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ENZIMAS

Son molculas de naturaleza proteica, sintetizadas


por clulas de los organismos vivos.
Funcionan como catalizadores biolgicos acelerando la
velocidad de las reacciones qumicas.
Las enzimas no sufren ninguna modificacin en el
proceso de la reaccin.
Las enzimas no cambian la constante de equilibrio de
una reaccin qumica.
Intervienen tanto en reacciones endergonicas como
exergonicas.
ENZIMAS

SUSTRATO .
Es la molcula sobre la cual acta la enzima para formar
productos.
CENTRO ACTIVO .
Es la regin donde el sustrato se une a la enzima.
Se produce la interaccin entre la enzima y el sustrato cuya
estructura es complementaria en razn de la forma, dimensin y
naturaleza qumica con el sustrato.
VELOCIDAD DE REACCION .
Es la cantidad de sustrato transformado o producto formado por
unidad de tiempo.
CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS

Segn la reaccin que catalizan :

. Clase 1 : Oxidorreductasa : Transfieren hidrogeno, actan en


el oxigeno o en el perxido. Ejm. Deshidrogenasas, oxidasas,
reductasas, peroxidasas, catalasa, oxigenasas, hidroxilasas.
. Clase 2 : Transferasas : Transfieren diversos grupos, ejm
Transadolasas y transcetolasas, quinasas , fosforiltransferasas,
fosfomutasas, aminotransferasas.
. Clase 3 : Hidrolasas : Desdoblan un enlace en una molcula
(lisis con agua) con la formacin de dos productos. Ejm.
CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS
Esterasas, glucosidasas, peptidasas, fosfatasas, tiolasas,
fosfolipasas, amidasas, desaminasas, ribonucleasas.
. Clase 4 : Liasas : Convierten un reactante en dos productos
que contienen un doble enlace. Ejm. Descarboxilasas,
aldolasas, hidratasas, deshidratasas, sintetasas.
. Clase 5 : Isomerasas : Catalizan reacciones de transferasas
intramoleculares. Ejm. Racemasas, epimerasas, mutasas,
isomerasas.
. Clase 6 : Ligasas : Catalizan reacciones de condensacin
dependientes de ATP. Ejm. Carboxilasas, sintetasas.
CARACTERISTICAS DE LAS ENZIMAS

1. Los enzimas son altamente especficos, tanto en la reaccin


que catalizan como en la seleccin de las sustancias
reaccionantes.
2. Los enzimas modifican solo la velocidad de reaccin y no
alteran el equilibrio de la reaccin.
3. Los enzimas actan formando un complejo transitorio con el
reactivo, estabilizando as el estado de transicin.
4. Los enzimas aceleran las reacciones mediante la disminucin
de la energa libre de activacin de Gibbs.
CARACTERISTICAS DE LAS ENZIMAS
5. Los enzimas tienen un enorme poder cataltico.
6. Modifican la estructura qumica del sustrato, segn el tipo de
reaccin que catalizan.
7. Pueden ser capaces de intercambiar diferentes formas de
energa.
8. No se consume ni sufre cambio permanente de su estructura
durante el proceso cataltico.
Para funcionar adecuadamente, algunas enzimas necesitan
adems del componente proteico, otra entidad qumica
denominada Cofactor, que puede ser de naturaleza orgnica
(coenzima) u organometalica (ion metlico: Zn+2, Mg+2, Cu+2 etc )
CENTRO ACTIVO DE LA ENZIMA
1. Es una hendidura tridimensional formada por grupos que
proviene de diferentes partes de la secuencia lineal de
aminocidos.
2. El centro activo supone una porcin relativamente pequea
del volumen total de la enzima.
3. Los centros activos son hoyos o hendiduras.
4. Los sustratos se unen a los enzimas por numerosas fuerzas
dbiles.
5. La especificidad del enlace depende de la disposicin
exactamente definida de los tomos del centro activo.
INTERACCION ENZIMA-SUSTRATO
1.MODELO DE LA LLAVE Y LA CERRADURA.
Propuesto por Emil Fischer, el centro activo de la enzima (la
cerradura) sol acepta un tipo especifico de sustrato ( la llave),
considera al centro activo inflexible o muy rgido.
El centro activo de la enzima por si mismo es complementario a
la forma del sustrato.
2.MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO.
Propuesto por Daniel Koshland , la unin del sustrato induce un
cambio en la conformacin espacial de la enzima y da por
resultado una adaptacin complementaria despus que el
sustrato a sido ligado. El centro de unin tiene una forma
tridimensional diferente antes que el sustrato se ligue.
COFACTORES ENZIMATICOS

Adems de la estructura protenica que confiere a los enzimas


una configuracin tridimensional, la mayora de ellas requiere
algunas molculas de naturaleza no proteica (inorgnica u
orgnica) para su funcin cataltica.
APOENZIMA Y HOLOENZIMA
La parte proteica de la enzima desprovista de los cofactores se
denominan apoenzima ( catalticamente inactiva)
La adicin del cofactor a la apoenzima da lugar a la holoenzima,
es decir, la enzima completa y activa.
Apoenzima + Cofactor ===== Holoenzima
COFACTORES ENZIMATICOS
Los cofactores inorgnicos actan por uno de los siguientes
mecanismos:
1. El cofactor, es capaz de catalizar una reaccin, sin embargo en
presencia de la enzima, aumenta su capacidad cataltica y
adquiere especificidad por el sustrato.
2. Puede formar un complejo con el sustrato y el centro activo de
la enzima, permitiendo as la catlisis.
3. Atrae electrones en algn punto del centro cataltico.
Ejm., las quinasas no son activas en ausencia de Mg +2
COENZIMAS
Las coenzimas son necesarias para transportar de forma
transitoria grupos funcionales durante la reaccin catalizada
por la enzima.
Muchas son derivados de vitaminas y su unin a la porcin
proteica puede ser covalente o no covalente.
Grupo prostticos.- Funcionan tambin como cofactores o
co-sustratos enzimticos, pero a diferencia de las coenzimas se
encuentran firmemente unidos a la apoenzima. Ejm. En los
citocromos, el grupo prosttico hemo esta unido fuertemente
y requiere cidos fuertes para disociarse del citocromo
CARACTERISTICAS DE COENZIMAS
1. Son termoestables, mantienen su estructura qumica a
temperaturas en que las protenas se desnaturalizan.
2. En general son derivados de vitaminas.
3. Diversas enzimas que realizan la misma actividad cataltica,
utilizan la misma coenzima.
4. Funcionan como co-sustrato ya que son modificados durante
una reaccin cataltica, retornando a su forma original en
otra reaccin.
Entre las reacciones catalizadas por coenzimas estn las de
oxido-reduccion, las de transferencia de grupos funcionales,
las de isomerizacin.
CINETICA ENZIMATICA
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.
Proporciona informacin directa acerca del mecanismo de la
reaccin cataltica y de la especificidad de l as enzimas.
La capacidad cataltica de las enzimas radica en las propiedades
del centro activo, el cual hace que la actividad cataltica de las
enzimas sea altamente sensible a cualquier modificacin de las
caractersticas fisicoqumicas del medio, pH, temperatura y a la
fuerza inica.
La velocidad es proporcional a la concentracin de un
reactante (A) por unidad de tiempo.
Velocidad = k1(A)1 = K1 (A)
CINETICA ENZIMATICA
Velocidad = ko (A)o = Ko
donde k1 es la constante de velocidad de primer orden y (A) es
la concentracin de A. Si la velocidad es independiente de la
concentracin de A, el exponente es cero y la reaccin se
describe como una reaccin de orden cero, cuya velocidad es
igual a ko.
Adems puede modificarse o modularse por variaciones en la
concentracin de ligandos especficos que se unen del centro
activo, disminuyendo o incrementando la velocidad de reaccin.
V= -d(S) /dt = d (P) / dt
Esta variacin se determina en diferentes rangos de tiempo y
concentraciones como 10-12 a 10-8 Molar.
CINETICA ENZIMATICA

En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten, propusieron un


modelo sencillo que explica las caractersticas cinticas de las
enzimas, se necesita un complejo especifico ES, intermediario
en la catlisis. Es la hiptesis de aproximacin al equilibrio.
E + S === ES ---- E + P

Briggs y John Haldane sugirieron la hiptesis del estado


estacionario, toma en cuenta las constantes de velocidad.
Existe un equilibrio entre la velocidad de formacin del
complejo ES y la velocidad de descomposicin del complejo
ES.
CINETICA ENZIMATICA
La ecuacin de Michaelis-Menten

Vo = Vmax (S) / Km + (S)

Vo = Velocidad de catlisis.
Vmax = Es la velocidad a la cual la enzima se encuentra
saturado por el sustrato , bajo condiciones de temperatura,
pH, fuerza inica y concentracin de enzima.
Km= Es aquella concentracin de sustrato a la cual la
velocidad de reaccin se hace la mitad de la velocidad
mxima.
CINETICA ENZIMATICA

