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AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BRACHYSPIRA

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AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BRACHYSPIRA
Brachyspira hyodysenteriae es el agente etiolgico de la disentera porcina,
enfermedad altamente contagiosa que afecta al intestino grueso del cerdo,
mientras que Brachyspira pilosicoli es responsable de la espiroquetosis colnica
porcina, una colitis mucho menos severa. La incidencia clnica de ambas ha
aumentado en los ltimos aos como consecuencia de la prohibicin de
promotores del crecimiento y de algunos quimioterpicos como carbadox y
dimetidazol. Existen otras especies, pero sin tanta relevancia patgena.

ESPIROQUETAS DE INTERES EN PORCINO

Especie Enfermedad

b-hemlisis fuerte B. hyodysenteriae Disentera porcina

B. pilosicoli Espiroquetosis colnica porcina

Se asla de cerdos sin diarrea


B. innocens (a, b, c)
b-hemlisis dbil (incluye B. murdochii)
(la identificacin de los subgrupos no es
(grupo innocens) necesaria en el diagnstico de rutina)
B. intermedia
(caracteres intermedios entre B. Diarreas y colitis inespecficas
Hyodysenteriae (distintas a la disentera)
y B. innocens)

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Aunque existen otros mtodos de diagnstico ms rpidos y menos
laboriosos, como la inmunocitoqumica, la inmunofluorescencia o el
PCR, el aislamiento microbiolgico sigue siendo la prueba de
referencia, adems de permitir hacer antibiogramas y elaborar
autovacunas.

Brachyspira innocens. Obsrvese la dbil beta El aislamiento se hace a partir de intestino grueso
hemlisis en agar sangre. Cultivo 72 h a 42 C
en jarra de anaerobiosis. Aislada de heces (colon y ciego) o de heces tomadas directamente
porcinas del recto. Los hisopos intestinales o rectales
tambin son vlidos siempre que incluyan medio
de transporte (Amies o Stuart) y al igual que los
rganos y heces se enven refrigerados (nunca
congelados) y lo ms rpidamente posible al
laboratorio para asegurar la viabilidad de las
bacterias. No obstante, en nuestra experiencia la
sensibilidad del aislamiento es algo menor en
Porcin de intestino grueso de porcino con los extremos
anudados. Es una muestra correcta para enviar al laboratorio
hisopos.
para el diagnstico de diferentes enfermedades como
Brachyspira spp., Lawsonia intracellularis, Salmonella spp.,
Escherichia coli, etc.

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Las caractersticas de cultivo de estas bacterias son muy
especiales, por lo que slo se hace en laboratorios especializados
que conozcan el tratamiento previo que hay que dar a las
muestras como los medios de cultivo especiales y las condiciones
de incubacin.

Los resultados obtenidos en nuestro laboratorio mediante cultivo a


Cepa de Brachyspira pilosicoli
partir de 301 casos en los que el veterinario lo solicitaba por
en agar sangre incubado a alguna sospecha, quedan reflejados en la tabla siguiente.
37 C en anaerobiosis.

SENSIBILIDAD DEL AISLAMIENTO DE BRACHYSPIRAS POR CULTIVO


Aislamientos y casos estudiados en los ltimos meses en Exopol: 301 casos

Infecciones mixtas con


Especie Casos positivos (%)
B. hyodysenteriae

B. hyodysenteriae 146 (49) -


B. pilosicoli 12 (4) 3
B. innocens 22 (7) 6
B. murdochii 8 (3) 2
B. intermedia 15 (8) 1
Brachyspira sp. 7 (4) 1
Espiroquetas sp. 17 (7) 4

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De los 301 casos, hemos aislado al menos una
especie de Brachyspira o Espiroqueta en 202
(67%) y adems vemos que es posible encontrar
infecciones mixtas en una misma explotacin y en
los mismos animales. Consideramos como
Brachyspira spp aquellos aislamientos de
brachyspiras b-hemolticas (normalmente dbil) que
no han podido ser identificados por pruebas
Intestino grueso de porcino con enteritis hemorrgica.
Obsrvese que el contenido intestinal es de color rojo
bioqumicas, y que mediante PCR (Laboratorios
intenso. La mucosa intestinal se desprende con facilidad. De Adiagene, Francia) hemos podido confirmar que a
esta muestra se aisl por cultivo bacteriolgico Salmonella menudo son mezcla de dos o ms cepas de
spp. y Brachyspira hyodysenteriae.
diferentes especies que no hemos podido separar.
Llamamos Espiroquetas spp a las no hemolticas y
totalmente apatgenas. Adems es importante
destacar que en 153 casos en los que tambin se
solicitaba la investigacin de Lawsonia
intracellularis, sta se detect en 46 (30%). En 20
casos se identific simultneamente la presencia
de L. intracellularis y B. hyodysenteriae.

Paquete intestinal de un porcino. En la imagen se muestra


la porcin del ileon que vierte en el ciego. Este rea el la
indicada para tomar muestras para el diagnstico de
Lawsonia intracelularis.

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La identificacin fenotpica de los aislamientos permite diferenciar
las especies B. hyodysenteriae, B. pilosicoli, B. intermedia, B.
innocens y B. murdochii mediante varias pruebas de crecimiento y
bioqumicas como el tipo de hemlisis, prueba del anillo o hemlisis
radial, indol, a-glucosidasa, b-glucosidasa, a-galactosidasa e
hidrlisis del hipurato.

Fuerte hemlisis beta en agar


sangre producida por Brachyspira
hyodysenteriae.
El PCR adems de mtodo de diagnstico
directo, permite identificar las cepas aisladas
cuando son una mezcla de varias especies.
La tcnica de PCR disponible en Adiagene
(Francia), basada en la amplificacin del
DNAr 16S, distingue entre las Brachyspira
spp a B. hyodysenteriae, B. pilosicoli, B.
intermedia y B. innocens, aunque estas dos
ltimas no las puede diferenciar entre si.

Pruebas bioqumicas de B. hyodysenteriae y de B. pilosicoli

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En una colaboracin llevada a cabo entre Exopol y Adiagene,
el PCR ha confirmado como B. hyodysenteriae al 100% de
los aislamientos identificados fenotpicamente como B.
hyodysenteriae. Adems, la correlacin obtenida entre los
resultados obtenidos por PCR y por cultivo para el
diagnstico directo de B. hyodysenteriae a partir de 49
muestras de heces, se refleja en la tabla. Como se ve, con
ambas tcnicas obtenemos resultados similares.
Prueba del anillo positiva tpica de B.
hyodysenteriae

CORRELACION ENTRE EL CULTIVO Y EL PCR EN EL DIAGNOSTICO DE DISENTERIA

PCR Positivo PCR Negativo

Cultivo Positivo 16 1

Cultivo Negativo 2 30

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