BENEMRITA

UNIVERSIDAD
AUTNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA
SEMINARIO IV CROMATOGRAFA
OBJETIVO.

Aplicar la tcnica cromatografa en capa fina CCF para el

anlisis de productos qumicos. Utilizar el equilibrio de
participacin y adsorcin en tcnicas cromatogrficas para
separar dos compuestos diferentes.
PRINCIPIOS FSICOS.

-Es esencialmente un mtodo fsico de separacin.

-Se separa en dos componentes , una fase inmvil y otra mvil.
-Se da por procesos de adsorcin-desorcin.
-La separacin ocurre por las diferencias en las constantes de distribucin de los
componentes de la mezcla entre la fase estacionaria y mvil.
FASE MVIL Y FASE ESTACIONARIA

En la fase esttica o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte fijo, por ejemplo
papel. En esta fase tenemos ya la mezcla sobre un soporte, en nuestro ejemplo un papel.

En la fase mvil inicia un proceso de separacin de los componentes de la mezcla al

moverse a distintas velocidades por el lquido.
COEFICIENTE DE PARTICIN

Cuando un soluto entra al sistema cromatogrfico inmediatamente se reparte o

distribuye entre la fase mvil y la estacionaria. Si la fase mvil se para en cualquier
momento el soluto establece un equilibrio de distribucin entre las dos fases.
 - . La concentracin en cada fase est dada por el coeficiente termodinmico de particin
(o reparto): K = Cs / Cm donde Cs y Cm son las concentraciones de soluto en la fase
estacionaria y mvil, respectivamente.

Cuando K = 1, el soluto se encuentra igualmente distribuido entre las dos fases. El

coeficiente de reparto determina la velocidad promedio de cada zona de soluto, ms
especficamente, del centro de la zona de soluto conforme la fase mvil avanza a lo largo
de la columna
CROMATOGRAFA DE PARTICIN

En la fase estacionara es un lquido soportado en un slido inerte.

La fase mvil puede ser un lquido o un gas.

La cromatografa en papel es un ejemplo en la cual la fase estacionaria es una capa de

agua absorbida en una hoja de papel.
CROMATOGRAFA DE ABSORCIN

La fase estacionara es un slido, la fase mvil puede ser un lquido o un gas.

Los componentes se distribuyen entre dos fases a travs de la combinacin de los
procesos de adsorcin y desorcin.

La cromatografa de capa fina (TLC) es un ejemplo especial de cromatografa por

adsorcin en la cual la fase estacionaria es un plano, en la forma de un soporte slido en
un plato inerte.
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

Depende de la Las molcula de sluto

Hay un eq de pH y FI ,
adsorcin reversible se desplazan de carga
lo que permitir la
de molculas cargadas de los contra iones y
unin de los solutos.
negativamente. se unen al gel.

Se puede dar el
Se aumenta la FI del
intercambio en una
buffer o cambiando su
columna o adsorcin
pH
de cama extendida.
 CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN

Es un tipo de cromatografa de
lquidos en la que la fase
estacionaria es un material
poroso que permite la
elucin diferencial de los
solutos en funcin de sus
tamaos moleculares.
CROMATOGRAFA DE ADSORCIN

-La fase normal presenta puntos activos de polaridad, utiliza una fase estacionaria polar y
una movipolar.
Se utiliza cuando el compuesto es bastante polar.
. El compuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria.
La fuerza de absorcin aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la
interaccin entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (en comparacin a la
fase mvil) aumenta el tiempo de retencin
FASE REVERSA

Permite separar molculas a base de su polaridad.

La fase estacionaria es de partculas de silica est
Lo que la convierte en una
modificada qumicamente por hidrocarburos saturados o
matrz polar
insaturados

-Agua
Purificacin de protenas y
Mezclas de solventes polares -Acetonitrilo
carbohidratos
-Acetato de etilo
 PRINCIPALES FASES ESTACIONARIAS.
CARACTERISTICAS
Gel de slice
Dbilmente cido, su pH oscila entre 4-5.
Posee alta absorcin.
Generalmente lleva incorporado un agente
aglomerante, yeso (sulfato de clcico
semihidratado), para proporcionar firmeza al
adsorbente.
Se utiliza para separar sustancias ms polares
(alcoholes, aminas, cidos carboxlicos).
Gracias a los diferentes tiempos en la duracin
de la absorcin de diferentes componentes en
composiciones de sustancias, puede alcanzar
los objetivos de separacin, purificacin y
refinado de todos ellos.
Almina
Es un adsorbente ligeramente bsico debido a que
en el proceso de extraccin de la almina a partir
de la bauxita quedan algunas molculas de
hidrxido de aluminio adheridas a la almina,
dndole a sta un carcter bsico.
La almina puede ser tratada qumicamente para
conseguir alminas cidas, bsicas y neutras.
Es un adsorbente de carcter polar, de tal forma
que retendr con mayor avidez a los componentes
polares, por ello se utiliza para separar
compuestos relativamente apolares (hidrocarburos,
haluros de alquilo, teres, aldehdos y cetonas).
DISOLVENTES MAS USADOS DE ACUERDO A LA
POLARIDAD.
El orden de elucin de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase
mvil o eluyente. Este puede ser un disolvente nico o dos miscibles de distinta
polaridad. En el siguiente recuadro se recoge por orden creciente de fuerza eluyente los
disolventes ms comnmente empleados.

Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato de etilo < acetona
< 2propanol < metanol < agua.

 En general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos puntos de ebullicin y

viscosidad, lo que les permite moverse con rapidez. Raramente se emplea un disolvente
ms polar que el metanol.
Usualmente se emplea una mezcla de dos disolventes en proporcin variable; la polaridad
de la mezcla ser el valor promediado en funcin de la cantidad de cada disolvente
empleada
 Mtodo fcil y rpido
CROMATOGRAFA para evaluar la pureza de
EN CAPA FINA los compuestos
orgnicos.

La fase inmvil es una capa El adsorbente se adhiere a la

delgada de adsorbente placa. Algunos contienen un
extendida sobre una capa de indicador de fluorescencia para
vidrio, aluminio o polister facilitar la identificacin de
muestras.

Si no se usa indicador y los

componentes no son
coloridos, se requerirn
otras tcnicas de revelado
 El disolvente ascender por
capilaridad en la placa y
arrastrar los componentes en
forma diferenciada a lo largo de
sta, produciendo manchas en
los componentes.
El grado de extraccin de las
sustancias depender tanto
de su propia polaridad como
de la polaridad del disolvente
utilizado.
a) Preparacin de la cmara cromatogrfica.

Antes de usar, verificar que la cmara est

limpia y en buen estado.

Contendr el diluyente con el que corrern las

muestras que se pongan en la placa.

Es importante que se trabaje en temperatura

ambiente, ya que el diluyente puede hacer
alteraciones en los resultados.
b) Eleccin de las fases estacionaria y mvil.

FASE ESTACIONARIA Son adsorbentes

gel de slice (SiO2) almina (Al2O3)

c
Tambin contiene grupos OH o
Las partculas contienen grupos
tomos de O.
OH en su superficie que llegan a
formar puentes de hidrgeno con
molculas polares.
Se prefiere la almina para
separar compuestos
El agua adsorbida evita que otras dbilmente polares, pero el gel
molculas polares lleguen a la de slice es preferido para
superficie, por lo que el gel se compuestos polares, como
activa por medio de calentamiento aminocidos y azcares.
para eliminar el agua adsorbida.
+ H2O
+ H2O
 El poder eluyente de los Siempre que sea posible debe
disolventes aumenta al de usarse un solo disolvente, o
incrementar su polaridad. dos o tres cuando mucho

Porque los disolventes mezclados

Hexano tienen a cromatografiarse al subir
por la capa delgada y causan un
FASE MVIL cambio continuo en la composicin
Acetona del disolvente en funcin de la
distancia en la placa

Alcohol
Los disolventes deben de ser
de gran pureza, de lo
Agua
contrario pueden reproducir
errores en los resultados.
c) Aplicacin de la muestra.
c) Desarrollo de la cromatografa.
e) Deteccin de muestras (tipos de reveladores).

Si los solutos fluorescen

(compuestos aromticos) se
pueden detectar iluminando la
placa con una lmpara de luz UV.
Los aminocidos y aminas se detectan rociando ninhidrina en
la placa, lo que revelar la muestras de un color azul/prpura.
Hay muestras incoloras o no fluorescentes
que se pueden observar exponiendo la placa
en vapores de yodo.

Cmara fumgena
f) Determinacin del Rf

Significa relacin de frentes. Es una

relacin de distancias y se expresa como el
cociente entre la distancia recorrida por la
sustancia y la distancia recorrida por el
disolvente hasta el frente del eluyente

Distancia recorrida de la muestra

Rf Distancia recorrida del disolvente
 CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA PREPARATIVA

Se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo
de la placa. El eluyente ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta
produciendo manchas de los componentes.

El grado de elucin de las sustancias depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente
utilizado.

El adsorbente se coloca en forma de

una capa delgada adherida sobre un
soporte rgido, que pueden ser placas
de vidrio, aluminio o polister.
 CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

La separacin se consigue haciendo fluir la mezcla a travs de una columna de adsorbente. Los
compuestos emergen de la columna a tiempos diferentes, y pueden ser recogidos en fracciones
separadas.
Aplicacin

Las tcnicas de aplicacin de la cromatografa en capa fina se aplican para

desarrollar las condiciones para la separacin en cromatografa en lquidos de
alta resolucin.

La cromatografa en capa fina tiene amplio uso en los laboratorios clnicos y

es la estructura de apoyo de muchos estudios bioqumicos y biolgicos.
Tambin tiene una gran aplicacin en los laboratorios industriales.
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
FASE ESTACIONARIA : ADSORBENTE
Constituido por un solido porosoMas utilizado para separacin y purificacin:
Finamente granulado Compuestos orgnicos, solidos o lquidos.
Centros activos polares en superficie
donde adsorbe las molculasElde los
adsorbente mas utilizado
compuestos que se van a cromatografiar.
Debe ser inerte

FASE MOVIL: ELUYENTE

Disolvente en el que los compuestos son parcialmente
solubles.
Al aumentar la de silicedel disolventeAlmina
polaridad
Gel aumenta la
velocidad de elucin de los compuestos de la mezcla
Se puede utilizar uno o una mezcla de disolventes
 Los compuestos van saliendo
de acuerdo a su polaridad

Primero salen los menos

polares(menos retenidos por el
El tamao de partcula de adsorbente es importante adsorbente)
para la separacin y su eleccin depende de la elucin
de la cromatografa: Y por ultimo los mas
Elucin a media presin, se emplea un tamao de polares(mayor retencin en la
partcula mas pequea( separacion mas eficaz) fase estacionaria)
Elucin por gravedad, una partcula pequea
impediria el flujo del disolvente.
BIBLIOGRAFA

http://www.areaciencias.com/quimica/cromatografia.html
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cromatografia.pdf

http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/principios_d
e_cromatografia.pdf

http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/estructura/EPrpc.html
 Bibliografas:
- http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/TLC-ascen.opt.svg

- http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/6.-CROMATOGRAFIA_26249.pdf

- http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/fina.htm

- https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099/5544/Article02.pdf
- https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf
- https://es.slideshare.net/yerga/cromatografia-de-capa-fina
- http://www.chinasilicagel.es/1-basic-silica-gel.html

- Gray D. Christian; Qumica analtica 6ta ed. en espaol (2009) Mxico, DF

Editorial: MC Graw Hill
- Shriner L. Ralph, Hermann K. F. Cristine, Curtin Y. David; Identificacin sistemtica
de los compuestos orgnicos 2da ed. en espaol (2013) Mxico, DF Editorial:
LIMUSA WILEY
 CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Material :
-4 vasos de
-3 tubos capilares.
Material y reactivos precipitados de 50 ml
-Cubas cromatogrficas
-Lampara de luz UV
-

-Disolucin de
Reactivos: nitrobenceno al 1%
-Disolucin de -Acetato de etilo.
acetanilida al 1%
-Hexano

Se dispone de tres disoluciones,
previamente preparadas de
acetanilida (A), nitrobenceno
(N) y una mezcla de ambos (M) .
Se introduce un tubo capilar en
la (A) , tomando una pequea
Una mancha de unos 6 mm del
cantidad de la misma y por su
borde izquierso de la placa y a 4
extremo se coloca en una placa
mm del borde inferior.
de CCF con gel de slice como
adsorbente.

A la misma altura , en el borde Se deja secar y se introduce la

derecho se coloca con otro
capilar una mancha de la
solucin (N) y en la parte
central de la placa una mancha
de la solucin M de nuevo con
un capilar diferente .
placa en el interior de una cuba
cromatogrfica conteniendo 3
ml de acetaro d etilo /hexano
50:50 .El disolvente no debe
tocar la zona en la que se
encuentran las manchas.
 Se tapa la cuba y cuando el
disolvente ha migrado hasta
llegar a 4 mm del borde
superior se saca la placa y se
marca el nivel del disolvente
en un extremo de la misma.
Se deja secar y se revela la
Se repite todo el proceso
placa en una lmpara de luz
utilizando como eluyente
ultravioleta o en una cmara
acetato de etilo/hexano
de yodo, localizando la
20:80; acetarp de
posicin de cada mancha , y
etilo/hexano 80:20 .
se calcula el valor de Rf.
Intentar con otros eluyentes
y elegir cual es el mejor.