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DC
IL-17 Neutrfilos IL-1b TH1-TH17
NK
IL-22 + IL-23 (CD8)
LB
Hiptesis Objetivos
El papel de los Se utilizar una
Neutrfilos en la vacuna que es capaz
induccin de de inducir Th1 y Th17
respuesta especificas especficos de
tipo Th1 y Th17 ante respuestas de clulas
la vacunacin contra T.
M.tuberculosis
ofrecer proteccin al
husped
Materiales y mtodos
Preparacin de la vacuna rCDMx.
Animales
Ratones C57BL/6, Knockout a gen IL-22 , otros a IL-17 y IL- 23. todos ellos
de 8 semanas de edad.
Esquema de vacunacin
El C57BL / 6 (n= 12), IL-17 KO (n= 12), e IL-22 KO (n= 12).
Los ratones fueron vacunados por va subcutnea con 100 ul (10 7CFU) de
mc2-CMX
Infeccin M.tuberculosis
Los cultivos deM. tuberculosis(H37Rv) en 7H9 que contena 0,05% de
Tween 80 y OADC se hicieron crecer hasta fase semilogartmica, y las
alcuotas se congelaron en 20% de glicerol a -80 C.La concentracin del
lote micobacterias se determin 30 das ms tarde en placas y contando el
UFC de viales.
Treinta das despus del desafo, los animales fueron sacrificados y los
lbulos pulmonares craneales y medial derecha se homogeneizaron para
verificar la carga bacteriana
Respuesta especfica CD4 T inmunes a CMX
La respuesta inmune especfica inducida por la vacunacin fue
probado antes del desafo (15 das despus del refuerzo) y 30
das despus de la infeccin porM.tuberculosis ..Seis animales
de cada grupo se sacrificaron por dislocacin cervical y se
extirparon los bazos para evaluar las respuestas inmunes
especficas.
La suspensin de clulas individuales obtenido despus del
paso a travs de un colador 70 um (BD Biosciences) se trat
con tampn de lisis (0,15 M NH 4Cl y 10 mM de KHCO3).
La suspensin se ajusto a 1 x106 /ml en 200ul
CD4-FITC
IL-17-PerCP
INFy- PE
Evaluacin de neutrfilos
Los neutrfilos de los animales vacunados se evalu
30 das despus del desafo conM. Tuberculosis, Se
obtuvieron los esplenocitos .
Las clulas se incubaron durante 30 minutos con
APC-conjugado anti-GR1 , PerCP-conjugado anti-
CD14, anticuerpos anti-CD11b conjugado con PE
anti-CD11c y conjugados con FITC .
Deplecin de neutrfilos
C57BL/6