Colorantes y

coloraciones
Altagracia Jimnez Daz
QUE SON LOS COLORANTES ?

SON SUSTANCIAS CAPACES DE

TRANSMITIR SU COLOR A
OTRAS.
3 Los colorantes

Algunos colorantes teirn mejor slo despus

de que la clula haya sido tratada con otra
sustancia qumica, que no es un colorante por
s mismo.
Esta sustancia se denomina mordiente; un
mordiente habitual es el cido tnico, el lugol.
El mordiente se combina con un constituyente
celular y lo altera de tal modo que ahora s
podr reaccionar con el colorante.

26/09/17
Colorantes y coloraciones
Clasificacin Segun Estructura
Quimica
 Colorantes Bsicos Colorantes cidos

Azul de metileno, azul de

Eosina
quinolena
Verde malaquita Fucsina cida

Safranina Rosa de Bengala

Cristal violeta
 Coloraciones

SON INTERCAMBIOS
IONICOS ENTRE EL COLORANTE Y
LA BACTERIA
 Coloracin

Coloracin positiva: se tie lo que queremos observar

Coloracin negativa es cuando no se tie lo que
queremos observar
Coloracin simple ; se adiciona un solo colorante
Coloracin compuesta si utiliza mas de un colorante
Propiedad tintorial; es el comportamiento diferente de
las bacterias frente a una misma tcnica de coloracin
Coloracin diferencial: se agrega mas de un colorante
en diferentes etapas y las estructuras teidas son
diferenciadas por el color y por la forma
 Pasos previos a toda coloracin
Hacer Frotis dejar Secar y Fijar

Frotis

Secar

Fijar
11 Coloracin de Gram
Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un mdico dans con estudios en
bacteriologa y farmacologa.

La coloracin de Gram. tiene inters taxonmico

ya que divide las bacterias en dos grandes grupos,
bacterias Gram positivas que se tien de
morado y bacterias gram negativas que se
tien de rojo
La coloracin de Gram es positiva compuesta
y diferencial.

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12 Tincin Bacteriolgica de Gram.

El equipo para realizar la
tincin de Gram. consta de:
Colorantes
Cristal Violeta, Safranina.
Mordiente : Yodo-Lugol

Decolorante: Alcohol-
Cetona.
Bandeja de tincin.
Asa bacteriolgica o hisopo.
Frasco lavador.
Muestra bacteriana slida
(agar), lquida (caldo) o espcimen
clnico.

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La coloracin de Gram
se fundamenta en la
diferencias fsico
qumica de la pared
Celular
 Pared celular de las bacterias Gram positivas:
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El peptidoglicano se dispone en
varias capas lo que le otorga
grosor a la pared.
Atraviesan el peptidoglicano
polisacridos cidos,
denominados cidos teicoicos.
Los cidos teicoicos son de dos
clases: poliglicerol fosfato y
poliribitol fosfato.
Las funciones primarias de
estos polmeros son la
estabilizacin del peptidoglicano
y la captura de Mg++.

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15 Pared celular en bacterias Gram negativas

El LPS es una molcula que contiene tres regiones

diferentes: el lpido A, el core y el antgeno O.
El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando
la bacteria se divide o muere.
Es un potente estimulador de los macrfagos, lo que
causa la activa liberacin de citoquinas, responsables
de las manifestaciones clnicas de las infecciones por
bacterias Gram negativas y que varan desde una
fiebre hasta el shock sptico.
En esta membrana externa se encuentran las porinas.

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Entre la membrana externa y la membrana celular

se crea un compartimiento virtual, llamado espacio
periplsmico.
El espacio periplsmico es una matriz que incluye
al peptidoglicano, enzimas, protenas captadoras
de nutrientes y sustancias de secrecin.
La membrana externa contiene numerosas
protenas, siendo las porinas las ms abundantes.
Se denominan as, porque forman poros que
comunican el exterior con el espacio periplsmico.

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17 Pared celular en bacterias Gram negativas

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18
Pared celular en bacterias Gram negativas

Su pared celular es ms delgada, pero ms compleja que la

de los Gram positivas.
El peptidoglicano se dispone en una sola capa, pero por
fuera de ella se encuentra una segunda membrana
denominada membrana externa.
La membrana externa es una membrana asimtrica, porque
si bien la monocapa interna est formada por fosfolpidos, la
monocapa exterior est formada por un tipo especial de
lpido, denominado lipopolisacrido (LPS).

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 Coloracin de Gram
Es positiva compuesta y diferencial

Paso 1- Cubrir la preparacin con cristal violeta por 1 minuto y

lavar con agua.
Paso 2- Cubrir la preparacin con Yodo-Lugol por 1 minuto y
lavar con agua.
Paso 3- Cubrir la preparacin con Alcohol-cetona durante
algunos 15 seg y lavar con agua.
Paso 4- Cubrir la preparacin con Safranina por 1 minuto y la
lavar con agua.
Secar y observar
Colorantes de Gram: Cristal violeta y safranina

Reactivos: Yodo-Lugol

Solvente: Alcohol- cetona

Resultados
Gram+ : color Morado
Gram- : color rojo
Coloracin de Gram
22 Coloracin de Gram. Paso 1.-

Paso 1.- Cubrir la

preparacin con Cristal
Violeta por 60 seg.
y lavar suavemente
con agua.

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23 Coloracin de Gram.

Paso 2.- Cubrir la

preparacin con Yodo-
Lugol por 60 seg y
lavar suavemente con
agua.

Altagracia Jimenez Diaz MA 26/09/17

24 Coloracin de Gram.

Paso 3.- Cubrir la

preparacin con
Alcohol-Cetona durante
algunos segundos (5-
10) y lavar
suavemente con agua.

Altagracia Jimenez Diaz MA 26/09/17

25 Coloracin de Gram.

Paso 4.- Cubrir la

preparacin con
Safranina por 60 seg y
lavar suavemente con
agua.
Secar y Observar con
lente de 100x
(inmersin).

Altagracia Jimenez Diaz MA 26/09/17

26

Resultados de la coloracin de Gram.

Bacterias teidas de morado: Gram positivas
Teidas de rojo: Gram negativas
Podemos observarle la forma, la disposicin y la
propiedad tintorial.
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Al observar al microscopio la
coloracin de Gram
Reportamos Se requiere de un
microscopio
La forma
Usamos lente de
La disposicin 100 X con aceite
La capacidad de inmersin
tintorial
28 Coloracin de Ziehl Neelsen

La coloracin de Ziehl Neelsen al igual que la de Gram es

positiva, compuesta y diferencial.
Colorantes y Reactivos: fucsina bsica fenicada - solucin
de alcohol-cido (3% de HCl en etanol de 95) - azul de
metileno

Esta tincin permite diferenciar a los microorganismos que

son cido alcohol resistentes, de color rojo,
rojo de los que no lo
son, de color azul.
azul Se utiliza en la identificacin de
mycobacterias.

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Es una coloracin especfica para colorear bacterias

cuyas paredes celulares contienen largas cadenas de
cidos grasos.
Por su alto contenido de acido micolico (cera no
saponificable) tienen la capacidad de unir el colorante
fucsina a su pared de manera que hacen a la clula
resistente a la decoloracin con alcohol cido.
Son bacilos cido-alcohol resistente (BAAR), las
mycobacterias, y las nocardias.

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 Coloracin de Ziehl Neelsen
30
REALIZACIN

Preparar un frotis bacteriano.

Se deja secar al aire y se fija al calor.
Cubrir la preparacin con carbofucsina.
Calentar la preparacin con una lmpara de alcohol durante 5 min. No debe hervir.
Si se evapora, se aade ms carbofucsina para que no se seque en ningn momento.
Lavar con agua el resto de colorante.
Decolorar con la mezcla alcohol-cido por tres minutos
Lavar con agua .
Teir con azul de metileno 1 min.
Lavar con agua el resto de colorante.
Secar la preparacin.
Examinar al microscopio.
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31 Resultados de la coloracin de
Ziehl Neelsen

Altagracia Jimenez Diaz MA 26/09/17

Tincin de ziehl neelsen
Que es la tincin de Ziehl Neelsen?

Tcnica de tincin utilizada para identificar microorganismos

patgenos. Del genero Mycobacteriun especies tuberculosis y
leparae.

Las cuales poseen abundantes cidos micolicos y cera no

saponificable
Se fundamenta en la propiedad que poseen algunas clulas
bacterianas de resistir a la decoloracin con un alcohol- bsico.
procedimiento
 Tincin de ZIEHL NEELSEN

.
BAAR BAANR

Fuscina
fenicada

Decolora
cin con
alcohol
acido

Azul de
metileno
 Tincin de la capsula
bacteriana.
Funciones de la capsula bacteriana.
37 Coloracin de Cpsula

La tinta china o la nigrosina dan un fondo oscuro

sobre el cual la cpsula de terminados
microorganismos como el Cryptococcus neoformans
se observar como un halo claro alrededor del
microorganismo.

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38 Coloracin de Cpsula

Mtodo con tinta china (Mtodo de Gin)

Tcnica
Colocar unas gota de la sol. De dextrosa en un tubo.
Tomar una pequea cantidad del material bacteriolgico del cultivo y
mezclar con las gotas de dextrosa.
Colocar una gota de tinta china en un porta objetos y aadir una gota
de la mezclar anterior y con el extremo de un portaobjetos , hacer un
frotis delgado y secar al aire, fijar con alcohol metlico por un minuto.
Teir por 2 minutos con Cristal violeta o safranina
Lavar con abundante agua, secar y observar al microscopio.

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39 Coloracin de Cpsula
Resultado
las capsulas se observan transparentes
sobre fondo negro

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Gracias por su atencin