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Determinacin de protenas

plasmticas y sricas.
Las protenas plasmticas (pp) son un grupo
heterogneo de protenas con diversas funciones,
pesos moleculares y densidades de carga elctrica,
pero en general se incluyen principalmente en dos
grupos:
albmina y globulinas (en esta ltima fraccin
estn incluidos fibringeno, complemento y
anticuerpos, entre otras protenas).
concentracin:

La concentracin de las protenas plasmticas se


obtiene a partir de sangre con anticoagulante;
Las protenas plasmticas pueden ser determinadas a
partir del plasma que se encuentra en la parte
superior de un tubo capilar centrifugado para la
determinacin del hematocrito (Hto).
Las alteraciones encontradas en las pp son
hiperproteinemias e hipoproteinemias.
La concentracin de protenas en el plasma, est en funcin del:

equilibrio hormonal
nutricin
balance hdrico
Datos generales del paciente: especie, raza, edad,
sexo; as como los datos de historia clnica y datos de
anamnesis (informacin sobre el problema actual).
Tcnica utilizada.

Electroforesis y desintometria (proteinograma


electrofortico).
La electroforesis

Es una tcnica para la separacin de molculas segn


la movilidad de estas en un campo elctrico. La
separacin puede realizarse sobre la superficie
hidratada de un soporte slido (p. ej., electroforesis
en papel o en acetato de celulosa), o bien a travs de
una matriz porosa (electroforesis en gel), tambien en
disolucin (electroforesis libre). Dependiendo de la
tcnica que se use, la separacin obedece en distinta
medida a la carga elctrica de las molculas y a su
masa.
La variante de uso ms comn para el anlisis de
mezclas de protenas o de cidos nucleicos utiliza
como soporte un gel.
Al poner la mezcla de molculas y aplicar un campo
elctrico, stas se movern y debern ir pasando por
la malla del gel (una red tridimensional de fibras
cruzadas), por lo que las pequeas se movern
mejor, ms rpidamente.
As, las ms pequeas avanzarn ms y las ms
grandes quedarn cerca del lugar de partida.
Divisiones del electroforesis:

electroforesis de zona (separacin en funcin de la


carga).

isoelectroenfoque.

separacin por tamao en tamiz molecular (tambin


aplicable a cidos nuclicos).
Electroforesis de zona

Su carga neta depende del pH del medio.


Normalmente, la separacin electrofortica de
protenas se hace a pH alcalino, en el que la mayora
de las protenas presentan una carga global negativa.
Tambin se puede trabajar a pH cidos, pero no
demasiado bajos, ya que las protenas precipitan en
medio cido (bsicamente se usa en la deteccin de
variantes de la hemoglobina).
Isoelectroenfoque

En lugar de separar las protenas en funcin de su


carga a un pH dado, se separan en funcin de su
punto isoelctrico (pI):
el pI es el pH en el que la carga neta de la protena es
nula, y depende de la composicin aminoacdica de
la protena.
Separacin por tamao

Permite separar protenas y cidos nuclicos.


En el caso de las protenas, deben ser tratadas con
SDS (sodio dodecil sulfato) para que su carga sea
negativa y todas migren hacia el nodo ,la separacin
se hace en medios de soporte en el que se ha creado
un tamiz molecular (matriz), que hace que las
protenas ms pequeas corran ms que las ms
grandes.
Visualizacin de las protenas.

Una vez separadas las protenas, deben fijarse y


teirse para poder ser visualizadas.
Hay diferentes protocolos en funcin de lo que se
quiere estudiar:
fijacin por calor o qumica
tincin en caso de estudios no especficos
(proteinograma y electroforesis)
fijacin mediante anticuerpos previa a la tincin en
caso de estudiar protenas especficas
(Inmunofijacin).
Tinciones:

La tincin con plata no es utilizada si se desean hacer


anlisis por espectrometra de masas (MS) pero es
ms sensible que la tincin con Azul de Coomassie.
La tincin fluorescente es muy sensible y compatible
con MS pero los costos de tincin son elevados.
Una tincin sensible y barata es la denominada "Blue
Silver" o Coomassie G250 . Adems, esta tincin es
compatible con MS. esta compuesta por azul de
coomassie diluido en una solucin coloidal y se
utiliza agua destilada para desteir el gel de
poliacrilamida.
Dnde se aplica?

