de biomasa. .2 (-3) = 4.2 fmax = w S/ Análogamente: j P fmax: Límite superior teórico de rendimiento del producto. MS: Masas moleculares de la biomasa y del sustrato respectivamente.5N0. MX. el grado de reducción de la biomasa ( x) sería: x = 4 + 1.5 (-2) + 0. Además: YXS = cMX/MS Donde: YXS: Rendimiento de biomasa a partir del sustrato.8O0. Por tanto: Yxs.

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