Snchez Hernndez

VARIACIN William Smith

Cultivo de tejidos -
SOMACLONAL 2015
INTRODUCCIN
Un hecho ampliamente reportado en los laboratorios de
cultivo de tejidos y micropropagacin vegetal, es que
muchas plantas obtenidas in vitro presentan diferencias
fenotpicas, morfolgicas o bioqumicas en comparacin con
el fenotipo de las plantas donadoras de los explantes.
El cultivo in vitro per se puede ser muy estresante para las
clulas vegetales e involucra procesos mutagnicos durante
el establecimiento del explante, la induccin de callo, la
formacin de embriones y la regeneracin de plantas. Por
esta va es posible obtener variacin, de origen nuclear y/o
citoplasmtica, que podra ser utilizada para el
mejoramiento vegetal.
INTRODUCCION
HISTORIA
Sacristan & Melchers (1969): Observacin del fenmeno de variacin
somaclonal.
Larkin y Scwcroft 1981: Definieron la variacin somaclonal.
1983: Sealaron a los reordenamientos cromosmicos como posibles
mecanismos que generara variacin somaclonal.
Schawartz & Dennis (1986): Sugirieron que la metilacin del ADN juega un rol
importante en la regulacin de los elementos transponibles.
Phillips et al., (1990): El cultivo de tejidos es claramente un procedimiento
mutagenicos.
Lambe et al., (1997) Confirma lo dicho por Phillips et al.
VARIACION SOMACLONAL
La variacin somaclonal son cambion genticos y genotpicos en plantas
regeneradas por cultivo de tejidos. Larkin y Ccowcroft.
Larkin y Scowcroft (1981), distinguieron claramente dos tipos de causas:

La variacin epigentica transitoria, son inestables y se revierten con una

alta frecuencia en las lneas celulares, sin que haya consecuencias
fenotpicas en las plantas regeneradas.

Las variaciones genticas verdaderas, producto de mutaciones azarosas

s se transmite y expresa en la descendencia de las plantas regeneradas.
En cualquier caso, el fenmeno se conoce como variacin somaclonal.
 MECANISMOS POR LO
QUE OCURRE LA
VARIACION SOMACLONAL
Estos mecanismos que dan origen a la variacin somaclonal son un
tema de gran importancia, cuyo conocimiento permitir principalmente
aumentaer el nivel de variabilidad en el mejoramiento de plantas,
adems de lograr una uniformidad en el mejoramiento de plantas
obtenidas del cultivo de tejidos sea esencial, como en la
micropropagacion.
1. Variacion pre-existente
2. Alteraciones en el cariotipo.
3. Reordenamintos cromosmicos
4. Recombinacin somtica.
5. Elementos genticos transponibles.
VARIACIN SOMACLONAL
1. Variacion Pre-existente

Seleccin del explante - Variacion gentica Planta

regenerada con diferente fenotipo.
Cultivo de tejido
Activacin del mecanismo de expresin de la variacin

Ejemplo: En callos embriognicos de caf se observaron

diferentes tipos de clulas. (Menendez, 1999)
VARIACION SOMACLONAL
2. Alteraciones en el Cariotipo

Variacion en el numero de cromosomas: Poliploidia,

aneuploidia, Mixaploidia.
Variacion estructural de cromomas: Rutura de las hebras
de los cromosomas.
Delecciones, duplicaciones e inversiones.
Ejemplo: En plantas de cebeda regeneradas porcultivo de
anteras, se observo clulas haploides, diploides, triploides,
tetraploides, aneuploidias.
VARIACION SOMACLONAL
3. Reordenamiento Cromosomico
Interrupcin en el control gnico del ciclo celular Division
celular anormal Mutaciones, Translocaciones reciprocas, T. no
homologas, Inversiones, Aneuploidias, poliploidias, Ruptura de
cromosomas.
Mecanismo:
1. Replicacion tardia de la heterocromatina Fase S ciclo
celular anormal
Mayor numero de regios de heterocromatina, mayor variacin.
Reportado en el Maiz.
2. Desequilibrio en los depsitos intercelulares de nucleosidos:
Nucleosidos importantes en la replicacin del ADN.
VARIACION SOMACLONAL
4. Recombinacion somatica