pueden analizarse las protenas contenidas en diferentes


lquidos biolgicos:
sangre
plasma (el lquido sanguneo sin clulas)
suero (plasma sin fibringeno)
orina
LCR
lquido sinovial
saliva
lgrimas
As como alimentos, especialmente lcteos y cereales.
Principales protenas del plasma sanguneo

ALBUMINAS: es la mas abundante de las


protenas del plasma.
GLOBULINAS: La fraccin de globulinas es
sumamente compleja. En general las globulinas
contienen protenas conjugadas de dos tipo
principales: glicoprotenas (beta) y lipoprotenas
(alfa)
GAMA O INMUNOGLOBULINAS
La fraccin de globulinas presenta dos tipos en el
proteinograma 1 y 2, excepto en pequeos
rumiante y en el cerdo. La mayora son sintetizadas
en el hgado y entre ellas se encuentran:
Globulinas 1:
ANTITRIPSINA
PROTROMBINA
TRANSCORTINA
Globulinas 2:
CERULOPLASMINA
HAPTOGLOBINA
MACROGLOBULINA
ERITROPOYETINA
b-globulinas :
entre ellas hallamos las glicoprotenas:
protenas del complemento
Ferritina
GAMA O INMUNOGLOBULINAS:
Son anticuerpos formados por el organismo frente a
la presencia de sustancias que son reconocidas como
extraas a l y son sintetizadas por las clulas
plasmticas derivadas de linfocitos B.
Concentracin:

La concentracin total de protenas plasmticas vara


entre 6 8 g/dl.

En clnica tiene cierto inters conocer la relacin


entre las concentraciones de albminas y globulinas
(a:g) cuyo valor normal es en trmino medio, 0,8 a 1.
La disminucin de este valor es un hallazgo
frecuente en clnica.
Relacin albmina:globulinas (rel. A:G)

Es un valor calculado, obtenido de dividir la


albmina entre las globulinas.
Disminucin de la relacin A:G. Aumento de
globulinas por disminucin de albmina.
Elevacin de la relacin A:G.
Hipogammaglobulinemia (frecuente en becerros),
inmunodeficiencia congnita, inmunodeficiencia
adquirida.
densitometra,

procedimiento que mide la intensidad de la


coloracin en los distintos sectores de la tira
coloreada, se puede obtener un trazado que dibuja
una serie de ondas o picos en correspondencia con
cada una de las bandas. La superficie de cada pico es
proporcional a la intensidad de color y tamao de las
bandas originales. Este trazado suele designarse
proteinograma electrofortico.
Proteinograma de referencia para las distintas especies:

vara de acuerdo a diferentes factores fisiolgicos a


saber:
especie
sexo
edad (recin nacidos, viejos)
estado fisiolgico (gestacin y lactancia),
estado metablico (hidratacin, hormonas),
actitud productiva (puesta de huevos, lactancia...)
factores ambientales (efectos nutricionales, estrs).
Alteraciones:

El trmino disproteinemia:
se refiere a cualquier alteracin en la cantidad de
protenas de la sangre.
Hiperproteinemias.

La causa ms frecuente de este tipo de alteracin se


relaciona con:
Hemoconcentracin. Algunos signos clnicos que se
pueden mencionar son:
vmito, diarrea, poliuria, ascitis, fiebre, sudoracin
profusa y, en equinos, en algunos casos de sndrome
abdominal agudo. Se recomienda efectuar perfil de
laboratorio para detectar otras alteraciones
concomitantes como: eritrocitosis,
hiperalbuminemia,
hipergammaglobulinemia e hiperazotemia prerrenal.
Hipoproteinemias.

Se deben considerar las siguientes causas:


Disminucin en la sntesis proteica, provocada por
insuficiencia heptica, alimentacin con escasa
cantidad de protenas, sndrome de mala digestin
(insuficiencia exocrina pancretica), sndrome de
mala absorcin (enteropata con prdida de
protenas) e insuficiencia cardiaca congestiva.
Prdida de protenas, por va renal
(glomerulonefropata), a travs del intestino (diarrea
con prdida de protenas), por quemaduras,
hemorragia.