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Extraccin de

cidos nucleicos

Estefany Proao
Ramiro Altamirano
cidos nucleicos son difciles
de separar de: Componentes
de membrana
Protena residual o aadido
Otras molculas solubles.

Para eliminacin de las


protenas asociadas se utilizan
ez proteoliticas:
Video extraccin ADN

http://m.youtube.com/watch?v=oJsOC03th2A
Qu es?
Protocolo bsico consiste en el
tratamiento homogneo con
disolventes orgnicos.

Etapas bsicas:
Romper pared celular y
membrana plasmtica para
poder acceder al ncleo de la
clula.
Romper membrana nuclear para dejar libre el
ADN.
Proteger el ADN de enzimas que puedan
disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se
precipite en alcohol.
ADN en alcohol se desenrolla
y precipita en la interface
entre el alcohol y el agua.

Alcohol separa el ADN de


otros componentes celulares.
La sal evita la unin de las
protenas al ADN.
Confirmacin de presencia
de ADN se lleva a cabo
mediante electroforesis.

El ADN purificado se puede


cuantificar con un
espectrofluorimetro.
Para qu sirve la purificacin?
Identificar mutaciones.
Ver caractersticas propias
de los tipos de DNA
Para clonar
Aislar DNA afectado y
compararlo con uno bueno.
Identificar resistencia
microbiana.
Evaluar desordenes genticos.
Medicina forense para la
identificacin de personas.
Para hacer tests de paternidad.
Solventes orgnicos
Fenol- cloroformo Isoamlico
Tcnica de extraccin lquido-
lquido en la bioqumica.

En ADN, ARN y protenas.

Este mtodo puede tardar


ms que un sistema basado
en la columna, como la
purificacin basado en slice,
pero tiene una mayor pureza
y la ventaja de una alta
Com funciona?
Separacin de fases por centrifugacin que resulta
en una fase acuosa superior y una fase orgnica
inferior.
ARN se recupera de la fase acuosa.
Tcnica se puede utilizar para la purificacin de
ADN o ARN solo.
TRIZOL Tiocianato de guanidina desnaturaliza
las protenas mientras que el fenol,
isopropanol y agua son solventes con baja
solubilidad.
Con cloroformo o BCP se separan
fase acuosa clara, superior
fase inferior de color rosa brillante
Desventajas
Reactivos altamente
txicos.

Perdida significativa de
ADN.
Salting Out (Wizard)
Tcnica de tipo inorgnica
Utiliza reactivos bajos en toxicidad
Permite visualizar la malla del ADN

DESVENTAJA
Requiere mayor cantidad de muestra
Lisis
Extraccin
Precipitacin
Resuspensin
Video salting Out

http://m.youtube.com/watch?v=pxJMAGNWG
IY
Columnas Silice (Purelink DNA
invitrogen)
Lisis de partculas a elevadas temperaturas
Proteinasa K
ADN purificado para aplicaciones que
permiten la deteccin viral y genotipificacin
A partir de fluidos biolgicos frescos o
congelados libres de clulas (plasma, suero,
lquido cefalorraqudeo) y sobrenadantes de
cultivo celulares
Unin selectiva de cidos nucleicos virales a la
matriz de slice bajo altamente condiciones de
desnaturalizacin
Ventajas de columnas de silice

Purificacin rpida y eficiente alta calidad


Usando centrifugacin (no contaminacion de
muestra)
500 muestras de clulas libres en 45 minutos
Alto rendimiento de procesamiento de muestras
Purificada libre de cido nucledo de
contaminantes tales como protenas y nucleasas
Rendimiento fiable de los cidos nucledos
virales purificados en aplicaciones posteriores
FTA
Proporciona una manera muy fcil de recoger
y aislar muestras de cido nucleico para el
anlisis.
Basta con aplicar prcticamente cualquier tipo
de muestra biolgica a la matriz de TLC, y los
cidos nucleicos son instante capturado y
estabilizado
Caracteristicas y beneficion FTA
Simple coleccin
Almacenamiento temperatura ambiente
Purifiacion rapida
Automatizable
Aplicaciones
Sangre, anlisis viral y bacteriana
Identificacin gentica
tipificacin HLA
Identificacin molcula
anlisis del medio ambiente
Chelex sigma
Resina de intercambio inico compuesta de
estireno-divinilbenceno copolmeros con iones
iminodiacetato pareadas que actan como
grupos quelantes(sustancias que tienen la
propiedad de fijar los iones metlicos de un
determinado complejo molecular )
Para el cabello, fluidos corporales y otros
contaminantes se eliminan de la superficie. El
material de raz se incuba a continuacin en el
Chelex
Centrifugacion diferencial
Centrifugacion en gradiente de
densidad
Citometria de Flujo
Bibliografa:
http://www.monografias.com/trabajos91/info
rme-experimento-extraccion-adn/informe-
experimento-extraccion-
adn.shtml#ixzz3EoqgMYL3
http://centrodeartigo.com/articulos-
enciclopedicos/article_99850.html