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Anti Cuerpos
Anti Cuerpos
Ag.
Ig Ab
Cadena pesada
Clases Isotipos, subtipos o subclases:
Cadena ligera. Tipos:
Caractersticas estructurales
comunes de los anticuerpos
Forma monomrica: 2 cadenas
ligeras (L) idnticas y 2 pesadas (H)
tambin idnticas
Uniones disulfuro:
H-L:
H-H:
Cadenas estn constituidas por
dominios inmunoglobulina
Dominio de inmunoglobulina
110 aa
Nomenclatura de los dominios de
inmunoglobulina
Dominios
variables
Dominios
constantes
Variacin de los anticuerpos
150
Variability Index
100 HVR2
HVR1
50
FR1 FR2 FR3 FR4
0
25 50 75 100
Amino acid residue
Segmentos hipervariables
Las HVR (high variable regions) tambin
se denominan regiones determinantes de
la complementariedad (CDRs) porque
forman la superficie de unin al antgeno
Entre ellas se disponen regiones armazn
de secuencia ms conservada.
Cadena ligera
Tipos y
Proporciones 2/3 , 1/3 ,
No existen diferencias funcionales,
Contienen un dominio variable aminoterminal y otro
constante carboxiterminal.
3 segmentos hipervariables o CDRs. El ms variable es el
CDR3,
Regiones armazn: Ciertos aminocidos estn altamente
conservados,
Los dominios constantes son idnticos en las molculas de
cada tipo y similares entre los dos tipos de cadena L
Se usan como indicadores clonalidad en tumores
Cadena pesada
Contienen un dominio variable aminoterminal (regin
V) y varios constantes (region C).
1. Regin V formada por 3 segmentos hipervariables o
CDRs. El ms variable es el CDR3.
2. Regin bisagra entre CH1 y CH2 tamao desde 10 aa ( a1,
a2, g1, g2, y g 4) hasta 60 aa en (g4 y d)
funcion: posibilidad de variar la disposicin relativa y la
distancia entre los dos centros de unin al antigeno.
3. La regin constante es distinta en cada tipo o isotipo,
pero es invariante para las cadenas de un mismo isotipo.
4 dominios en las regiones constantes de Ig M e Ig E,
3 en Ig A, Ig D, Ig G.
Formas de expresin
Difieren en la secuencia de aminocidos del ltimo
dominio carboxiterminal de la cadena pesada.
Forma secretada
Forma de membrana
Asociacin de las cadenas.
Asociacin H-L
Asociacin H-H
Piezas de cola
Secuencias adicionales no globulares en el extremo
carboxiterminal del ultimo dominio de la cadena
pesada. Se asocian a cadena J y participan en
polimerizacin (IgM) y transporte (IgA)
J
Chain
C4
Antgenos
Antgeno:
Sustancia que se une especficamente a un
anticuerpo.
Inmungeno:
Sustancias capaces de generar respuestas inmunes.
Determinante antignico o eptopo
Porcin de una molcula que es reconocida por el anticuerpo
Tipos:
Determinantes conformacionales o discontinuos: Formados por aa
de porciones separadas en la secuencia primaria de la protena pero
que estn juntos yuxtapuestos en la estructura tridimensional.
Determinantes lineales: 6 aa de longitud, formados por aa
correlativos en la estructura primaria, la mayora son inaccesibles en
la conformacin nativa y slo aparecen cuando la protena sufre
proteolisis o desnaturalizacin.
Sitios de Unin antgeno-anticuerpo
Unin no covalente, es reversible pero de alta afinidad.
Localizacin: Regiones hipervariables del fragmento Fab.
1.- Mayor variacin entre distintos anticuerpos.
2.-Los cambios en su secuencia alteran la especificidad de
unin.
3.- Forman lazos extendidos expuestos en la superficie del
anticuerpo (estudios de difraccin de rayos X).
4.- Los residuos aminocidos de las regiones hipervariables
estn en contacto con el antgeno unido, sobre todo la regin
CDR3, (la ms variable).
Fuerzas que participan en interaccin
Antgeno-Anticuerpo
Caracterizacin de la unin al
Supuestos: antgeno
Antgeno con un solo determinante por molcula,
Todos los anticuerpos presentes especficos frente a l, temperatura
y condiciones de disolucin controladas.
Constante de disociacin (Kd ): La concentracin Molar
de ag. a la que la mitad de las molculas de Ab esten unidos
a el y la otra mitad libre. para los Ab es de 10-7 a 10-11.
Afinidad (inverso de la constante de disociacin): Mide la
intensidad de la unin de un ag monovalente a un Ab con un
solo lugar de unin.
Caracterizacin de la unin al
antigeno en condiciones reales
Multivalencia, los antgenos suelen tener ms de un
determinante (antgenos multivalentes), los anticuerpos
tienen ms de un sitio de unin (de 2 a 10).
La afinidad de una unin multicntrica es mucho
mayor que la que resultara de la suma de las afinidades
de cada uno de los lugares de unin implicados.
Avidez: Mide la intensidad global de la unin de un
anticuerpo a un antgeno.
2. Funciones de las distintas regiones
1.-El sitio de unin al antgeno Unin al
antgeno
esta formado por segmentos de
las regiones VL y VH
2.-La porcin Fc. activa las
funciones efectoras que
dependen principalmente del
isotipo de la cadena pesada. Unin
Unin a complemento
FcR
Transferencia
placentaria
Funciones de las distintas regiones
3.- La regin bisagra determina como una molcula
de anticuerpo puede interaccionar
simultneamente con dos molculas de antgeno.
250 mg/dl
IgA1
110mg/dl
Ig M
Activacin del complemento por
Ig M e Ig G.
C1q se une a la regin Fc (Cg2, Cm3) de
inmunoglobulinas unidas a antgenos.
De las IgG humanas IgG3 activa eficientemente
el complemento, IgG1 algo menos, IgG2
pobremente, IgG4 nada.
Aumento de la fagocitosis,
opsonizacin por IgG.
Las partculas antignicas son recubiertas
por anticuerpos cuyas regiones Fc son a su
vez reconocidas por receptores especficos
de los neutrfilos y los fagocitos
mononucleares (FcgRI; FcgRII, FcRIII)
estimulando la fagocitosis de las partculas
Citotoxicidad dependiente de
anticuerpo (ADCC)
Los linfocitos citotxicos expresan receptores de
baja afinidad para FcIgG (FcgRIII=CD16) que solo
se unen a IgG agregada en superficies reconocidas
por los anticuerpos.
ADCC por los Eosinfilos
Tienen receptores para regiones Fc de IgA e IgE y
exocitan grnulos con contenido letal para parsitos y
helmintos insensibles a otras clulas efectoras.
Hipersensibilidad inmediata
desencadenada por Ig E
Los mastocitos y los basfilos expresan receptores
para FcIgE (FceRI) de alta afinidad ocupados por
monmeros en ausencia del antgeno
Inmunidad en las mucosas mediada
por la Ig A.
La IgA es transportada a travs
de las barreras mucosas y es
secretada a la luz intestinal
donde neutraliza posibles
patgenos o toxinas derivadas
de ellos.
Transferencia de inmunidad pasiva
al feto y al neonato por la IgG.
Los mamferos durante la vida fetal o recin nacidos
no son capaces de responder eficazmente a los
microbios.
Las IgG maternas son capaces de atravesar la
placenta y pasar ala sangre del feto
Las madres en periodo de lactancia secretan IgA (e
IgG en algunas especies) al calostro y a la leche, que
el neonato es capaz captar mediante receptores
especficos IgG de la luz intestinal y pasarla a la
sangre
Supresin por la IgG de las respuestas
de anticuerpos de clulas B novatas
3. Anticuerpos de membrana como
receptores de las clulas B
Ontogenia de las clulas B: Expresin de
distintos isotipos en funcin del grado de
diferenciacin celular. IgM
IgA IgE
Pre
BCR IgM IgM IgD
IgG1 IgG2
IgG3 IgG4
Complejo receptor para antgeno, y sus
co-receptores, en linfocitos B maduros
(Fearon 2000)
Complejo receptor
BCR IgM (u otro isotipo en B memoria)
Iga e Igb ITAM Ag-C3d
Co-receptores (co-ligan)
ComplejoCD19/CD21/CD81(TAPA-1)
CD21 une C3d
CD19 Lyn amplificacin Tk de familia Src
Receptores coestimuladores
CD22, FcIg antagonizan CD19 CD40
3.
2. *
Posibilidad de marcaje: radioactivo, enzimatico,
fluorescente, con puente biotina-avidina. Deteccin y
medida.
Unin a soportes (magnticos o de plstico) por regin Fc.
Se paracin y purificacin molecular y celular.
Cuantificacin de antgeno
Miden molculas mediante anticuerpos indicadores
unidos a otras radioactivas (RIA) o a enzimas
(ELISA), comparan con una curva estndar con
concentraciones conocidas de la sustancia problema.
ELISA o RIA competitivo. Antgeno pegado. El
antigeno de la muestra inhibe la unin de un anticuerpo
indicador al antgeno pegado al pocillo.
ELISA o RIA sandwich. 1er anticuerpo pegado captura
antgeno segundo anticuerpo indicador unido a enzima o
radiomarcado reconoce otro determinante del antgeno.
Identificacin, purificacin y
caracterizacin de antgenos proteicos
Inmunoprecipitacin Para separar una protena de
otras sustancias se usa un anticuerpo especifico para
precipitarla. Se lava y se libera el antgeno por cambio
de pH que reduce la afinidad de la unin Ab-Ag.
Western e inmunoblot separacin analtica por
electroforesis en gel de (SDS)-poliacrilamida separa
protenas por a su peso molecular que son transferidas a
un filtro poroso por capilaridad. Las protenas son
reconocidas por anticuerpos radiomarcados o unidos a
enzimas.
Identificacin, purificacin y
caracterizacin de clulas
Marcaje de superficie celular
VENTAJAS: rpido y
de bajo coste
INCONVENIENTES:
Reproducibilidad limitada,
cantidad limitada de Ab.
Sntesis de anticuerpos monoclonales
Kohler G. Y Milstein C. (Nature, 1975).
-VA: parenteral,
intramuscular...
-DOSIS: 3/4 inoculos
-ADYUVANTES Y CEPAS: P3/x63.Ag8.653,
CARRIERS. CEPA: BALB/c, Y3 NSI/0, NSI/1
- PROTENA
- PLSMIDO
- CLULAS
PROTENAS VIRALES
MTODOS ELECTRQUICOS
Anticuerpos biespecficos.