DETERMINACIN DE

COLESTEROL

UTA 2016 -2017

DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL

LOS LPIDOS SON COMPUESTOS INTRACELULARES
CON UNA SOLUBILIDAD HDRICA MUY POBRE
Esta caracterstica es propia de ello, y se
diferencia del glucgeno porque sta molcula se
hidrata fcilmente
stos son muy solubles en solventes no polares
como el ter, cloroformoo benceno
La naturaleza hidrofbica
de los LPIDOS se
fundamenta
en la predominancia de cadenas
hidrocarbonadas
(-CH2-CH2-CH2-) en sus estructuras

stos compuestos constituyen una forma de

almacenamiento y transporte
del combustible
metablico a nivel celular, pero lo que es ms
importante estos representan la base estructural
de las membranas celulares
Los principales constituyentes de las membranas
celulares son los FOSFOLPIDOS tales como
fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina
Los GLICOLPIDOS se disponen en la capa
externa de la BICAPA, mientras que los Inositol
fosfolpidos se disponen en el lado citoslico,
donde ejercen funciones muy importantes
relacionados
con
los
mecanismos
de
comunicacin celular

Las membranas plasmticas de las clulas

eucariticas contienen tambin colesterol, el que
contribuye en gran parte a la fluidez de las
membranas
Las principales funciones de los Lpidos son:
.- cidos grasos: combustible metablico,
de lpidos
.- Prostaglandinas: modulares intracelulares
.- steres de Glicerol:

costituyentes

-Acilgliceroles: depsito de cidos grasos, intermediarios

metablicos
- Fosfoglicridos: estructura de membrana
Esfingolpidos
Esfinfomielina: estructura de membrana
Glucoesfingolpidos: membranas, antgeno de usperficie

DERIVADOS DEL ESTEROL

.- Colesterol: estructura de

membrana

de

Lipoprotenas
.- steres de Colesterol: almacenamiento y transporte
.- cidos Biliares: digestin y absorcin de lpidos
.- Hormonas Esteroides: regulacin metablica
.- Vitamina D: metabolismo de Ca y P

-TERPENOS:
.- Dolicoles: sntesis de glicoprotenas
.- Vit. A: visin, integridad epitelial, expresin gentica y
crecimiento
.- Vit. E: Antioxidante lipdico
.- Vit. K: Coagulacin sangunea

CLASIFICACIN DE LOS LPIDOS:

1.- cidos grasos y sus derivados inmediatos:
prostaglandinas y leucotrienos
2.- steres de Glicerol como Acilgliceroles y
Fosfoglicridos
3.- Esfingolpidos como la Esfingomielina y
Glucoesfingolpidos
4.- Colesterol y sus derivados como los steres de
Colesterol, cidos biliares, hormonas esteroideas y Vit.
D.
5.- Derivados Isoprenoides como los Dolicoles y las
vitaminas liposolubles (A, D, E y K)

EL COLESTEROL
Es una sustancia adiposa
que forma parte las
membranas celulares

Su cuerpo produce la
mayor parte del
colesterol en el hgado

Por este motivo los

niveles de colesterol
estn determinados en
gran medida por la
Gentica

Y el colesterol alto
puede ser una
caracterstica
hereditaria

Una dieta con alimentos ricos en colesterol, grasas

saturadas, grasas trans, y grasa total, tambin puede
afectar los niveles de colesterol

EL COLESTEROL
Diariamente se consumen
de 60 a 150 gr de lpidos,
de los cuales
FUENTES DE
OBTENCIN
El colesterol del
organismo tiene dos
orgenes:

El 90% son triglicridos

y el 10% restante est
representado en
Fosfolpidos, Colesterol,
steres y Ac. Grasos
libres
El Endgeno
procedente de la
sntesis del novo (a
partir de Acetil CoEnzima A, forma
activada del acetato)

Y EXGENO, procedente de la dieta (yema de

huevo, vsceras, carnes rojas solo alimentos de
origen animal.

DIGESTIN Y ABSORCIN
El colesterol se absorbe en el intestino, gracias a
los cidos biliares y a los fosfolpidos que son
vertidos desde el hgado
La Sntesis Endgena, el hgado contribuye en
un 20% , a partir de acetil-CoA. El equilibrio entre
los compartimentos (libre y esterificado) es clave
para la regulacin de colesterol en sangre
Dicho equilibrio se mantiene gracias a dos
enzimas: la acetil coenzima A: colesterol
acetiltransferasa y la colesterol ster
hidrolasa
El hgado produce y capta colesterol
plasmtico

La vida MEDIA del colesterol en el plasma es

aprox 8 das y luego es esterificado a nivel
heptico, por lo que en afecciones como:
Necrosis hepato-celular, e intoxicacin por
fsforo blanco ste suele disminuir a cifras de 70
a 100 mg/dl (VN: 150 a 250 con un 75% de
esterificacin)
Otro aspecto importante del metabolismo del
colesterol es la sntesis de cidos biliares. Se
trata de un proceso complejo cuya funcin es
transportar los c. Biliares desde el intestino
delgado a la circulacin portal, de sta al
hepatocito, de ah a bilis, vescula biliar, de nuevo
al intestino

ELIMINACIN por tres vas

.- tracto gastrointestinal
.- Sales biliares H. esteroideas

.- Incorporacin a
Tejidos nuevos

ELIM
INA
CI
N

dieta

Sntes
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COLEST
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TOTAL
(1,4
g/kilo)

