VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO INDICADOR DE ESTABILIDAD POR HPLC PARA LA

CUANTIFICACIÓN DE MEROPENEM.

WILSON GARVIS ARENAS

FABER DE JESUS PALACIO VELEZ
YULIANA MARÍA SERNA CARVAJAL

Prácticas Desarrollo de Proyecto II.

Química Farmacéutica. Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Alimentarias.
Universidad de Antioquia. Medellín (Antioquia). Colombia

INTRODUCCIÓN DISCUSIÓN

El medicamento Meropenem, cuyo nombre IUPAC es (4R,5S,6S)-3-[(3S,5S)-5-
(dimethylcarbamoyl)pyrrolidin-3-yl]sulfanyl-6-[(1R)-1-hydroxyethyl]-4-methyl-7-oxo-1-
azabicyclo[3.2.0]hept-2-ene-2-carboxylic acid(1,2) es un bactericida β-lactámico de amplio
espectro, utilizado generalmente en afecciones graves como meningitis, infecciones del tracto
respiratorio inferior, infecciones obstétricas/ginecológicas, entre otras, en las que el
microorganismo ha desarrollado resistencia al antibiótico de primera elección(3,4,5).
Tanto a nivel comercial como a nivel hospitalario, este medicamento tiene un elevado costo y una
amplia rotación.(6,7) Sin embargo, presenta una baja estabilidad al momento de su reconstitución,(8)
representando una dificultad en el ámbito hospitalario, considerando que se tiene registro de
estabilidades máximas no superiores a 48 horas cuando se emplea solución salina como diluyente
y se almacena en condiciones de refrigeración (4°C),(9,10) lo que obliga al personal de las
Instituciones Prestadoras de Salud (IPS) a realizar su manipulación y reconstitución en el mismo
lugar donde será usado y el descarte de las porciones no utilizadas.
El objetivo del presente trabajo fue validar un método analítico indicador de estabilidad para
cuantificar el medicamento Meropenem, por medio de Cromatografía líquida de alta eficiencia
HPLC, que pueda ser utilizado para estudios de estabilidad o pruebas de rutina del producto
reconstituido.
MÉTODO
Solución madre
Linealidad 4 curvas 500µg/ml
Degradación forzada con HCl 0.1 N, NaOH 0.1 N, H2O2 3%
Método
Selectividad
analítico
3 muestras comerciales vs Estándar
Linealidad
El valor-P mostrado en la tabla 1 indica que existe una relación estadísticamente significativa entre
el área y la concentración con un nivel de confianza del 95%. Por su parte el valor de R cuadrado o
coeficiente de determinación, indica que el modelo ajustado tiene la capacidad de explicar el
99,1497% de la variabilidad del área obtenido a cada concentración.
la línea de ajuste mostrada en la figura 1 sugiere que los cambios en la variable predictora están
asociados con cambios en la variable de respuesta tantas veces como muestra la ecuación del modelo
Ajustado que es: Área = (27667,1 * Concentración) + 24929,2
La figura 2a indica que los datos siguen un distribución normal, mientras el gráfico de residuales
figura 2b indica una pequeña tendencia de los datos, no obstante, no existen valores de residuos que
se desvían por más de dos unidades de las medias, por tanto, el modelo sería confiable para explicar
la relación Concentración vs Área a todo los valores de concentración en los que se realizó el estudio.
Selectividad
Los resultados mostrados en la figura 3 indican que la respuesta va cambiando a medida que
aumenta la concentración, y el diluente con el cual se hace las diferentes diluciones de la muestra
(solución salina o agua) no causan interferencias en la lectura de la muestra.
Los resultados de degradación forzada con HCl 0.1 N, NaOH 0.1 N y H2O2 al 3% mostraron que el
Meropenem se degrada rápidamente y los productos que se generaron de éste no causaron ninguna
interferencia con el pico base del Meropenem.
7 diluciones de 25, 30, De acuerdo a los resultados mostrados en la tabla 2, los valor-P obtenido siendo menores a 0,05
40, 50, 60, 65, 75 µg/ml
permiten rechazar la hipótesis nula. Dado que los valores-P obtenidos son mayores a 0,05, podemos
afirmar que las medias son iguales, por tanto no hay diferencias estadísticamente significativas entre
las concentraciones de las tres muestras comparadas con el estándar y por lo tanto la matriz de las
muestras no causa interferencias en la señal instrumental al tiempo de retención de Meropenem.

3 niveles de concentración (bajo, medio y Exactitud

alto) Los resultados de exactitud presentados en la tabla 3 indican que los porcentajes de recuperación
Exactitud y 3 días diferentes
precisión obtenidos con el método evaluado son cercanos al 100%, por su parte, el análisis estadístico muestra
soluciones madre de 500 µg/mL
independientes valores de texperimental más bajos que los valores ttablas indicando que no existe una diferencia
estadísticamente significativa entre la recuperación media y el 100%, para los días 2 y 3
RESULTADOS principalmente (análisis inter-día). Los resultados obtenidos en los análisis de la concentración media
LINEALIDAD muestran valores erráticos, lo que indica posibles fallas analíticas.
Tabla 1. Resultados Regresión lineal simple.