Lee y Phillip Posible mecanismo Reordenamiento

cromosmico.
Se da en:
1. Intercambio es asimetrico,
2. Intercambios es entre cromosomas no homologos.
Poca evidencia que sustenta a este mecanismo como
posible causa de variacin somaclonal.
VARIACION SOMACLONAL
5. Elementos genticos transponibles.
Secuencias de ADN capaces de moverse por el genoma.
Se hallaron en por primera vez en cultivo de Maiz Idea de posible
mecanismo de V. somaclonal.
Presentes en geneoma de plantas en un 30% - 90%.
Mutaciones al insertarse dentro o cerca de genes Afectan al marco de
lectura de uno o varios genes Cambios en la codificacin de protenas.
Ejemplos: 1. Planta mutantes de alfalfa con variaciones en el color de
flores Falla en la codificacin de la enzima 3, 5 hidroxilasa.
2. Clonacion de diferentes E. transponibles del genom de palma de aceite
provenientes de plantas obtenidas por semilla y de cultivo de tejido con
anormalidades y aborto floral Ninguna DIFERENCIA en las secuencias.
VARIACION SOMACLONAL
6. Amplificacion y disminucin de genes.
Fenomeno muy comn en cultivo de tejidos Larga duracin.
Se da cuando una poblacin celular es sometida a una sustancia
o producto que esta relacionado con la expresin de un gen.
Ejemplos:
1. Suspensiones celulares de alfalfa resistencia a la
fosfinotricina inhibidor de la glutamina sintetasa (GS)
Amplificacion en 4 11 del gen GS.
2. Plantas de petunia tolerantes a la glicina inhibidor de 5-
enolpiruvilshikimato-3-P (EPSP) Amplificacion de 20 veces el
gen EPSP.
VARIACION SOMACLONAL
7. Modificacion de histonas
Funcion estructura y regulador de expresin de genes (Impide el
ingreso de la Pol II).
Modificacion por metilacin, acetilacin y ubiquinacion en su extremo
N-terminal.
Genes en zonas con histonas muy compactadas Genes sin expresin.
Genes en zonas con histonas ligeras Genes expresados.
La acetilacin de histonas es la nica modificacin en originar una
variacin estructural. Uniom de protenas Alteracion del
empaquetamiento de la heterocromatina y movilizacin de los histonas
silenciamiento de genes y activacin de otros genes.
VARIACION SOMACLONAL
8. Metilacion de ADN
Proceso normal en la celula eucariota. Control de expresin de genes, control
de E. transponibles, defensa contra ADN forneo.
Metilacion en residuos de citosin
En Plantas la metilacin esta en un 30%.
Hipermetilacion Incremento en la restriccin de expresin gnica (Impiden la
traduccin)
La desmetilacion provoca cambio en las bases nitrogenadas: Citocina Timina.
Tambien activa genes.
Proteinas se ligan en las bases metiladas alteran la estructura de la
cromatina.
Hipotesis: hipermetilacion, menor actividad de tramposones. Hipometilacion
mayor activida de tramposones. (Experimento con Transposones Ac.)
VARIACION SOMACLONAL
9. Microy peueos ARNs de interferencia.
ARNs no codificantes. Accion postranscripcional. Dirigen la
metilacin del ADN y la modificacin de las histonas.
1. Degradan una secuencia de ARNm.
2. Represion total de la traduccin.

Efectos en el fenotipo sin alteracin en las secuencias

de nucletidos del genoma.
VARIACION SOMACLONAL
Especies reactivas de Oxigeno (ROS)
Dao oxidativo en el ADN nuclear y en el ADN de organelos durante el ciclo
celular mutaciones.
Subproductos de las rutas metablicas Respiracion y fotosntesis -
Singlete de oxigeno, radical de superoxido + Iones de cloro y hierro
Peroxil, Alcoxil (Sustancias mutagenicas).
En condiciones de extres Aumento de ROS.
Cultivo de tejidos, Cortes de explante, Esterilizacion del explante:
Hipoclorito, Sales de mercurio.
Da lugar a hipermetilacion, hipometilacion, Poliploidias, aneuploidias,
Rompimiento de hebras de cromosomas rearreglos cromosmicos,
delecciones y sustituciones de nucletidos.
FACTORES RELACIONADOS CON LA
APARICIN DE VARIACIN
SOMACLONAL
Genotipo Explante
FACTORES
RELACIONADOS CON LA
APARICIN DE VARIACIN
SOMACLONAL
Vas de
Naturaleza del callo
regeneracin
FACTORES
RELACIONADOS CON LA
APARICIN DE VARIACIN
SOMACLONAL
Medio de cultivo
FACTORES
RELACIONADOS CON LA
APARICIN DE VARIACIN
SOMACLONAL
Reguladores de
Deficiencia o
exceso de
crecimiento
minerales
FACTORES
RELACIONADOS CON LA
APARICIN DE VARIACIN
SOMACLONAL
Edad del cultivo
Ventajas Desventajas
GRACIAS POR
SU ATENCIN

UNPRG -
2015