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Curso Microbiologa IPA 2011 - 10

MUCHAS VECES DEBEMOS CONTROLAR


EL CRECIMIENTO MICROBIANO

Cocina de
En el quirfano
Restaurante

Produccin Industrial Cocinando en casa

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ASEPSIA y ANTISEPSIA
La ASEPSIA es un mtodo preventivo.

Procura la ausencia de grmenes en un rea determinada.


Se rige por una serie de principios que debe cumplir todo el
personal que trabaje en, o en las cercanas del campo estril.
ASEPSIA PROTECTORA se aplica a todo el campo quirrgico

PRINCIPIOS DE LA ASEPSIA PROTECTORA QUIRURGICA.

NO CAUSAR DAO (no introducir contaminacin adicional)


ELIMINAR CONTAMINANTES Y M.O PATGENOS
DESTRUIR LOS M.O DAINOS.
PROTEGER Y SEPARAR si no es posible la eliminacin.
DESHACERSE DE LOS MATERIALES CONTAMINADOS

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ASEPSIA Y ANTISEPSIA
DESINFECCIN es la eliminacin de los grmenes presentes
(menos las esporas) sobre objetos inanimados.

ANTISEPSIA es similar, pero


se refiere a grmenes
presentes en la piel, las mucosas
y otros tejidos vivos.
Frotar Frotar el Frotar entre
las palmas el dorso los dedos

Frotar Frotar las

las muecas uas

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DESINFECCION

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ESTERILIZACION

Por calor

Por radiacin

Por filtracin

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ESTERILIZACION POR CALOR

Recordar que cada M.O tiene una temperatura MAXIMA de


crecimiento.

Las molculas fundamentales se DESNATURALIZAN.

La muerte por desnaturalizacin es exponencial, y es mas


rpida cuanto mas alta la temperatura.

Se llama TIEMPO DE REDUCCIN DECIMAL , para un


microorganismo y una temperatura dada, al tiempo en que se
elimina el 90% de la poblacin inicial.

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Curvas de sobrevivencia de un m.o con
tres temperaturas diferentes

Cuanto
demora en
morir el 90%
de la
poblacin a
50 C?

Y a 70 C?

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El tiempo de reduccin decimal (D) depende de la
temperatura pero no del nmero inicial de m. organismos.

(D) es un parmetro a
tener en cuenta para
decidir los tiempos de
esterilizacin, en
autoclave.

El tipo de calor (HUMEDO


o SECO) tambin es
importante. El calor
hmedo tiene mayor
poder de penetracin, y
acta mas rpido.

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CURVAS DE D PARA DIFERENTES
MICROORGANISMO

Organismo (a) a
110 grados
alcanza el 90% de
muertes en 0,1
minuto, o sea 6
segundos.

En cambio (b)
demora 10
minutos a esa
temperatura para
que muera el 90%
de la poblacin.

CLASIFIQUE los
m. organismos
(a) y (b)

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EL AUTOCLAVE
TAPA
HERMETICA
Es un recipiente que
permite mantener una
presin alta en su
interior, y as alcanzar
temperaturas del agua
de 121 grados. VAPOR

los hay de varias PAREDES


formas y capacidades,
segn su uso. CANASTILLA

Este es un modelo
vertical, de mesa para
laboratorios. AGUA RESITENCIA

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Esterilizacin en autoclave
El autoclave es una cmara cerrada que permite la entrada de
vapor de agua a presin (o produce vapor de agua en su
interior).
Generalmente se trabaja a 1,1 Kg / cm2 de presin, lo que
permite alcanzar unos 121 grados C
A esa temperatura y presin el tiempo de esterilizacin suele
ser de 10 a 15 minutos.
Las endosporas a esa temperatura tienen un tiempo D = 4
5 minutos. Para las clulas vegetativas , a 65 C, el tiempo D

es de 0,1 a 0,5 minutos. LOS PROCESOS DE ESTERILIZACIN


SE DISEAN PARA ENDOSPORAS

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Otros factores que inciden
La muerte por calor es mas rpida en
pH cidos. Por eso es mas fcil
esterilizar tomates, y frutas ; que maz
o frijoles que son mas bien neutros.