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es

REGULACIN DE LA SNTESIS DEL

COLESTEROL
Los adultos sanos normales sintetizan colesterol
en una proporcin de aproximadamente 1 g/d y
consumen aproximadamente 0,3 g/d.
El nivel se mantiene mediante el control de
sntesis de novo.
El nivel de sntesis del colesterol es regulado en
parte por la ingestin de colesterol en la dieta

El colesterol de la dieta y de la sntesis interna se

utiliza en la formacin de membranas celulares
y en la sntesis de las hormonas esteroides de
los c. biliares

UTILIZACIN DEL COLESTEROL

El colesterol se transporta en el plasma como
steres , asociados a las lipoprotenas. El
colesterol de la dieta se transporta desde el
intestino delgado al hgado dentro de los
quilomicrones
El colesterol sintetizado como el de la dieta que
se encuentra en exceso en el hgado, se
transporta en el suero dentro de las LDLs.
El hgado sintetiza VLDLs y stas se convierten
en LDLs pr accin de la lipoprotena lipasa
asociada con las clulas endoteliales
El colesterol que se encuentra en membranas de
las clulas puede ser extrado por las HDLs por la
enzima LCAT asociado a HDL.

UTILIZACIN DEL COLESTEROL

El colesterol adquirido desde los tejidos puede
entonces transferirse a las VLDLs y a las LDLs
por accin de la protena de transferencia de
steres de colesterol (apo-D) que est asociado
con las HDLs
El transporte reverso del colesterol permite que
el colesterol perifrico sea devuelto al hgado por
las HDLs

En ltima instancia, el colesterol se excreta en la

bilis como colesterol libre o como sales de
biliares despus de la conversin a cidos
biliares en el hgado

ALTERACIONES CLNICAS
.- Acumulacin anormal de colesterol en huesos y otros

tejidos o XANTOMATOSIS como problema primario, aunque

puede existir en asociacin a diaabetes mal controladas,
hipotiroidismo, y obstruccin biliar.
.- Formacin de CLCULOS biliares junto a pigmentos biliares
y calcio, pero causados adems por otros factores coligados
como stasis de la bilis, y los procesos de desarrollo
bacteriano concomitante (colecistitis-colelitiasis)
.- Afecciones HEPATOCELULARES al disminuir esterificacin

del colesterol circulante como en casos de intoxicacin por

fsforo blanco
.- La ATEROESCLEROSIS en casos de hipercolesterolemia, el

colesterol suele depositarse en el endotelio de las arterias ,

especialmente a nivel de las coronarias, formando placas de
colesterol, fosfolpidos y triacilglicridos, Riesgo de sufrir
enfermedad cardiovascular

COLESTEROL LIQUICOLOR
MTODO: CHOD-PAP
PRUEBA ENZIMTICA COLORIMTRICA PARA COLESTEROL
CON FACTOR ACLARANTE DE LPIDOS
El colesterol se determina despus de la HIDRLISIS
ENZIMTICA Y LA OXIDACIN.
El indicador es la QUINONEIMINA formada por el PERXIDO
DE HIDRGENO Y 4 AMINOANTIPIRINA en presencia de
FENOL Y PEROXIDASA.

PRINCIPIO DE LA REACCIN:
CHE
steres de colesterol + H2O
grasos
CHO
Colesterol + O2

Colesterol + cidos

Colestene-3-ona + H2O2
POD

2H2O + 4 Aminoantipirina + fenol

Quinoneimina + 4H2O

CONTENIDO:
RGT:
100 ml REACTIVO ENZIMTICO
Buffer fosfato (pH 6.5) 30 mmol/l
4-Aminoantipirina
0,3 mmol/l
Fenol
5 mmol/l
Peroxidasa
>5 KU/l
Colesterolesterasa
> 150 U/l
Colesteroloxidasa
> 100 U/l
Azida de sodio
0,05%
STD. 3 ml Estndar Colesterol
5,17 mmol/l

200 mg/dl

MUESTRA:
Suero, plasma con EDTA o heparina

ENSAYO:
Longitud de Onda:
Paso de luz:
Temperatura:
Medicin:

500 nm. Hg 546 nm

1 cm
20 25C 37C
Frente a un Blanco de Reactivo

ESQUEMA DE PIPETEO
Pipetear en las
cubetas

Blanco
reactivo

STD

STD
10 ul

MUESTRA
RGT

Muestra

10 ul
1000 ul

1000 ul

1000 ul

Mezclar, incubar 10 minutos de 20 25C o por 5

minutos a 37C. Medir la Absorbancia de STD y de
Muestra frente al Blanco de reactivo antes de 60
minutos ( A)

CLCULOS:
A muestra
COLESTEROL = ----------------------- X 200
A STD
A muestra
COLESTEROL = ----------------------- X 5,17
A STD

(mg/dl)

(mmol/l)

CARACTERSTICAS DE LA EJECUCIN
LINEARIDAD
La prueba es lineal hasta concentraciones de COLESTEROL
DE 750 mg/dl. Diluir las muestras con concentraciones ms
altas de colesterol 1 /2 con solucin salina fisiolgica (NaCl
0,9%) y repetir la determinacin, multiplicar el resultado por
2
INTERPRETACIN CLNICA
SOSPECHOSO sobre 220 mg/dl
ELEVADO
sobre 260 mg/dl

GRACIAS