CROMATOGRAFA:

PRINCPIOS Y TEORA
Msg. Ronald Portales
 El alumno determina parmetros caractersticos
de una columna cromatogrfica

LOGRO DE SESIN
ACEITES ESENCIALES MEZCLA
ORGANICA
SEPARAR
COMPONENTES
DE UNA MEZCLA

CROMATOGRAFIA
 Las formas mas usadas de cromatografa son la
CG (cromatografa de gases) y la HPLC
(cromatografa de lquidos de alta eficiencia).

https://www.youtube.com/watch?v=WO0OsxaPYs8
 En la cromatografa de gases se separan
sustancias gaseosas con base en su adsorcin o
particin en una fase estacionaria a partir de
una fase gaseosa.

GC
 La cromatografa de lquidos comprende
tcnicas como la de exclusin de tamao
(separacin basada en el tamao molecular),
de intercambio inico (separacin basada en
cargas elctricas) y de cromatografa de
lquidos de alta eficiencia (HPLC, high-
performance liquid chromatography), basada
en la adsorcin o separacin de una fase
liquida.

LC
 Un soluto esta en equilibrio
entre una fase mvil y una
estacionaria.
Cuanto mas interacte con
la fase estacionaria, mas
lentamente se mover a
travs de una columna.

PRINCIPIOS DE LAS
SEPARACIONES
CROMATOGRFICAS
FUENTE: SKOOG(2007)
HPLC-COLUMNA GC-COLUMNA
CLASIFICACIN DE LOS MTODOS
CROMATOGRAFICOS EN
COLUMNA
 [X]s es la concentracin del componente X sobre o en la
fase estacionaria
[X]m es su concentracin en la fase mvil.
Esta constante de equilibrio esta gobernada por la temperatura,
la clase de compuesto y las fases estacionaria y mvil

Coeficiente de distribucion o coeficiente de particin en la

cromatografa de particin.
 Los procesos
cromatograficos se pueden
clasificar de acuerdo con el
proceso de equilibrio que se
maneje, el cual estar
gobernado por la fase
estacionaria. Algunas bases
para el equilibrio son:
1) Adsorcin
2) Particin
3) Intercambio inico
4) Penetracin en poros.
 La fase estacionaria es un slido sobre el que se
adsorben los componentes de la muestra. La
fase mvil puede ser un liquido (cromatografa
lquido-slido) o un gas (cromatografa gas-
slido); los componentes se distribuyen entre las
dos fases por una combinacin de procesos de
sorcion y desorcin.

CROMATOGRAFA DE
ADSORCIN
 La fase estacionaria en la cromatografa de
particin es un liquido soportado en un solido
inerte. Aqu la fase mvil tambin puede ser un
liquido (cromatografa de particin
lquidolquido) o un gas (cromatografa gas-
lquido, GLC).

CROMATOGRAFA DE
PARTICIN
 En la cromatografa de intercambio inico se usa
una resina de intercambio inico como fase
estacionaria. El mecanismo de separacin se
basa en equilibrios de intercambio inico.
En la cromatografa de exclusin de tamao se
separan molculas solvatadas de acuerdo con
su tamao gracias a su facilidad de penetrar en
una estructura como la de una criba (la fase
estacionaria).

CROMATOGRAFA DE
INTERCAMBIO INICO
Y DE EXCLUSIN DE TAMAO
SE USAN LOS SIGUIENTES TRMINOS PARA
DESCRIBIR LAS PROPIEDADES DE LA
CROMATOGRAFA DE GASES Y DE LQUIDOS
TEORA DE LA
EFICIENCIA DE LA
COLUMNA
CROMATOGRFICA
 Un plato teorico representa una sola etapa de equilibrio.
Cuantos mas platos tericos haya, el poder de resolucin ser
mayor y ser mayor el numero de etapas de equilibrio.
Se puede calcular el nmero de platos o eficiencia de un
cromatograma con la ecuacin:

N es el numero de platos de una columna con respecto a determinado

compuesto;
tR es el tiempo de retencin
wb es el ancho del mximo medido en la base en las mismas unidades que tR

NUMERO DE PLATOS
 Calcular el numero de
platos en la columna que
genera el mximo
cromatgrafo de la figura:

Medir con una regla tR y wb

Y determinamos el nmero de platos con la siguiente frmula:

tM es el tiempo que requiere la
fase mvil para atravesar la
columna, que corresponde con el
tiempo que tardara en aparecer
un soluto que no se retuviera.
Esta ecuacin corrige el tiempo de retencin y el numero de
platos para mximos que prolongan su cola, as como el
ensanchamiento debido a fuentes exteriores a la columna
 Una vez conocido el numero de platos se puede
obtener H dividiendo la longitud L de la columna
entre N (H =L/N)
El ancho del mximo, se relaciona con H, y es
mas angosto a medida que H decrece.
Se puede expresar H en centmetros/plato,
milmetros/ plato, etc.
La altura efectiva de plato, Hefec, es L/Nefec.
El termino H se suele determinar para el ultimo
compuesto en eluirse.
Para una columna de cromatografa de lquidos
de alta eficiencia (HPLC) bien diseada, H debe
ser dos a tres veces el dimetro de partcula. Son
tpicos los valores de 0.01 a 0.03 mm.
 El factor de retencin k,
para el mximo de una
muestra, esta definido
como:

tR es el tiempo de retencin (el tiempo que tarda en aparecer el

mximo de un anualito) y tM el tiempo que tardara en aparecer un
soluto no retenido

FACTOR DE RETENCIN EN
CROMATOGRAFA
 El numero efectivo de platos se relaciona con el factor de
retencin y el numero de platos efectivos como sigue:
 H: altura de plato

EFICIENCIA DE LA CROMATOGRAFA DE
GASES: ECUACIN DE VAN DEEMETER
 La difusin
molecular suele
ser despreciable
en cromatografa Transferencia de
de lquidos, pero masa entre fases: La
transferencia de
es importante en
masa domina en
cromatografa de cromatografa de
gases. lquidos.

: Es una constante emprica de la columna (factor de

empaquetamiento), con valores tpicos de 0.8 a 1.0 para
una columna bien empacada
dp: Es el dimetro promedio de partcula. Se reduce al
mnimo cuando se usan partculas pequeas y uniformes, y
empaques
: Factor de obstruccin, valores tpicos de 0.6-0.8
DM: Coeficiente de difusin
SEGN UNDERWOOD(1989) RECOMIENDA
LOS SIGUIENTES VALORES TPICOS PARA
COLUMNAS EMPACADAS. QUIMICA
ANALTICA PAG. 602
PROBLEMA
La resolucin de dos mximos cromatogrficos se
define como sigue:

Se debe buscar tener una

resolucin mnima de 1.0

tR1 y tR2 son los tiempos de retencin de los dos mximos (el mximo
1 se eluye primero) y wb es el ancho de la lnea base de los mximos.

RESOLUCIN EN
CROMATOGRAFA
FACTOR DE SEPARACIN
kprom es el promedio de los factores de
capacidad de los dos mximos
TAILING FACTOR TF = A+B / 2A

Tf = 1 Tf > 1 Tf < 1
 USEFUL EQUATIONS IN CHROMATOGRAPHY
Cs d substance
K : partition coefficient RF : RF value
Cm d solventfront (in planar chromatography)

I t ' Vs ts
k' R K
tM Vm tm
: capacity factor

tR ' tR tM
tR'= tR2'= time
tM tR1 tR2
tR1- tM tR2- tM

Separation factor t ' R 2 t ' k '2 k ' K 2 K

R1 1 1
 1 k '2
L 2
R
N

HETP H 4 1 k 'av
N x 1 k 'av
2

N 4 R
1 k '2
16 t R 5.54 t R
2 2
N
w 2
w0.5
2
t R VR
R
Linear flow rate (ux)= L / tM
wav wav

USEFUL EQUATIONS IN
CHROMATOGRAPHY
CHROMATOGRAMS OF COMPOUNDS A AND B WERE
OBTAINED AT THE SAME FLOW RATE WITH TWO
COLUMNS OF EQUAL LENGTH.
RELACIONES Y CANTIDADES
DERIVADAS IMPORTANTES
SEPARACION DE ACIDOS
BENZOICOS
 Skoog. Principios de Anlisis Instrumental.
Cengage Learning. Sexta edicin. 2007.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS