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COOMBS

Dr. Shivis Illis Zamora Juárez


Patólogo Clínico
Jefe de Banco de Sangre
CETS Hidalgo
DEFINICION
• La prueba de la antiglobulina humana o
prueba de Coombs representa la técnica
más importante de aglutinación artificial en
inmunohematología.
• Mediante un procedimiento inmunológico,
esta reacción nos permite revelar la
presencia de anticuerpos “no aglutinantes”
en la membrana eritrocitaria
Pruebas de Coombs
• Determinar la existencia de glóbulos rojos
recubiertos con inmunoglobulinas y/o
complemento in vivo, en particular IgG y
C3d (Coombs directo)

• Determinar la presencia de anticuerpos


irregulares en el suero del receptor
(Coombs indirecto)
REACTIVO SUERO DE COOMBS

• Es un reactivo que será capaz de detectar globulinas


humanas, especialmente gamma globulinas y
componentes del complemento.

• La mezcla indicada se diluye con una solución tampón


(pH aprox. de 7) que contiene una pequeña cantidad de
albúmina bovina; se le añade un 0,1 % de azida sódica
(N3Na) como conservador.

• Para evitar errores en la utilización del reactivo obtenido,


que es incoloro, puede adicionarse un colorante verde.
REACTIVO SUERO DE COOMBS
• Poliespecífico:
– Que contiene principalmente anti-IgG y anti-
componente C3d del complemento, pudiendo
contener además anticuerpos de otras
especificidades: anti IgM, anti-IgA, anti-C3b,
etc., pero no es conveniente que contenga
anti-C4, ya que dicha especificidad no sólo
carece de significado clínico, sino que los
resultados positivos debidos a la misma
pueden confundir por tratarse de falsos
positivos.
REACTIVO SUERO DE COOMBS

• Monoespecifico
– Los diversos sueros antiglobulina
inmunoespecíficos se obtienen de modo
análogo a los poliespecíficos, pero se utilizan
las distintas fracciones separadas y
purificadas para inyectar a los animales
destinados a producir el reactivo, aunque en
la actualidad se obtienen reactivos de calidad
excelente gracias a los métodos de obtención
de anticuerpos monoclonales.
Anticuerpos monoclonales
• Técnica de los hibridomas (Kohler, 1975) ha permitido el
uso de los sueros reactivo con anticuerpos
monoclonales, es decir, derivados de una clona única de
células y poseen por tanto, una sola especificidad.

• En el campo de los grupos sanguíneos han permitido la


detección de subgrupos débiles de algunos antígenos.

• También son valiosos los reactivos antiglobulina


humana obtenidos por este procedimiento.
Hibridoma
• Un hibridoma es una línea celular híbrida
obtenida mediante la fusión de un linfocito B
productor del anticuerpo específico de interés,
con una línea celular de mieloma que no
produce inmunoglobulina propia. Se obtiene así
una línea celular inmortal capaz de expresar el
anticuerpo de interés, que se aísla del
sobrenadante.
COOMBS DIRECTO
• El Coombs directo se realiza a pacientes en los primeros momentos
de una reacción hemolítica y en el diagnóstico de anemias
hemolíticas auto inmunes, hemólisis inducidas por drogas, y
enfermedad hemolítica del recién nacido.

• Lavar tres veces los hematíes del paciente con solución salina fisiológica.
• Hacer una suspensión de hematíes lavados al 2-5 %.
• Añada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensión.
• Añada dos gotas de Suero de Coombs poliespecífico.
• Centrifugue un minuto a 1000 rpm.
• Lea desprendiendo suavemente el botón
• Si en la prueba de Coombs directo se observa
aglutinación esto indica presencia de anticuerpos y /o
complemento unidos a los hematíes in vivo, repita
nuevamente el procedimiento pero utilizando los
reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d.

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64

Anti Ig G 2+ 1+ - - - -

Anti C3b 1+ - - - - -
COOMBS INDIRECTO
• Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero
y decántelo en un tubo debidamente identificado.
• Prepare una suspensión al 2-5 % con la mezcla de hematíes
• En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero y dos gotas
• de la suspensión y mezcle bien.
• Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y añada en él dos
• gotas de la suspensión de hematíes O y dos de suero hemoclasificador
• anti-D y mezcle bien
• Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos
• Lave tres veces con solución salina escurriendo totalmente el
• sobrenadante del último lavado.
• Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico a cada tubo.
• Centrifugue 1minuto a 1000 rpm.
• Lea desprendiendo suavemente el botón en la lámpara aglutinoscopio.