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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA

FACULTAD AGROPECUARIAS Y DE RECURSOS RENOVABLES

INGENIERA FORESTAL

BIOQUMICA

ESTUDIANTE: ERIK MISAEL GUAILLAS

DOCENTE: Ing. SCAR ALBITO

TERCERO A
TEMA

Efecto de Microorganismos Rizosfricos sobre Germinacin


y Crecimiento Temprano de Anacardium
Excelsum(CARACOL).

AUTORES: DAYANT BARRETO, NELSON VALERO, ADRIANA


MUOZ , ARNALDO PERALTA.

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR (2007)

COLOMBIA
RESUMEN
El presente trabajo se enfoc en aislar y evaluar el efecto de la
inoculacin de biopreparados con base en RPCV exclusivos de
Anacardium excelsum.
Seleccionando microorganismos exclusivos en esta especie arbrea:
Pseudomonas fluorecens, putida y Bacillus licheniformis.

Los resultados obtenidos en relacin al porcentaje de germinacin


muestran que los biopreparados a base de estas bacterias nativas
promovieron eficazmente el crecimiento de semillas, en cuanto al
ensayo de estimulacin del crecimiento las bacterias, presentaron
ptimos resultados en la aceleracin del crecimiento. Lo que sugiere
la potencialidad de estos en procesos de reforestacin.
Segn Glick,Patten, Holguin Y Penrose(1999)
Las Rizobacterias Promotoras del Crecimiento
vegetal RPCV, son bacterias de vida libre
presentes en el suelo, capaces de adaptarse,
colonizar y persistir en la rizsfera de las
plantas afectando (Negativa o positivamente) o
no su crecimiento.

Anacardium Excelsum(CARACOL). Es
una especie de rboles americanos de la zona
intertropical de la familia de las Anacardiaceae.
Es un rbol grande perennifolio de hasta 45 m
de altura, con un tronco recto y de color claro,
de hasta 3 m de dimetro.
INTRODUCCIN
Tradicionalmente se plantan rboles sin los microorganismos que
pueden ayudar a su desarrollo y mejor adaptacin al suelo.
Una alternativa es Incrementar la poblacin de microorganismos
asociados a la rizsfera, los cuales ayudan a la nutricin y
desarrollo vegetal.
Mediante la siembra de plantas inoculadas en vivero, de esta
forma la planta acta como medio para reintroducir estos
microorganismos al suelo.
METODO
1. Aislamiento e identificacin de rizobacterias nativas en la
especie forestal Anacardium excelsum.

Se recolectaron muestras de suelo de reas desprovistas de vegetacin boscosa


y de suelos con crecimiento del Caracol, para comparar los microorganismos
presentes en estos dos suelos.
El muestreo se realiz eligiendo un rbol en buen estado fitosanitario, alrededor
del cual se ubicaron cinco puntos de muestreo. En cada uno se tom una
muestra de suelo rizosfrico entre 10 30cm de profundidad, cada una con 50g,
para conformar una muestra integrada de 250g, que se depositaron en bolsas
plsticas estril sellopack, se refrigeraron y transportaron hacia el laboratorio
de microbiologa de la Universidad Popular del Cesar.
2. Preparacin del Medio de Cultivo

Para el procesamiento de las muestras se prepar un medio de


cultivo agar extracto de suelo el cual fue estandarizado y
utilizado para la obtencin y mantenimiento de microorganismos a
partir de todas las muestras de suelo.
3. Procesamiento de Muestras
A partir de las muestras de suelo se realizaron diluciones
seriadas de 10*4 10*6, y se inocul 0.1ml en cajas de petri
con agar extracto de suelo preparado previamente.
Posteriormente, se incubaron a 37C por 24 horas, para la
obtencin de las rizobacterias promotoras del crecimiento
vegetal (RPCV).
Se compararon las cepas obtenidas de suelo rizosfrico con
las cepas de suelo carente de rboles y se descartaron las que
presentaron similitud macroscpica. Seleccionando tres
morfotipos diferentes, Pseudomonas fluorecens, putida y
Bacillus licheniformis, las cepas fueron preservadas a -20C
para posteriores ensayos.
4. Pruebas de identificacin a los morfotipos seleccionados

Se realizaron pruebas bioqumicas de identificacin para los


microorganismos seleccionados.
Posteriormente se realiz una prueba de antagonismo por la tcnica
de enfrentamiento en agar nutritivo. Esta prueba se llev a cabo
modificando la metodologa de Acevedo, (Acevedo 1992) y de
Earnshaw y Boland, (Earnshaw y Boland 1997)
4. Pruebas de identificacin a los morfotipos seleccionados