Parámetro Resultado Precisión

Coeficiente de
0,99574
Los valores presentados en la tabla 4, muestran que la gran mayoría de los coeficientes de variación
Correlación se encuentran por encima de 2%, por lo cual se puede decir que los valores obtenidos para la
Valor P 0,0000 respuesta en los diferentes niveles de concentración, para un mismo día, y para días diferentes, se
R cuadrado 99,1497 alejan de una manera estadísticamente significativa entre sí, lo cual indica que la metodología no
Error estándar tiene la capacidad de arrojar resultados repetibles a las diferentes concentraciones.
45927,0
del estimado
Error absoluto Figura 1. Curva de calibración Concentración vs Figura 2. (a) Gráfico de Probabilidad
38168,8 Área,
de la media normal de los Residuales (b) Gráfico de CONCLUSIONES
indicando la ecuación del modelo ajustado. Residuales

SELECTIVIDAD La metodología empleada para la evaluación y cuantificación del Meropenem a diferentes

Muestra Área Valor- concentraciones cumple de manera adecuada con las condiciones establecidas para los criterios de
promedio P linealidad y selectividad; sin embargo, durante la determinación de precisión y exactitud se
PISA 1 1.43629E6 0.595 obtuvieron resultados erráticos que requieren de una nueva evaluación antes de descartar el método
PISA 2 1.43111E6 0.668 como técnica analítica para la determinación de Meropenem.
AUROBI 1.41903E6 0.844
NDO
AGRADECIMIENTOS
ESTAND 1.40935E6
AR Agradecemos a nuestra asesora Ana Liliana Giraldo Aguirre por su colaboración y acompañamiento
Figura 3. Superposición de cromatogramas a Tabla 2. Comparación de medias
diferentes concentraciones
durante el desarrollo experimental de este proyecto.

EXACTITUD PRECISIÓN
REFERENCIAS
Tabla 3. Resultados obtenidos para el test de t, por nivel de Tabla 4. Valores de coeficiente de variación intra-día e
concentración. inter-día para cada nivel de concentración. 1) National Center for Biotechnology Information. Meropenem [Internet]. PubChem Compound Database; 2017. Disponible en:
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/441130
Baja Media Alta Coeficiente de Variación 2) REAXYS. Meropenem. 2017.
3) AHFS. MEROPENEM. In: AHFS Drug information. 2010. p. 200–10.
Promedio
97,43 96,17 98,94 Nivel de Intradía 4) Casals G, Hernandez C, Hidalgo S, Morales B, Lopez-Pua Y, Castro P, et al. Development and validation of a UHPLC diode array
interdía Interdía detector method for meropenem quantification in human plasma. Clin Biochem [Internet]. The Canadian Society of Clinical Chemists;
Conc 2014;47(16-17):223–7. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2014.08.002
Promedio Día 1 Día 2 Día 3
99.92 91.85 101.04 5) Elragehy NA, Abdel-Moety EM, Hassan NY, Rezk MR. Stability-indicating determination of meropenem in presence of its degradation
intradía
Bajo 2,60 2,07 3,86 5,12 product. Talanta. 2008;77(1):28–36.
Desv Est 4,74 11,30 3,30 6) Barrero L, Villalobos A. Informe del evento consumo de antibióticos en el ámbito hospitalario, año 2012. 2012;(4).
7) Social C, Industria C, Prestadoras I. COMISiÓN NACIONAL DE PRECIOS DE MEDICAMENTOS Y DISPOSITIVOS MÉDICOS
Coef Var 4,87 11,75 3,33 Medio 4,46 3,45 1,43 4,45 CIRCULAR NÚMERO 07 DE 2013. 2013;
t(tablas) 1,796 1,796 1,796 8) Ministerio de la proteccion socila. DOCUMENTO TÉCNICO GUÍA DE ESTABILIDAD DE MEDICAMENTOS. Bogota, Colombia;
Alto 2,82 1,95 2,02 3,36 2009. p. 1–121.
t(exp) 1,83 1,13 1,09 9) AHFS. MEROPENEM. In: Handbook of Injectable Drugs. 2012. p. 743–5.
10) Melorose J, Perroy R, Careas S. Ficha tecnica Meronem IV. Statewide Agricultural Land Use Baseline 2015. 2015. p. 1–14.

ESTE TRABAJO NO ES RESULTADO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN, ES UN TRABAJO ESTRICTAMENTE DE FORMACIÓN ACADÉMICA PARA ESTUDIANTES DE PREGRADO.