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Caractersticas de la Luz
Colores
Qu es longitud de Onda?
Relacin entre frecuencia, velocidad y longitud de onda
Absorcin / Absorbitividad
Las leyes de Lambert y Beer
Espectrofotometra
Colorimetra y Espectrofotometra como procedimientos analticos
Fotocolormetro
ESPECROFOTMETRO
Curva Patrn
Referencias e Imgenes
La espectroscopia es el estudio del espectro de la luz que emiten los
compuesto y los elementos.
Foton
2
La teora electromagntica de la luz propuesta por Maxwell:
La perturbacin que se propaga como ondas de luz est
formada por fuerzas elctricas y magnticas, y la perturbacin
se produce con cargas elctricas en movimiento.
Efecto de la emisin electromagntica
El efecto fotoelctrico demuestra el comportamiento de la
luz como partcula (grnulos o corpsculos)
La naturaleza corpuscular de la luz se observa en fotos
de objetos iluminados muy dbilmente.
La imagen se forma punto a punto, y muestra que la luz
llega a la pelcula fotogrfica por unidades separadas
que los producen.
Estos descubrimientos dieron origen a toda la tecnologa
moderna de telecomunicaciones como la televisin
En estas imgenes se
puede apreciar, debido a
la toma fotogrfica de los
elementos puntuales
que apoyan a esta teora
Los seres humanos (y algunos animales) apreciamos una
amplia gama de colores que, por lo general, se deben a la
mezcla de colores de diferentes longitudes de onda. Se
conoce como color puro al color de la luz con una nica
longitud de onda o una banda estrecha de ellas.
Cuanto ms larga es la longitud de onda de la luz visible
tanto ms se acerca al color rojo.
Asimismo las longitudes de onda corta estn en la zona del
color violeta.
As todos los elementos existentes poseen un espectro
Hay varios tipos de espectros, los ms comunes son los
espectros continuos, los de emisin y los de absorcin.
nodo
f
La longitud y la frecuencia de onda son inversamente
proporcionales y se relacionan mediante la siguiente
ecuacin
c c
f c E f
f
U.V.
X
L GAMMA
u
350 nm
z
v La luz visible es slo una pequea parte
i del espectro electromagntico con
longitudes de onda que van
s aproximadamente de 350 nanmetros
i hasta unos 750 nanmetros
b nanmetro, nm = 10-9 m.
l 750 nm
e Infrarrojo
Microondas
Radio
La luz blanca est compuesta de ondas de diversas
frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa por un
prisma se separa en sus componentes de acuerdo a la
longitud de onda
As la luz blanca es una mezcla de todas las longitudes de
onda visibles.
En el espectro visible, las diferencias en longitud de onda
se manifiestan como diferencias de color.
La distribucin de los colores se determinan por la longitud de onda
de cada uno de ellos.
Las longitudes de onda mas largas que las del rojo se les
conoce como infrarrojas y las mas cortas que el violeta,
ultravioletas.
1m 0.001 mm 10-6 m
nm = mm 0.001m 10-9 m
donde:
A es el absorbente en su estado de energa bajo,
A* es el absorbente en su nuevo estado de
excitacin energtica
hf representan a la constante de Planck y la
frecuencia respectivamente
La energa del fotn incidente posee una longitud
de onda ()
a = absortividad
a
I0
I
c = concentracin.
(nmero de partculas por cm3)
b
Longitud del medio absorbente
o ancho de la celda
Absortividad (a)
I = I0e-ab
I0 I I0 I
I0 I
Ancho de la celda
Ley de Beer: Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de un
medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a medida
que la concentracin del medio absorbente aumenta
I = I0e-ac
I I
I0 I I0 I0
Lo que significa que combinando ambas leyes se crea la Ley de Beer-
Lambert donde la fraccin de luz incidente que es absorbida por una
solucin es proporcional a la concentracin de soluto y al espesor de la
sustancia atravesada por la luz. La relacin entre la luz incidente (I0) y la
reflejada (I) dar una idea de la cantidad de radiacin que ha sido
absorbida por la muestra.