Que consiste en colocar en los extremos de la caja de petri


con agar nutritivo, discos de agar con los microorganismos
aislados previamente realizando las combinaciones
respectivas de manera que se logr enfrentar el mismo
aislamiento y realizar enfrentamientos con aislamientos
diferentes, esto con el fin de comprobar si alguno de los
microorganismos seleccionados inhiba el crecimiento de
otros. Se utilizaron dos cajas de petri por enfrentamiento para
los morfotipos seleccionados.
5. Obtencin de los biopreparados bacterianos
Se realiz un medio de cultivo con extracto de suelo
autctono, ms extracto de levadura y glucosa, con el fin de
semejar las condiciones del ambiente natural de crecimiento
de las bacterias rizosfricas.
En este medio se sembraron las diferentes cepas
microbianas con el fin de obtener un inculo concentrado
por medio de fermentacin en Batch.
Para realizar el ensayo de promocin de crecimiento vegetal
se tomaron 500 ml del fermentado obtenido de cada
bacteria, se envasaron aspticamente en recipientes de
vidrio color mbar, hermticamente sellados y se
mantuvieron en condiciones de refrigeracin hasta el
momento de su aplicacin. (Modificado a partir de Glick et
al. 1999).
6. Ensayos de promocin de crecimiento vegetal: Efecto de los
biopreparados sobre la germinacin de Anacardium excelsum

Obtencin y preparacin de semillas: Las semillas de Anacardium


excelsum fueron recolectadas alrededor del suelo de los rboles y
entre la hojarasca, teniendo en cuenta que se encontraran en buen
estado, y presentaran caractersticas similares como el color tamao
y maduracin, inicialmente se lavaron con agua corriente por
espacio de una hora para as eliminar residuos presentes, luego un
lavado con hipoclorito de sodio al 3% por un minuto, finalmente se
lav con abundante agua 3 veces consecutivas.
6. Ensayos de promocin de crecimiento vegetal:Efecto de los
biopreparados sobre la germinacin de Anacardium excelsum

Preparacin del suelo: El suelo utilizado para sembrar las semillas


se filtr por un tamiz de 2 mm de dimetro entre cada poro con el
fin de obtener un suelo lo ms homogneo posible, y se someti a
un proceso de solarizado el cual consisti en exponerlo 48 horas a
la luz solar y de esta manera esterilizarlo para eliminar posibles
bacterias y hongos fitopatgenos que pudieran interferir en la
germinacin y desarrollo de las semillas.
6. Ensayos de promocin de crecimiento vegetal:Efecto de los
biopreparados sobre la germinacin de Anacardium excelsum

Montaje del ensayo de germinacin y estimulacin del


crecimiento vegetal: El ensayo experimental de germinacin de las
semillas estuvo constituido por cinco tratamientos, y el ensayo de
estimulacin del crecimiento por seis.
Para cada tratamiento se tom una bandeja y en cada una de ellas
se deposit una capa del suelo solarizado de 3cm de espesor
parcialmente hmedo, donde se sembraron 50 semillas de
Anacardium excelsum a dos centmetros de distancia cada una.
Luego se agregaron 50ml de cada biopreparado por tratamiento
(tt1, tt2, tt3, tt4, testigo). Veinte minutos despus se agreg otra
capa de suelo la cual cubri todas las semillas. Las bandejas ya
sembradas e inoculadas, se colocaron en un sitio con poca luz y
se regaron sin saturar el suelo, observndose las bandejas, con el
fin de evidenciar las semillas germinadas cada da por
tratamiento.
Ensayo de estimulacin del crecimiento
vegetal, realizando mediciones los das 27,
53 y 70 considerando las siguientes
variables: Longitud del tallo, numero de
hojas, Longitud de raz, nmero de races
secundarias, biomasa de follaje y biomasa
de raz.
Obtenido de: Mary Morocho Quezada(2009)
Los resultados para cada una de las
variables fueron sometidos a un anlisis de
varianza ANOVA. Posterior al anlisis de
varianza se realiz la prueba de
comparacin de promedios HSD Tukey
para ver la significancia de las diferencias
presentadas entre los diferentes
tratamientos.
RESULTADOS

Se logr estandarizar un medio de cultivo agar extracto de suelo el


cual cuenta solo con los nutrientes aportados por el suelo rizosfrico y
la raz, logrando as el crecimiento de las bacterias que resisten este
bajo aporte de nutrientes.
GERMINACIN
ESTIMULACIN DEL CRECIMIENTO:NMERO DE HOJAS
LONGITUD DE TALLOS , RACES
NMERO DE HOJAS , RACES SECUNDARIAS
BIOMASA RAZ Y FOLLAJE
BIBLIOGRAFIA
Glick B., Patten C., Holgun G. & Penrose M. 1999. Biochemical and Genetic
Mechanisms Used by Plant Growth Promoting Bacteria London: Imperial
College Press.
Acevedo R. 1992. Variabilidad Morfofisiopatolgica del Hongo Sclerotium
cepivorum Berk, agente causal de la Pudricin blanca del ajo. Trabajo de
ascenso, Universidad Nacional Experimental del Tchira (UNET), San
Cristbal, Estado Tchira, Venezuela. Galindo
https://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Efecto+de+microorganismos
+rizosf%C3%A9ricos+sobre+germinaci%C3%B3n+y+crecimiento+temprano+de+A
nacardium+excelsum&author=Barreto+D&author=Valero+N&author=Mu%C3%B1
oz+A&author=Peralta+A&publication_year=2007&journal=Zonas+%C3%81ridas&
volume=11&issue=1&pages=240-250
https://es.slideshare.net/videoconferencias/estadistica-ii-1108143