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Diseño de Procesos Para la Producción de Biocombustibles y

Productos de Alto Valor

“Modelado Microbiano en la Producción

de Biocombustibles”
División de Ciencias Naturales y Exactas
Posgrado en Ingeniería Química
Departamento de Ingeniería Química
 INTRODUCCIÓN 2

Modelado de Bioprocesos
- Balances de materia Diseño y Simulación
- Balances de energía - Diseñar equipos de Optimización
- Relaciones de proceso (Reactores,
equilibrio y/o columnas, - Maximizar la
separación intercambiadores de utilización de
- Cinética microbiana calor nutrientes de la
- Resolver el conjunto materia prima
de -Maximizar el
Ecuaciones crecimiento
diferenciales o Integro- microbiano
diferenciales -Minimizar costos de
producción
-Minimizar el impacto
 ETAPAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO 3

1 Fase de adaptación (Lag): No hay

incremento en el número de células pero
si cambia la masa celular. La bacteria se
prepara para hacer uso de los nutrientes
del cultivo.

2. Fase exponencial: El número y la

concentración celular incrementan
exponencialmente. La velocidad de
crecimiento en esta etapa es constante.

3. Fase estacionaria: No existe

crecimiento celular debido al agotamiento
de nutrientes esenciales o presenta
acumulación de compuestos tóxicos.

4. Fase de decaimiento o muerte: se

presenta la muerte celular, en donde el
número de células muertas se ira
incrementando.
 TIPOS DE MODELOS 4
La velocidad con la que ocurre una reacción biológica puede ser modelada asumiendo diferentes
hipótesis (modelos).

• Modelos segregados: Modelos complejos (Reconocen células viejas y jóvenes)

• Modelos no segregados: Célula promedio que representa a la población.
• Modelos Estructurados: Modelan a las células (biomasa) como un sistema de componentes
múltiples (ribosomas, enzimas, membranas
• Modelos no estructurados: todos los componentes celulares representan por única
concentración a la biomasa.
 EL MODELO DE MONOD (1950)
5
un modelo ampliamente utilizado para describir el crecimiento microbiano. El cual
desarrollado para el crecimiento de un solo microorganismo (Escherichia coli) creciendo en un
dio con un único sustrato orgánico limitante (glucosa).

mismo, la dinámica del crecimiento celular para biomasa y el decrecimiento del sustrato durant
ultivo en lote es descrito por las siguientes ecuaciones diferenciales:

 
 Donde:

: es la cantidad de biomasa en . [gr/L]

Velocidad de crecimiento microbiano [1/hr]
tiempo
condiciones iniciales de la biomasa y del sustrato.
es el rendimiento del sustrato limitante.

 
  ecuación de Monod (modelo de saturación) también se conoce como
La
el modelo del crecimiento celular. Describe la relación entre la 6
velocidad especifica de crecimiento () y la concentración del sustrato
(S) en un cultivo microbiano.

 • Si la concentración de sustrato es
cero la velocidad especifica de
crecimiento (() también lo es.

• Cuando S es muy grande, la

velocidad
Efecto
  de la cantidad de sustrato (S) sobre la velocidad Especifica de crecimiento (( tiende a
De crecimiento ( la velocidad máxima (.
TÉRMINOS DE LA ECUACIÓN DE 7
MONOD

 
Cantidad de sustrato (S) : Cantidad de sustrato [gr/L] que en un cultivo por lote
disminuye. (limita el crecimiento microbiano.

Velocidad especifica de crecimiento (): Es la velocidad de aumento de la

concentración celular por unidad de tiempo [1/hrs]

Velocidad máxima especifica de crecimiento (: Es la velocidad máxima de

multiplicación que puede alcanzar un microorganismo, en las condiciones de
crecimiento en las cuales se encuentre.