Concentraciones altas de azcar,


protenas o grasas reducen el efecto
del calor.

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N
A CIO
ILIZ
ES TER
ES
PASTEURIZACION
NO

Es un mtodo de tratamiento
de alimentos basado en el
calor por tiempos cortos.

Destruye todos los


patgenos, (tuberculosis,
brucelosis, Salmonella,
Echerichia, etc.) menos los
esporulados.
Pasteurizacin alta. Pasteurizacin baja.
Protege la salud (asegura la
inocuidad) 71 C por 15 segs. 63 C por 30 min.
Enfriado rpido Menos satisf.
Altera caracteres
Alarga la vida til de los organolpticos
alimentos.

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ESTERILIZACIONPOR RADIACION
RADIACIONES ELECTROMAGNTICAS.

MICROONDAS (efecto trmico)


RAYOS UV (ruptura del ADN)

RAYOS X

RADIACIONES
RADIACION GAMMA g IONIZANTES
ELECTRONES

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Esterilizacin por radiacin

Las radiaciones ionizantes producen iones y molculas


reactivas, (electrones, protones, OH) de alta energa, que
actan sobre los biopolmeros como el ADN y las ENZIMAS.

LA UNIDAD DE RADIACION ES EL roentgen


LA DOSIS ABSORBIDA se mide en rad

1 rad = 100 ergios/gramo


1 Gray = 100 rad

En noviembre de 1980, diversos Comits de Expertos de la IAEA, FAO,


OMS concluyen que la irradiacin de cualquier tipo de alimento hasta
una dosis de 10 kGray no presenta riesgo para la salud humana y que
tal tratamiento no plantea especiales problemas nutricionales y/o
microbiolgicos.

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ALIMENTOS IRRADIADOS CON RAYOS g
Los estudios toxicolgicos de un gran nmero de alimentos distintos no han
mostrado la existencia de efectos adversos como resultado de la irradiacin.

Las radiaciones gamma evitan el crecimiento del moho en naranjas, tomates


y pan. Destruye a los parsitos de la triquina que hacen muy peligroso el
consumo de carne de cerdo.

La exposicin de alimentos a los rayos gamma aumenta la vida de


refrigeracin de salchichones, mariscos, fresas y de ensaladas
preparadas.

Los alimentos tratados con esas radiaciones pueden comerse sin riesgo
No hay prdidas del contenido vitamnico.

Algunas legumbres, frutas y carnes sometidas a tratamiento con radiacin


gamma intensa se conservan frescas y comestibles durante meses y hasta
aos, sin refrigeracin.

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SENSIBILIDAD A LA RADIACION DE LOS M. ORGANISMOS
Especie Tipo de M.O D10 en Gy.
Clostridium botulinum Bact. G+ anaerobia esporulada 3300
Clostridium tetani Bact. G+ anaerobia esporulada 2400
Bacillus subtilis Bact. G+ anaerobia esporulada 600
Salmonella typhimurium Bacteria G - 200
Lactobacillus brevis Bacteria G + 1200
Sacharomyces cerevisae Levadura 500
Deinociccus Bacteria G radiacin resistente
Aspergillus niger Hongo 500
Virus 4500 a 13000
Inactivar enzimas 20000 a
50000

D10 = cantidad de radiacin necesaria para reducir la poblacin


inicial a la dcima parte. Gy es un Gray = 100 rad
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Desinfeccin por radiacin UV

La radiacin Ultra Violeta (220 a 300 nm de l tienen suficiente


energa para romper las molculas de ADN.

La radiacin UV no penetra las superficies solidas opacas.

Se utilizan los rayos UV para desinfeccin de superficies,


vidrio, aire y agua.

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Desinfeccin de agua por UV

No hay adicin de qumicos al agua


No hay formacin indeseada de sustancias en el
agua
No modifica el sabor ni el olor del agua
desinfectada
No hay manipulacin ni almacenamiento de
qumicos
Sistema de manejo amigable, se requiere poco
mantenimiento
Tecnologa segura y fiable
Bajo precio y costos de operacin
Plantas de desinfeccin UV para un promedio de
flujo de 1- 400 m3/h para diversas aplicaciones.