Ley de Lambert Beer:
I = I0 e-abc
T = I/I0 = e-abc
Sacando logaritmos:
lne I/I0 = abc
Convirtiendo a log10:
Log10 I/I0 = 2.303 abc
log10 I/I0 = abc
T = I / I0
Se expresa como % T
La absorbancia es directamente proporcional a la
longitud del recorrido b a travs de la solucin y la
concentracin c del color absorbente. Estas relaciones
se dan como:
A = abc
I0 R
B
I
I
D T = I/I0
A
Por lo tanto la absorbancia es reciproca de
la transmitancia
Absorbancia contra concentracin (comportamiento lineal)
Absorbancia
Concentracin
% Transmitancia
Concentracin
Absorbancia
Concen
tracin
Obtencin de TRANSMITANCIA utilizando valores de Absorbancia
Log10 % T = 1.4
%T = 1 / Log10 1.4 10
Aplicando antilog. a
1.4 = 15 % de transmitancia
Obtencin de absorbancia a partir de un valor de
% de transmitancia
RECORDANDO:
A = log10 1/T
Ejemplo de clculo
%T = 30
T = 0.30
Sustituyendo (1/T) 1/0.30 = 3.33
Log10 3.33 = 0.523 de absorbancia
Se le llama espectrofotometra a la medicin
de la cantidad de energa radiante que absorbe
una molcula o un elemento en su estado puro,
en funcin de la longitud de onda de la
radiacin electromagntica.
Espectgrafo
Espectmetro
De Emisin
ptica
Para metales
Colorimetra y Espectrofotometra
como procedimientos analticos *
Las tcnicas colorimtricas se fundamentan
con la medicin de la absorcin de radiacin
visible por sustancias coloreadas.
Orbitas de TITAN
Casiopea A: ecos de luz en infrarrojo
La diferencia entre colorimetra y
espectrofotometra consiste en el tipo de instrumental empleado:
Referencia de color
Colormetro Klett
Espectrofotmetro
M.C.I/2005
Rojo
Amarillo Verde
Azul
Amarillo
Azul }
Por lo anterior podemos aplicar un sencillo
mtodo para precisar con cual filtro podramos
leer una solucin dependiendo el color de esta
Roja, Naranja,
Azul 400-465 Amarilla, Verde,
Turbias
Roja, Amarilla,
Verde 500-570 Violeta, Naranja,
Azul
Azul, Verde,
Rojo 640-700
Amarilla
A menudo se hace referencia a la estrella de colores
para facilitar el recordar la eleccin del color de filtro para
lectura colorimtrica. Para soluciones de color azul verde
y amarilla correspondera un filtro rojo. Para soluciones de
color rojo, naranja o amarrillo seleccionaramos un filtro
color azul. Finalmente para soluciones con color verde,
azul o amarilla elegiramos un filtro rojo.
Manejo del
Fotocolormetro
1. Confirmar, que el filtro (A) adecuado se encuentre
dentro del portafiltros (B) y este en su lugar (C)
2. Compruebe que la aguja indicadora (D) este en el
centro, en cero; si no es as ajuste a cero con la
perilla (E) que se localiza en la parte superior;
siempre y cuando la lmpara se encuentre apagada
C
D E
M.C.I/2005
3. La lmpara (F) se enciende con el apagador (G),
deje calentar entre 5 y 10 minutos.
4. Ajuste la escala del potencimetro (H) con la perilla
correspondiente (I) a cero
5. Coloque la cubeta (limpia) (J) con el blanco, en su
sitio (K) y encienda con el interruptor (L)
F G
H
K
I
L
J
M.C.I/2005
6. Mediante la perilla (M) del galvanmetro , se acopla la lectura
a cero , lo que implica que la aguja (D) y la escala (H) deben
estar en cero.
7. Para leer las soluciones problema : Hay que retirar de la
cubeta el blanco y colocar la solucin problema, la aguja (D)
se desviar de su posicin , es necesario nuevamente ajustar
(con I) a cero, la lectura que proporcione la escala (H) es la
correspondiente al problema
M
D
M.C.I/2005
Limitaciones instrumentales y qumicas:
1. Limitaciones de la ley de Beer: las soluciones deben ser diluidas,
por la interaccin de las concentraciones y la absorcin de los
solutos. ( generalmente deben ser menor de 0.01 M)
2. La absortividad, depende del ndice de refraccin de la solucin y
sta depende de la concentracin , por tanto debe incluirse una
correccin, en la ecuacin: log P e bc
o
P 2
2 2
3. Las desviaciones qumicas ocurren debido a las asociacin,
disociacin o reaccin de las sustancias absorbentes, con el
disolvente.
4. La desviacin instrumental, se debe a la exigencia de la ley de
Beer de usar una radiacin monocromtica, lo contrario ocasiona
una desviacin.