Constante especifica de saturación(: Representa la afinidad de los organismos por el

sustrato. De igual manera es la concentración del sustrato a la que se producen
microorganismos con una velocidad igual a la mitad de la velocidad especifica de
crecimiento máxima.
Hay aproximaciones del modelo de Monod de orden cero y de primer 8
orden que pueden aplicarse cuando:

Los valores de velocidad de crecimiento específica máximos para la producción

de biocombustibles varían mucho, dependiendo del tipo de microorganismo, la
naturaleza del sustrato y el entorno bioquímico.
ESTIMACIÓN DE LOS PARÁMETROS CINÉTICOS
DE LA ECUACIÓN DE MONOD 9
Liberalización del modelo
 

Lineweaver-Burk
 

 
 MODELOS DE INHIBICIÓN 10

Se han desarrollado expansiones del modelo de Monod para incluir inhibición por
sustrato, producto o compuestos xenobiótícos. Muchos modelos de inhibición para el
crecimiento son de naturaleza empírica.

• Inhibición por sustrato

• Inhibición por producto

Modelos de Inhibición
• Inhibición por compuestos xenobióticos
 INHIBICIÓN POR SUSTRATO 11

Las
  atas concentraciones de sustrato en relación con el valor de pueden limitar el crecimiento.
Las modificaciones del modelo de Monod puede utilizarse para describir la inhibición por sustrato:

Modelo de Andrews
Donde:  

  coeficiente de inhibición (mg/L)

A medida
  que el coeficiente de inhibición aumenta, obtenemos la ecuación de Monod.
En muchos casos el valor de no se puede observar.
 Un modelo alternativo para describir la inhibición por sustrato ha sido propuesto
Por Han y Levenspiel: 12

Donde:
:  Concentración crítica de sustrato que causa la inhibición por completo
n: Factor de inhibición.

Los valores de n y Scrit se pueden determinar realizando un análisis de mínimos

cuadrados no lineales.

 Para los microorganismos fotótroficos, el modelo de Steele se usa a menudo para

describir
el crecimiento considerando una intensidad de luz potencialmente inhibidora.
IL: Luz
Iopt: Intensidad óptima de luz (μmol /m2s.)
 INHIBICIÓN POR PRODUCTO 13
Las altas concentraciones de producto pueden inhibir el crecimiento microbiano. La
inhibición del producto se puede modelar como:

Donde:
P: concentración del producto (mg/L)
Pcrit: concentración crítica del producto que causa la inhibición del crecimiento.
n: Factor de inhibición.
Otra ecuación para describir la inhibición del producto no competitivo se representa en
varias formas diferentes como

Kp: Constante de
inhibición
Del producto (mg/L)
 INHIBICIÓN POR COMPUESTOS 14
XENOBIÓTICOS
Se puede usar una forma general de inhibición no competitiva de enzimas para
modelar la inhibición por otros compuestos (Blanch y Clark)

I: concentración del inhibidor

(mg/L)
KI: Constante de inhibición (mg/L)

Otra ecuación utilizada para modelar la inhibición general se da como:

Por ejemplo, el hidrolizado de bagazo de caña de azúcar producido a partir de la

hidrólisis ácida contiene compuestos tales como furfural y 5-hidroximetilfurfural
(HMF) que pueden inhibir el crecimiento de levadura a altas concentraciones.
 MODELOS PARA SUSTRATOS DE 15
LIMITACIÓN MÚLTIPLE
El substrato o nutrientes pueden ser considerados en un sentido amplio como
complementarios o sustituibles.

 Substratos complementarios

Para modelar múltiples nutrientes complementarios, se puede utilizar una forma interactiva del
modelo Monod.

Modelo Interactivo Modelo no Interactivo

El modelo interactivo se basa en la Un enfoque alternativo para modelar los nutrientes

suposición de que ambos sustratos influyen complementarios, llamado modelo no interactivo,
en la tasa de crecimiento. asume que un nutriente limita el crecimiento.
Substratos sustituibles 16
Cuando múltiples substratos sustituibles están presentes en el medio, el uso simultáneo de los
substratos puede ocurrir. En este caso, un compuesto puede ser preferido por el microorganismo
sobre el otro. Si se prefiere S1, entonces su presencia en los medios inhibirá el uso de S2.

La tasa de crecimiento del microorganismo que usa S2 se modela como una función de S2 con
inhibición por S1.

Por ejemplo, tanto la glucosa como la xilosa pueden ser usadas por ciertas levaduras como la
Candida. La glucosa es el sustrato preferido, por lo que su presencia en los medios suprime el
uso de xilosa al desactivar reversiblemente la enzima xilosa reductasa.
 PARÁMETROS DE 17
 RENDIMIENTO
El rendimiento de la biomasa se define como:

  El rendimiento del producto se define como:

La biomasa y los rendimientos reales de los productos pueden determinarse a

partir de la estequiometría de una ecuación de crecimiento equilibrada.
 EXPRESIONES CINÉTICAS DE 18

Una
VELOCIDAD
vez que se determina la relación apropiada para describir la velocidad de
crecimiento específica, se pueden desarrollar las velocidades de formación para
compuestos importantes del reactor. La velocidad de formación de biomasa se
expresa como
 
Formación de la Biomasa
Donde:
 
es la velocidad de formación de la biomasa, mg/L-h

s velocidades de formación para microorganismos que utilizan sustratos sustituibles, se expres

r la siguiente expresión, la cual representa la velocidad de formación de la biomasa.

Donde:
 
es la velocidad de crecimiento especifica basada en el sustrato 1 h -1
es la velocidad de crecimiento especifica basada en el sustrato 2 h -1
 RELACIÓN DE CRECIMIENTO DE BIOMASA CON LA
FORMACIÓN DE PRODUCTOS 19
Los productos formados a partir de procesos de bioconversión fueron
clasificados por Gaden:
• Tipo I: Asociados al crecimiento

Productos formados a • Tipo II: parcialmente asociados al

partir de bioprocesos crecimiento

• Tipo III: No asociados al crecimiento

 EXPRESIONES DE VELOCIDAD PARA 20
PRODUCTOS ASOCIADOS AL
CRECIMIENTO
La velocidad de formación del producto asociado al crecimiento puede expresarse
en función de la velocidad de formación de biomasa:

Formación del producto

 
Donde:
velocidad de formación del producto asociado al crecimiento mg/L-h
cociente de formación del producto asociado al crecimiento (mg producto/mg de
biomasa)
Por ejemplo, el valor de kpg para el etanol basado en la fermentación anaeróbica de
la glucosa por levadura puede determinarse mediante la estequiometría de la
ecuación equilibrada como 4,26 g de etanol/g de biomasa.

El valor de kpg también puede calcularse como la relación de Y P/S o YX/S o medirse.
 EXPRESIONES DE VELOCIDAD PARA
21
PRODUCTOS NO ASOCIADOS AL
CRECIMIENTO
Particularmente, la velocidad de formación de productos no asociados al crecimiento
se modela únicamente como una función de la concentración de biomasa en el
reactor.

 Donde:

velocidad de formación del producto no asociado al crecimiento mg/Lh.

constante de formación del producto no asociado al cremento mg producto/ mg
biomasa-h
Los productos formados a partir de una combinación de medios asociadas al
crecimiento y no asociados al crecimiento se pueden modelar como:
 EXPRESIONES DE VELOCIDAD PARA
22
EL CONSUMO DE SUSTRATO
Otras reacciones que ocurren como resultado del crecimiento, tales como el consumo de
sustrato y oxígeno, son representadas también como funciones de la velocidad de
formación de biomasa.
La velocidad de consumo del sustrato orgánico es por lo tanto:

Consumo del sustrato

La velocidad de consumo del sustrato que ocurre para los productos formados no
asociados al crecimiento se puede modelar como:

Consumo del sustrato

(Productos no asociados)
 EXPRESIONES PARA LA VELOCIDAD 23
DE CONSUMO DE O2
La velocidad de consumo de O2 durante el crecimiento puede expresarse en función de un factor
estequiométrico basado en la ecuación de crecimiento equilibrado o valor medido.

Consumo del O2

Donde ro es la velocidad de consumo de O2 [mg/L-h]

Por ejemplo, en una ecuación representativa que describe bacterias organotróficas

(C5H7O2N) cultivadas en la glucosa, se requieren 0,578 mg de O 2 por mg de XB
formado; por lo tanto:

• Si no se conoce la estequiometría, entonces el consumo de oxígeno se puede estimar

a partir de la
Siguiente expresión, en donde la biomasa y el sustrato orgánico se miden en base a la
DQO.
 EXPRESIONES PARA EL 24
DECAIMIENTO MICROBIANO
Una expresión final importante para el modelado del biorreactor es la velocidad de
descomposición microbiana. Esta tasa de muerte o descomposición natural y se
puede modelar como de primer orden con respecto a la biomasa:

Velocidad de descomposición microbiana

Donde:
rxB/s: velocidad de descomposición de la biomasa [mg/L-h]
b: Constante de decaimiento h-1.