Es conveniente transformar la ecuacin de Michaelis-Menten


en otra que represente grficamente una lnea recta.
Se consigue tomando los valores inversos de la ecuacin de
Michaelis-Menten.
Ecuacin de Lineweaver Burk
1 / V = Km / Vmax x 1 / (S) + 1 / Vmax

Caractersticas de los valores de Km


Para la mayora de las enzimas Km varia de 10-1 a 10-7 M.
El valor de Km para una enzima depende de cada sustrato en
particular y condiciones ambientales como pH, temperatura,
fuerza inica.
CINETICA ENZIMATICA
Km es la concentracin de sustrato a la cual la mitad de los
centros activos estn ocupados .
Cuando Km es relativamente grande (10-1 a 10-3) indica una
unin dbil del complejo ES.
Km es unas medida de la fuerza con que el sustrato se une a
la enzima, cuanto mas alto es su valor, menor es la fuerza con
que se une el sustrato a la enzima.
Caractersticas de la Velocidad mxima
La velocidad mxima revela el numero de recambio de la
enzima.
El numero de recambio, es el numero de moles de sustrato
que reaccionan para formar producto por mol de enzima por
unidad de tiempo, implica que la enzima esta saturada por
completo con el sustrato y de este modo la reaccin procede a
su mxima velocidad.
UNIDADES ENZIMATICAS
La actividad cataltica de una enzima se expresa en unidades
estandarizadas por la Comisin de Enzimas.
Unidad de Actividad Enzimtica (U).- Es la cantidad de enzima
que cataliza la formacin de micromol (um) de producto por
minuto en condiciones estndar . Se expresa en unidades
catalticas por unidad de volumen ( U / mL )
Catal.- Es la cantidad de enzima que cataliza la conversin de un
mol de sustrato por segundo .
Actividad Especifica.- Es la pureza de la actividad enzimtica,
expresado en U / mg de protena.
1U= 16.67 x 10 -8 catales
INHIBICION ENZIMATICA

La presencia de ciertas molculas en una reaccin enzimtica


puede disminuir la velocidad de reaccin al interferir con la
formacin del complejo enzima-sustrato, con su disociacin o
con ambos procesos.
Estas molculas se denominan inhibidor y afectan la cintica de
la reaccin de muy diversa manera.
1. INHIBICION IRREVERSIBLE.
Son molculas que se suelen unir a la enzima mediante
enlaces covalentes con los residuos imprescindibles para la
catlisis impidiendo su funcin, tambin pueden unirse
mediante interacciones no covalentes muy estables.
INHIBICION ENZIMATICA
La inhibicin irreversible, implica la reaccin del inhibidor con
un residuo de un aminocido en el centro activo de la enzima.
No tienen un comportamiento cintico de Michaelis-Menten,
su principal utilidad es la creacin de frmacos.

2. INHIBICION REVERSIBLE.
Son molculas que se unen a la enzima mediante
interacciones no covalentes, mas o menos estables, de forma
reversible.
La inhibicin reversible no implica modificaciones covalentes.
INHIBICION REVERSIBLE

a. INHIBICION COMPETITIVA.
Se caracteriza porque el inhibidor se une al mismo sitio que el
sustrato, impidiendo la formacin del complejo ES y la
formacin de productos.
Suele ser una molcula semejante al sustrato de la reaccin de
forma que los dos ligandos compiten por unirse al centro activo.
Como la unin es reversible, cuando la concentracin de sustrato
es elevada es poco probable que el inhibidor se una a la enzima,
por lo que la reaccin muestra una Vmax normal.
INHIBICION ENZIMATICA
b. INHIBICION ACOMPETITIVA.
Los inhibidores acompetitivos se unen exclusivamente al
complejo ES en un lugar diferente al centro activo. El efecto
sobre los parmetros cinticos en presencia del inhibidor es la
disminucin de Vmax y Km.
c. INHIBICION NO COMPETITIVA.
El inhibidor muestra la afinidad tanto por la enzima como por el
complejo ES y la unin se realiza en un lugar distinto del centro
activo.
Su efecto no se puede evitar aumentando la concentracin de
sustrato y produce una disminucin de la Vmax ya que el
complejo ternario ESI no genera producto.
REGULACION ENZIMATICA
Estas enzimas pueden cambiar su actividad
como respuesta a ciertas modificaciones y
suelen ser las que catalizan la primera de las
reacciones de la secuencia.
1. ENZIMAS ALOSTERICAS.
Las enzimas alostericas se unen de forma
reversible no covalente de uno o mas ligandos
denominados moduladores o efectores, que
se unen en otro lugar diferente al centro
activo pero que es especifico para cada
modulador.
ENZIMAS ALOSTERICAS
Estos ligandos inducen un cambio de
conformacin que puede aumentar (
moduladores positivos) o disminuir
(moduladores negativos) la afinidad de la
enzima por el sustrato.
En aquellos casos en que el mismo sustrato
tiene un efecto modulador se denomina
interacciones homotropicas y son siempre
regulaciones positivas.
ENZIMAS ALOSTERICAS