CUIDADOS
Las muestras no deben tener burbujas, encontrarse
turbias o con precipitados.
El volumen de la muestra no debe ser excesivo para
evitar que se desborde, en caso de que sucediera, se
debe limpiar con un pao limpio o papel absorbente
suave, para evitar rayarla.
La cantidad a adicionar es, mximo, hasta partes
de la cubeta
No se deben derramar lquidos, sobre todo solventes,
cidos o lcalis; dentro del contenedor de la cubeta,
se puede daar parte del mecanismo
El fotocolormetro nunca se debe encender sin filtro.
No deje que se sobrecaliente, mantenga apagado si
no lo utiliza.
Un espectrofotmetro es un instrumento que
descompone un haz de luz (haz de radiacin
electromagntico), separndolo en bandas
de longitudes de onda especficas, formando
un espectro atravesado por numerosas lneas
oscuras y claras, semejante a un cdigo de
barras del objeto, con el propsito de
identificar, calificar y cuantificar su energa
Distribucin de la luz en el
espectrofotmetro
Espectrofotmetro Mecanismo Interno
Met.Cient. I
COLOR LONGITUD DE ONDA ()
Rojo (R) 700 nm
Verde (G) 546.1 nm
435.8 nm
Azul (B)
Es usual que al seguir una receta para la
determinacin de la concentracin de un compuesto
en particular se indica una longitud de onda (
especfica a la que hay que leer con el colormetro o
espectrofotmetro.
Absorbancia
Las longitudes de onda con mayor absorcin (picos) correspondern
de forma general a aquellas con las que se leer la muestra para
determinar su concentracin
Absorbancia
La relacin entre la absorbancia por una sustancia a una
determinada y su concentracin es directamente proporcional es decir:
a mayor concentracin mayor proporcin de luz absorbida.
Absorbancia
Conc.
As, el espectro de absorcin de la clorofila es:
Colorante comn, la Rodamina 6G en Metanol..
0.6
0.5
A
Absorbancia del problema
B 0.4
S
0
R 0.3
B
A
0.2
N
C
Interpolacin
I
0.1
A
0
0 2 4 6 8 10 12
Concentracin mg/lt
Con base en que la Absorbancia guarda una relacin lineal con
la concentracin, se comprende la existencia de una relacin de
proporcionalidad entre la Absorbancia y la concentracin:
A1 / A2 = C1 / C2
Donde:
A1 = Absorbancia del problema.
A2 = Absorbancia de un estndar de concentracin conocida.
C1 = Concentracin del problema.
C2 = Concentracin del estndar.
1 0 10
2 0.05 9.95
3 0.10 9.9
4 0.20 9.8
5 0.40 9.6
6 0.80 9.2
En este ejemplo de determinacin de Glucosa, en la preparacin de
los tubos para la lectura de la curva patrn, se incluyen ms
elementos y por lo cual el tubo blanco (0) contiene todos los
componentes excepto la glucosa con el fin de poder calibrar la
absorbancia del equipo a cero
Compuesto 1 2 3 4 5 6 7
(blanco)
Absorbancia
3 0.253 0.6
4 0.417 0.4
0.2
5 0.658
0
6 0.574 1 2 3 4 5 6 7
7 0.768 Tubos
Un aspecto importante de la evaluacin
espectrofotomtrica, es que muchas molculas orgnicas
no absorben en el intervalo del espectro visible sino en el
rango de longitudes de onda acordes al ultravioleta o al
infrarrojo
MCI
d
c
a
Ajustar (con e) a 100% transmitancia (0 absorbancia)
Retirar el blanco de la cubeta, agregarle la muestra
problema, e insertar en su espacio, bajar la tapa.
La aguja (d) del lector se deslizar sobre la escala (f) , se
lee en % de transmitancia en unidades de absorbancia
e
CUIDADOS
Las muestras no deben tener burbujas, encontrarse
turbias o con precipitados.
El volumen de la muestra en la cubeta, no debe ser
excesivo para evitar que se desborde, en caso de
que sucediera, se debe limpiar con un pao limpio o
papel absorbente suave, para evitar rayarla.
La cubeta se sujeta por los lados opacos.
La cantidad a adicionar es, mximo, hasta partes
de la cubeta
No se deben derramar lquidos, sobre todo solventes,
cidos o lcalis; dentro del contenedor de la cubeta,
se puede daar parte del mecanismo
Se debe mantener, el espectrofotmetro, limpio y
libre de humedad