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PETROQUMICA BSICA I

Expositore
s:
CROMATOGRAFA DE GASES
CROMATOGRAFA DE GASES

Es la tcnica a elegir para la separacin de compuestos orgnicos e inorgnicos


trmicamente estables y voltiles

Un cromatgrafo de gases consiste en el acoplamiento de varios mdulos


bsicos ensamblados para:
Proporcionar un flujo constante de gas portador
Permitir la introduccin de vapores de la muestra en la corriente de gas que
fluye
Contener la longitud apropiada de fase estacionaria
Mantener la columna a la temperatura apropiada (o la secuencia del
programa de temperatura)
Detectar los componentes de la muestra a medida que eluyen de la columna
Proveer una seal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada
componente
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Gases
Sistema de inyeccin
El modo estndar es la inyeccin directa,
la muestra es inyectada con una jeringa a
travs de un septum de goma a un
alineador de vidrio donde es vaporizada y
transportada por el gas al interior de la
columna.
El bloque de inyeccin, se mantiene a
una temperatura tal que permita
convertir prcticamente de forma
instantnea la muestra lquida en un
tapn de vapor.
Existen jeringas especiales para muestras
gaseosas. Tambin se puede emplear un
lazo o bucle para incorporar las muestras
Sistema de inyeccin

El modo de separacin ms extendido


en la actualidad se basa en el empleo
de columnas capilares. Estas
columnas requieren muy pequeos
volmenes de muestra.
Esto se logra empleando un inyector
que incorpora un divisor de flujo
(split). Normalmente se introduce en
la columna un 1%
Cuando las sustancias a separar se
encuentran a muy bajas
concentraciones se realiza inyeccin
sin divisor (splitless)
Espacio de cabeza (Head space)
Se analiza la fase de vapor en equilibrio
termodinmico con la muestra en un
sistema cerrado.
Para ello se procura un equilibrio estable,
mediante el control de la temperatura del
vial que contiene la muestra.
Posteriormente, se arrastra la fase vapor
al interior del cromatgrafo.
T equilibrio
Gas portador A la columna
Purga y trampa (Purge and trap)

Es aplicable solo a muestras lquidas.


Consiste en la continua renovacin del gas en equilibrio
con la muestra, con lo que se consigue el
desplazamiento dinmico de los compuestos voltiles
de la muestra lquida a la fase gaseosa.
Los vapores se arrastran a una trampa donde quedan
retenidos y se van concentrando.
Finalizado el proceso se calienta la trampa y se
arrastran los vapores al interior del cromatgrafo.

1) Gas portador 2) Gas portador


trampa trampa A la columna

T baja T alta

T T
Columnas cromatogrficas

Columnas capilares Columnas Empacadas


Columnas cromatogrficas capilares
Se construyen con slice fundida.
Los dimetros interiores suelen ser de 200-250
mm.
La longitud suele ser superior a los 20 m.
Hay dos tipos:
Empacadas con partculas slidas ocupando el total
del dimetro de la columna (micro-empacadas)
Tubulares abiertas, con trayectoria para el flujo
abierta y sin restriccin por el centro de la columna
Columnas cromatogrficas empacadas
Se construyen con tubo de acero
inoxidable, niquel o vidrio.

Los dimetros interiores van de 1,6 a


9 mm.

La longitud suele ser inferior a los 3


m.

Se rellenan de un material
adsorbente adecuado a las
sustancias que se quiere separar.
Ejemplos de fases estacionarias en cromatografa
de gases

Separaciones por punto de ebullicin de compuestos en


un intervalo amplio de pesos moleculares:
Escualano
Polidimetilsiloxano
Para hidrocarburos insaturados y otros compuestos
polidifenildimetilsiloxano
policarboranometilcianoetilsilicn
Para compuestos nitrogenados
poliamida
policianoetilmetilsilicon
Para alcoholes, steres, cetonas y acetatos
polietilenglicol
pentaeritritol tetracianoetilado
Horno

Las columnas cromatogrficas se enrollan, se sujetan en


un soporte y se introducen en el interior de un horno

El horno debe poderse calentar y enfriar rpidamente

La temperatura se debe poder programar para poder


trabajar en rgimen de gradiente

Muchas aplicaciones y mtodos cromatogrficos requieren


comenzar a temperaturas por debajo de la ambiental
Horno

T1

T 2> T 1
Caractersticas ideales de un detector para
Sistemas de deteccin
Cromatografa de Gases:
Sensibilidad alta y estable; tpicamente 10-8 g soluto/s
Bajo nivel de ruido
Respuesta lineal en un amplio rango dinmico
Tiempo de respuesta corto
Buena respuesta para toda clase de compuestos
orgnicos
Insensibilidad a las variaciones del flujo y la
temperatura
Estabilidad y robustez
Simplicidad en su operacin
Identificacin de compuestos positiva
Tcnica no destructiva
Pequeo volumen en prevencin del mezclado de
componentes
Sistemas de deteccin

Detector de ionizacin de llama (FID) Este detector aade hidrgeno al


eluyente de la columna.
La mezcla pasa a travs del
conducto de un mechero, donde
se
mezcla con aire externo y luego
arde.
Cuando entra en la llama material
ionizable del eluyente de la
columna
Se quema y la corriente aumenta
notablemente.
Este detector es ideal para
compuestos
oxidables.
No responde a los compuestos de
carbono totalmente oxidados,
como
Sistemas de deteccin
Utiliza un filamento caliente
Detector de conductividad trmica (TCD) colocado en el flujo de gas
emergente.

La cantidad de calor por conduccin


que pierde el filamento hacia las
paredes del detector depende de la
conductividad trmica de la fase
gaseosa.

Es til para determinar la presencia


incluso de pequeas cantidades de
materiales orgnicos que producen
una reduccin relativamente grande
Sistemas de deteccin
Detector de captura de electrones (ECD) El eluyente pasa entre dos electrodos.
Uno de los electrodos tiene en su
superficie un radioistopo que emite
electrones de alta energa conforme
decae.
Los electrones bombardean el gas
portador (N2) formndose un plasma que
contiene iones positivos, radicales y
electrones trmicos.
Se aplica una diferencia de potencial de
modo que se recolectan los electrones
generados.
Los compuestos que absorben electrones
reaccionan con los electrnes trmicos
Sistemas de deteccin
Los eluyentes son ionizados y
fragmentados.
Detector de espectroscopia de masas (MS)
Los iones resultantes se dirigen a
travs de un cuadrupolo y se ordenan
en funcin de su masa.
Ese detector permite obtener el
espectro de masas del compuesto
que ha eluido.
Podemos por tanto conocer, adems
del tiempo de retencin el espectro
de masas del compuesto y
contrastarlo con bibliotecas de
espectros.
Se trata por tanto de un detector
universal para la mayora de los
CROMATOGRAFA DE LQUIDOS
HPLC
QU ES CROMATOGRAFA LQUIDA DE
ALTA EFICIENCIA?
La cromatografa de lquidos de alta resolucin, es un
modo de cromatografa en la cual el proceso de
separacin y transferencia de masa es entre la fase
estacionaria y la fase mvil y una temperatura dada.
La HPLC, representa una de las herramientas ms empleadas en el
laboratorio analtico moderno.
La cromatografa es un mtodo, usado primariamente para la
separacin de los componentes de una muestra, en la cual los
componentes se distribuyen en dos fases.

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Qu es Cromatografa Lquida de Alta
Eficiencia?
HPLC utiliza una fase mvil lquida para separar los
componentes de la mezcla. El solvente trabaja a una
presin de 6,000 psig
Los componentes o analitos deben ser disueltos en un
solvente y se pasan por la columna cromatogrfica a
altas presiones.
La resolucin depende de la interaccin entre el soluto ,
los componentes y la fase estacionaria.

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DIFERENCIAS

HPLC y GC: Tipo de detectores y la influencia de la fase mvil.


GC: se utiliza para separar mezclas que contienen compuestos
orgnicos voltiles.
En GC es muy simple encontrar detectores que diferencien la muestra
de la fase mvil.
En HPLC es ms difcil ya que la fase mvil no slo no es inerte sino
que su masa es sensiblemente superior.

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CLASIFICACIN DE LA CROMATOGRAFA DE LQUIDOS

Cromatografa Lquido-Slido.(adsorcin)
Cromatografa Lquido-Lquido.(particin)
Cromatografa de Fase (normal y reversa)
Cromatografa de Intercambio inico.
Cromatografa de Exclusin por Tamao
(cromatografa en gel)

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Clasificacin de Equipos

Integrados: Cada una de sus partes estn reunidas en un gabinete y su


intercambio o conexin con otros componentes es difcil.

Modulares: Los mdulos son instrumentos individuales que permiten


no solo armar el equipo segn las necesidades, sino aumentar su
complejidad segn esa necesidad vare.

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COMPONENTES PRINCIPALES

Un reservorio de solvente que alimenta al sistema con la
Solvente
fase mvil.
Bomba de alta presin Un sistema para forzar el pasaje de la muestra por la

columna: Bomba.
Inyector
Un sistema que permite la introduccin de la muestra:
Columna Inyector.

Un sistema de monitoreo de la solucin que emerge de
Detector la columna: Detector.
Graficador Un sistema de registro de los datos proveniente del

detector.

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Diagrama Bsico de un sistema de
HPLC

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Eleccin del Solvente
Caractersticas:

Disponible comercialmente
Precio
Pureza y Estabilidad. En la actualidad contamos con productos de calidad de
pureza cromatogrfica. Bajo contenido de impurezas.
Disolver la muestra
Miscible con otros solventes para formar mezclas tiles
No degradar o disolver la fase estacionaria
Tener baja viscosidad para reducir las cadas de presin
Ser compatible con el detector utilizado. Transparencia ptica (cuando se usan
detectores UV)
Se prefieren solventes de punto de ebullicin intermedio.

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Tipos de solvente

MW BP I.R. UV Viscosidad
Name
[Debye
[C] [nm] [cP]
]
Acetonitrile 41 82 1.341 195 .358 3.37
Dioxane 88 101 1.421 215 1.26 0.45
Ethanol 46 78 1.359 205 1.19 1.68
Methanol 32 65 1.326 205 .584 1.66
Isopropanol 60 82 1.375 205 2.39 1.68
Tetrahydrofuran 72 66 1.404 215 2.20 1.70
Water 18 100 1.333 185 1.00 1.84

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Filtracin y Desgasificacin de solventes
Las partculas pueden ocasionar costosos daos a la bomba HPLC, al
guarda columnas, y en general causar desgaste del sistema de HPLC.
Los fabricantes de los instrumentos tienen en cuenta este problema y
recomiendan que se filtre ( 0.45 o 0.22 micras) y desgasifique los
solventes HPLC antes de usarlos.
El Oxgeno Disuelto puede producir mayor interferencia en los
detectores de fluorescencia y electroqumicos.
El Nitrgeno Disuelto es el otro componente de la atmsfera que
puede producir burbujas en la columna de HPLC y cuando el solvente
entra al detector produce picos falsos y desviaciones de la lnea base.
El Dixido de Carbono disuelto algunas veces puede ser la causa de
los cambios de pH en el sistema de solvente

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MTODOS DE FILTRACIN DE SOLVENTES EN HPLC
Hay tres(3) mtodos comunes que se utilizan hoy para la filtracin previa de
los Solventes en HPLC :
Filtro a la Entrada del Solvente
Filtracin al Vaco
Filtracin en Lnea

MTODOS DE DESGASIFICACIN DE SOLVENTES EN HPLC


Existen cuatro mtodos comunes usados para desgasificar solventes
en HPLC previos a su uso:
Zonificacin
Burbujear Helio
Desgasificacin Electrnica en la Lnea del Flujo
Desgasificacin al Vaco en Lnea 34
Preparacin de fase mvil

Ajuste de pH, parmetro critico en la retencin de solutos ionizables


( medir antes de dosificar modificador orgnico)
El pH de la solucin aumenta con la incorporacin de un modificador
orgnico.
A valores pH mayores de 7.5 disolucin de slice ( sangrado)
A pH menor a 2 se hidroliza la unin entre la slice y la fase enlazada.

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Bombas

Requisitos o aspectos ms importantes que debe reunir una


bomba o sistema de bombeo:
Debe producir presiones estables hasta 6000 psi.
Mantener el flujo libre de pulsaciones
Generar intervalos de caudales de flujo (0,1 a 10 ml/min).
Control y reproducibilidad del flujo de solvente
Componentes de la bomba resistentes a la corrosin

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Bombas

Las bombas que se usan en HPLC se pueden clasificar


segn su funcionamiento y diseo en:
Mecnicas
Recprocantes
De desplazamiento contnuo
Neumticas

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Bombas

Principio de la bomba reciprocante

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Sistemas de Inyeccin de muestra
Estos sistemas han variados durante la historia del sistema
de HPLC, en un principio de utilizaba la inyeccin de la
muestra con jeringas de alta presin cuales ya estn de
desuso. Hoy se utiliza el sistema de Vlvulas inyectoras
Generalmente se usa una vlvula muestreadora con jeringa.

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Columna

Actualmente todas las columnas son de


acero inoxidable 316 con dimetro interno
de 2.6 a 3 mm o 4.6 a 5 mm , casi todas con
un dimetro externo de de pulgada

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Fas Principales e estacionaria

parmetros de la fase estacionaria


Tamao de partcula: 3 a 10 m
Distribucin de partcula : con una desviacin mxima
del 10 %
Tamao de poro : 70 a 300 ;
rea superficial : 50 a 250 m2/g
Densidad de la fase (numero de sitios activos por unidad
de rea): 1 a 5 por 1 nm2

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La tabla que se muestra presenta los parmetros principales de algunos
adsorbentes comerciales

rea Distribucinde densidad


Vporo Dporo
Nombre Sup. partcula delafase
ml/g m2/g % M/m2
IB-SilPhen. 0.75 125 165 5.5 2.74
HypersilC4(3) 0.6 300 50 2.0 4.80
SupelcosilC8(3) 0.6 100 170 8.5 -
SpherisorbC8 0.5 80 220 6.0 2.51
NovapakC18 0.3 60 120 7.0 3.0
IB-SilC18 0.75 125 165 11.0 3.27
SpherisorbC18 0.5 80 220 12.0 2.72
ProdigyC18 1.17 150 310 18.7 3.30
InertsilC18 1.1 150 320 18.5 3.23
HypersilC8 0.7 120 170 7.0 3.85
HypersilC18(3) 0.7 120 170 10.0 2.84
SelectosilC18 0.9 300 110 7.0 2.93
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Detectores

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Deteccin

La eficiencia de un detector cromatogrfico depende de la relacin entre la


cantidad fsica medida y la composicin del efluente, as como tambin de
las caractersticas de las seal de transferida.

Los tipos de detectores en HPLC se clasifican en:


Detectores basados en una propiedad de la fase mvil . Ejemplo: Detector
de Indice de Refraccin
Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar.
Ejemplo: Detector de Fluorescencia, Detector Ultravioleta

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Deteccin

Detector UV. Hay bsicamente tres tipos:

Detector de Longitud de Onda Fija


Detector de Longitud de Onda Variable
Detector de Arreglo de Diodos

45
Deteccin

Detector de ndice de Refraccin. Existen muchos diseos


de estos detectores, pero solamente existen ahora dos
tipos:

Tipo Deflexin
Tipo Fresnel

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Deteccin

Detector de Fluorescencia.
Este detector solamente puede detectar
compuestos que tengan fluorescencia nativa o
inducida por derivatizacin .

Detector de Fluorescencia Inducida por Laser


Segn la Fuente de Excitacin
Segn el sistema ptico

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