*CASO PARTICULAR
La hidrólisis del sustrato orgánico particulado se puede modelar como:

 Donde:
Velocidad de hidrólisis del sustrato orgánico [mg/L-h]
: velocidad de hidrólisis máxima especifica mg Xs/mgXB-h
concentración del sustrato orgánico particulado (mg/L)
: ks para la hidrólisis del sustrato orgánico particulado
mg xs/ mg xB.
 EFECTO DE LA TEMPERATURA 25
Los modelos de crecimiento microbiano y el diseño deben considerar el impacto de la
temperatura en los valores constantes cinéticos.

• El rendimiento de la biomasa INDEPENDIENTES DE

• El rendimiento del producto LA
• La constante de media saturación TEMPERATURA
• Los valores constantes del producto asociados al crecimiento
• se consideran a menudo independientes de la temperatura.

• Los valores de las constantes cinéticas:

• La velocidad de crecimiento específica máxima
• La constante de decaimiento DEPENDIENTES DE LA
• La constante no asociada al crecimiento TEMPERATURA
• Los valores de la velocidad de hidrólisis máxima.
 ECUACIÓN DE 26
ARRHENIUS/ARRHENIUS
MODIFICADA
 OPERACIÓN Y DISEÑO DE 27
BIORREACTORES PARA LA PRODUCCIÓN
DE
Los diseños básicos BIOCOMBUSTIBLES
de biorreactores para cultivos de crecimiento en
suspensión son

o Reactor por lotes

(Batch) (a)

o Reactor continuamente
Tipos de
Biorreactores agitado (CSTR) (b).

o CSTR con reciclaje de

biomasa externo (c) o
interno (d)
 REACTOR BATCH 28
 

 Balance de materia para la biomasa:

 
 

 Balance de materia para el sustrato:

       

 Balance de materia para el producto:

     
 
 INTEGRACIÓN DE LAS 29
EXPRESIONES DE VELOCIDAD
Biomasa:  
Separando variables e integrando:

  Expresión para estimar la concentración de

biomasa en cualquier tiempo en el Reactor.
SUSTRATO 30
 

     
 

Separando variables e integrando tenemos :

     

   

 
PRODUCTO  
31

Separando variables e integrando obtenemos

que:
 

 
 MODELADO DEL CRECIMIENTO 32
MICROBIANO EN UN REACTOR BATCH
Velocidad de Crecimiento de Xilitol
100
Concentración de Biomasa(g/L)
Concentración de Sustrato(g/L)
Concentracion del producto(g/L)
90

  80

70

Concentración (g/L)
60

50

 
40

30

20

  10

0
0 20 40 60 80 100 120
Tiempo (horas)
 REACTOR BATCH 33

El balance de masa en un reactor batch considerando el crecimiento así como la

descomposición microbiana es:

Aunque hay un equilibrio temporal de los términos de crecimiento y decaimiento durante la fase
estacionaria, los reactores discontinuos nunca alcanzan verdaderas condiciones de estado
estable.
Ecuación
logística de
crecimiento

• Esta ecuación describe los aumentos de biomasa así como la disminución del sustrato en
función del tiempo durante el crecimiento exponencial.
• Asimismo, esta ecuación puede utilizarse para determinar los parámetros cinéticos de la
ecuación de Monod para el crecimiento por lotes-.
 REACTOR CONTINUAMENTE AGITADO 34
(CSTR) Balance de materia
Q Q  
S0 S
X0 X Para la Biomasa:
 
P0 P

   
Donde:
 Sabemos que:
 
   
 

  La dilución es igual a la velocidad

Cuando se alcanza el estado estacionario  
especifica de crecimiento
 SUSTRATO Balance de materia
35

 
Q Q
S0 S  
X0 X
P0 P  

 Si se considera estado estacionario tenemos que:

 
 

 Sabemos que  
 

 Cuando se alcanza el estado estacionario  

 PRODUCTO Balance de materia
36

 
Q Q
S0 S  
X0 X
P0 P  

 Si se considera estado estacionario tenemos que:

 
 

 Sabemos que  

   
 Cuando se alcanza el estado estacionario
 REACTOR CONTINUAMENTE AGITADO (CSTR) 37

Biomasa
El balance de masa se puede simplificar en los casos en el que no hay alimentación de
biomasa y no hay inhibición de sustrato ni de producto. Además, de que se considera
estado estacionario:

Si se sustituye en el Modelo de Monod:

A partir de esta expresión, se puede reordenar para determinar el tiempo de retención para logar
Una cierta concentración del sustrato en el efluente.
 BALANCE DE MASA PARA EL 38
SUSTRATO y PRODUCTO
Sustrato
Productos asociados
al crecimiento

Productos no asociados
Producto al crecimiento

Tiempo de retención que

Maximiza la velocidad de
Biomasa y de productos
 CASO DE ESTUDIO I: Modelado 39
de la fermentación de AL
Se considera un reactor tipo tanque agitado, en el cual se lleva a cabo la reaccio ́ n de
homofermentación de azúcares con L. casei ssp. Rhamnosus para producir AL, en condiciones
isotérmicas (42 °C) y anaerobias.
El modelo cine ́tico (Youssef y col., 2005) para la fermentación considera inhibición por producto y
por sustrato sobre la velocidad de crecimiento específico

Mientras que la velocidad especifica de consumo qs y la velocidad especifica de producción de AL

VP estan dadas por:
 
Además, existe un ajuste de los parámetros cinéticos que depende del factor de
enriquecimiento del medio , el cual relaciona las cantidades de nutrientes
40
requeridas para la fermentación (correspondiendo = 1 a 5 g/l de extracto de
levadura y 10 g/L de triptona):

Balances de materia en el Reactor:

SOLUCIÓN AL SISTEMA DE 41

EDO´s
 CSTR CON RECICLO DE 42

BIOMASA Un CSTR con reciclaje de biomasa incluye algunos

medios para eliminar la biomasa del flujo del efluente
del reactor a través de un filtro externo o interno,
dispositivo de sedimentación o centrifugación, y
devolver el flujo de biomasa al reactor

 El tiempo de retención celular () puede controlarse

independientemente del tiempo de retención hidráulica

 
Cuando el flujo de cosecha se bombea directamente desde el reactor, la concentración de
biomasa en el reactor es igual a la concentración en el flujo de cosecha y () se calcula como:

 Donde:
: tiempo de retención celular, h
concentración de la biomasa en el reactor, mg/L
concentración de la biomasa en el flujo de cosecha, mg/L
flujo volumétrico de cosecha, L/h
 BALANCE DE MATERIA (Biomasa) 43

  concentración de la biomasa del efluente mg/L

Considerando el estado estacionario el balance de

masa se simplifica a:

  puede observar que controla el crecimiento

Se
Microbiano en un reactor CSTR con reciclo al igual que
controla el crecimiento para un CSTR sin reciclo.

La siguiente expresión se utiliza para describir la

concentración de sustrato de efluente en estado
estacionario.
BALANCE DE MATERIA (Sustrato) 44

Debido a que el sustrato orgánico soluble no será

removido por la técnica de separación celular, la
misma concentración estará presente en el desperdicio
y en el flujo del efluente principal.

El balance de masas en estado estacionario se

simplifica a la siguiente ecuación que describe la
concentración de biomasa como una función de los
tiempos de retención tanto hidráulica como celular.
 BALANCE DE MATERIA 45
(Producto)

 La tasa de crecimiento específico y la concentración de sustrato soluble en efluentes

disminuirán a medida que aumente el tiempo de retención celular.
 Las concentraciones de biomasa y de productos no asociados al crecimiento, especialmente
para productos particulados, aumentarán con el aumento del tiempo de retención celular
Referencias 46

1. Demirbas, A. Biofuels. Securing the Planet’s Future Energy Needs, Springer-Verlag

London Limited (2009).

2. Atadashi, I. M., Aroua, M. K., Aziz, A. R. A., y Sulaiman, N. M. N. (2012). Production

of biodiesel using high free fatty acid feedstocks. Renewable and Sustainable
Energy Reviews, 16 (5):3275–3285.