Aplicacin tpica de desinfeccin UV

desinfeccin de agua de consumo humano


desinfeccin de agua industrial y produccin de
sta en la industria de bebidas y comidas
desinfeccin de aguas lluvias
desinfeccin de agua pura para laboratorios e
industria de semi-conductores
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desinfeccin 2011 Ing.
de agua de irrigacin en Agr. Alfredo Rodrguez
horticultura 21
USO DE FILTROS
Para lquidos termo inestables y para gases.

Poros tan pequeos que no pasan los microorganismos, pero


si las molculas de lquidos.

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TIPOS DE FILTROS

FILTROS DE PROFUNDIDAD.
Lminas de papel, asbesto o fibra de vidrio,
solapadas. Retienen en el espesor. Se usan
como pre filtros.

FILTROS DE MEMBRANA
Polmeros de alta resistencia, nitratos o
acetatos de celulosa. Tienen numerosos poros
diminutos, Retienen en superficie

FILTROS DE NUCLEACIN. (Nuclepore)


Pelculas muy finas de policarbonatos, tratadas
por radiacin nuclear que las debilita y
qumicos que las fisuran.

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CULTIVO DE MICROORGANISMOS
MEDIOS DE CULTIVO: Soluciones nutritivas que se utilizan
para el cultivo de microorganismos.

LOS MEDIOS DE CULTIVOS pueden ser:

Qumicamente DEFINIDOS.
Se preparan aadiendo cantidades precisas de
compuestos orgnicos e inorgnicos en agua destilada.

COMPLEJOS.
No se sabe exactamente la composicin. Se preparan con
hidrolizados de casena, carne, soja, levadura, etc.)

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MEDIOS DEFINIDOS
Y MEDIOS COMPLEJOS

MEDIO DEFINIDO para E coli MEDIO COMPLEJO para E


coli y Leuconostoc
K2HPO4 7g
KH2PO4 2g Glucosa 15 g
(NH$)2SO4 1g Ext Levadura 5 g
MgSO4 o,1 g Peptona 5 g
CaCl2 0,02 KH2PO4 2 g
Glucosa 4 a 10 Agua destilada 1000 ml
Trazas 2 a 10 pg
Agua destilada 1000 ml
pH 7

Comentar capacidad de sntesis de E.,coli y


Leuconostoc
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MEDIOS SOLIDOS

Agregado de agentes solidificantes.


Ejemplo: Agar al 1,5%

Los medios slidos inmovilizan las clulas, y permiten el


crecimiento en colonias relativamente aisladas entre si y
observables.

El AGAR se agrega al medio, y al esterilizarlo y posteriormente


enfriarse, el agar solidifica.

Antes de eso, se vierte en placas de Petri, o en tubos

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PREPARACION DE MEDIOS SOLIDOS

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SIEMBRA Tcnica asptica

1. Quemar el asa
2. Abrir tubo con microorganismos
3. Flambear la boca
4. Tomar la muestra con el asa
5. Flambear nuevamente la boca del
tubo
6. Cerrar el tubo
7. La muestra en el asa se lleva a un
medio estril.
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SIEMBRA

8.- La muestra
obtenida en el asa
se siembra en una
placa con medio
solido estril.

Hay diversas
maneras de
realizar la siembra.

Siempre en
ambiente asptico
prximo al bunsen.

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siembras

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OBSERVACION

PREPARACION
DE UN FROTIS

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Tincin de Gram
http://youtu.be/gTKTdBTghdQ

1. Agregar cristal violeta o violeta de genciana y esperar 1 min. Todas las clulas
Gram positivas y Gram negativas se tien de color azul-purpura.

2. Enjuagar con agua.

3. Agregar lugol y esperar 1 minuto.

4. Enjuagar con agua.

5. Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte


critica de la coloracin)

6. Enjuagar con agua.

7. Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1-2 min


Este tinte dejar de color rosado-
rojizo las bacterias Gram negativas.

8. Enjuagar con agua.

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