En las enzimas homotropicas, el centro activo


y el sitio regulador son el mismo.
Cuando el ligando es una sustancia diferente
se dice que es una interaccin heterotropica y
en este caso pueden ser positivas o negativas.
La mayora de las enzimas alostericas son
oligomericas y estn formadas por varias
subunidades. La unin del modulador a una
ENZIMAS ALOSTERICAS

de las subunidades produce un cambio de


conformacin que se transmite a las otras
subunidades con lo que se consigue un efecto
cooperativo. Existen dos modelos :
Modelo Concertado.
Propone que, en ausencia de ligando, existe
un equilibrio entre dos conformaciones de la
enzima: una tensa y una relajada.
ENZIMAS ALOSTERICAS

Los moduladores negativos tienen mas


afinidad por la forma tensa, y los moduladores
positivos y el sustrato por la forma relajada.
La presencia del modulador desplaza el
equilibrio hacia la forma por la que presenta
mayor afinidad, consiguiendo una modulacin
negativa o positiva dependiendo del tipo de
modulador.
ENZIMAS ALOSTERICAS

Modelo Secuencial.
Propone que, cuando el ligando se une a la
primera subunidad, se produce un cambio de
conformacin que se transmite a las otras
subunidades produciendo un aumento o una
disminucin de la afinidad de la enzima por el
sustrato .
ISOZIMAS
Algunos procesos metablicos estn
regulados por enzimas que existen en
diferentes formas moleculares, denominados
isoenzimas, que tienen secuencias de
aminocidos semejantes pero no idnticas.
Todas las formas presentan actividad
enzimtica y catalizan la misma reaccin
qumica, presentan diferentes propiedades
cinticas ( Km, Vmax , efectores, coenzimas e
incluso por su distribucin celular.
ISOENZIMAS
La lactato deshidrogenasa cataliza una
reaccin clave en el metabolismo muscular.
Lactato + NAD+ ==== Piruvato + NADH
La LDH es un tetrmero, que consta de dos
tipos de subunidades , de la forma M4
(musculo esqueltico) y H4 (musculo cardiaco),
formas hibridas: M4, M3H, M2H2, MH3, H4
MODIFICACION COVALENTE

Muchas enzimas cambian su actividad como


consecuencia de una modificacin covalente
en su estructura. Algunas enzimas sufren
reacciones de adicin de grupos fosforilo,
adenililo, uridilo, metilo.
Las formas activa y menos activa presentan
caractersticas cinticas distintas, e incluso
pueden variar en su forma de regulacin.
MODIFICACION COVALENTE
Estas reacciones estn catalizadas por sus
correspondientes enzimas especificas, que en
el caso de la fosforilacin se denomina
quinasas, se realiza en las cadenas laterales
de residuos de Ser, Tyr, Tre.
La adicin de un grupo cargado en la protena
puede afectar tanto en su conformacin como
a sus posibles interacciones con el sustrato.
Las alteraciones qumicas que cambian la
MODIFICACION COVALENTE
la actividad de una enzima son:
Fosforilacin de los grupos hidroxilo de
serina, treonina o tirosina.
Acoplamiento de un adenosil monofosfato a
un grupo hidroxilo semejante.
Reduccin de puentes disulfuro de cistena.
Ejm. La glucogeno fosforilasa cataliza la
degradacin del polisacrido de reserva
glucgeno, para formar glucosa-1-P .
ACTIVACION POR RUPTURA PROTEOLITICA

La forma activa de una enzima surge tras la


escisin de un fragmento de la cadena
polipeptdica de un precursor inactivo
denominado zimogeno, experimenta una
ruptura en uno o varios enlaces peptdicos
especficos para que se produzca la forma
activa de la enzima.
La perdida de un fragmento de la cadena
produce cambios conformacionales en estas ..
ACTIVIDAD POR RUPTURA PROTEOLITICA

enzimas que hacen accesible su centro activo.


Muchas de las peptidasas digestivas (enzimas
que degradan protenas) del estomago y del
pncreas, incluidas la quimotripsina, pepsina y
carboxipeptidasa, estn reguladas por este
mecanismo.
El proceso de coagulacin sangunea depende
de una serie de etapas de activacin y cada
una se inicia mediante una ruptura
proteoltica.