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Solubilidad

Es un balance entre atracciones


1. Atracciones
disolvente-
disolvente

2. Atracciones
soluto-soluto

3. Atracciones
disolvente-soluto

Habr disolucin slo si 3 es mayor que 1 y que 2


Solubilidad de protenas y
separaciones por precipitacin
Solubilidad de protenas en fuerza inica baja
Precipitacin a fuerza inica alta
Precipitacin con disolventes orgnicos
Precipitacin con polmeros
Precipitacin por afinidad
Precipitacin por desnaturalizacin selectiva
pH
disolventes orgnicos
temperatura
Scopes, R. K. Protein purification (1994)
Precipitacin a fuerza inica baja
Salting in
La solubilidad de
+ + + + las protenas es
Repulsin
+ + resultado de
interacciones
polares con el
+ + - - Atraccin disolvente,
+ -
interacciones
inicas con las
+ - + - Poca atraccin/repulsin sales presentes y
+- en el P.I. fuerzas
electrostticas
repulsivas entre
Poca atraccin/repulsin
+ + - - + + - - entre agregados
molculas con
+ - + - heterogneos cargas del mismo
signo.
Precipitacin a fuerza inica baja
Salting in

Este comportamiento es til en experimentos de dilisis y debe


considerarse durante la filtracin en gel
La precipitacin isoelctrica se puede modificar agregando sales que
afecten el pH isoelctrico
Precipitacin a fuerza inica alta
Salting out

El fenmeno de precipitacin a fuerza inica alta


depende principalmente de la hidrofobicidad de la
protena

Se puede entender como un equilibrio de competencia


entre la sal y la protena por el agua de solvatacin

P(H2O)n + AB P + A+(H2O)x + B-(H2O)x


Precipitacin a fuerza inica alta
Salting out

La solvatacin
de una regin
hidrofbica es
un fenmeno
demandante
desde el punto
de vista
entrpico
Precipitacin a fuerza inica alta
Salting out
Precipitacin a fuerza inica alta
Salting out

Por qu (NH4)2SO4?

Puntos a considerar
Efectividad de la precipitacin
Interaccin directa con la protena
Influencia del pH en la distribucin de especies
Solubilidad de la sal
DHdis
Densidad de la disolucin concentrada
Precio
Precipitacin a fuerza inica alta
Salting out

Serie liotrpica o serie de Hofmeister


SCN < ClO4 < NO3 < Br < Cl < acetato
< SO42 < PO43

NH4+ > K+ > Na+

Por qu?
Hofmeister, F. (1888) Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 24, 247-260.
Precipitacin a fuerza inica alta
Salting out

Cunto pongo?
Precipitacin a
fuerza inica alta
Salting out

Log S = A - m[(NH4)2SO4]
Precipitacin por disolventes

Qu disolventes?

Qu hacen los
disolventes?

Se desnaturalizan
las protenas?
Precipitacin por disolventes
Cunto disolvente?
Precipitacin por disolventes

Desnaturalizacin, la
puedo usar?
Precipitacin por afinidad

Agregado lineal formado por un


anticuerpo policlonal y una
protena monomrica

Agregado lineal formado por un


anticuerpo y una protena dimrica

Agregado tridimensional formado


por anticuerpos y una protena
tetramrica
Precipitacin por desnaturalizacin
selectiva
Precipitacin por desnaturalizacin
selectiva
Con temperatura

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