VIROLOGIA Y BACTERIOLOGIA VETERNARIA

`` CULTIVO Y ESTUDIO DE LOS VIRUS

INTRODUCCION
Los virus se replican exclusivamente en el interior de las clulas.
La mayor parte de los virus pueden ser cultivados en cultivos celulares, en
huevos embrionarios de gallinas o en animales de laboratorio.
Los primeros estudios de los virus fueron realizados por Loeffler y Frosch con
el virus de la fiebre aftosa en ganado vacuno.

Cultivos celulares
Desde el ao 1949, cuando Enders, Weller y Robbins
demostraron que los poliovirus poda ser cultivados en
cultivos de clulas no neuronales produciendo cambios
citopticos identificables.

Mtodos de cultivos celulares

Las clulas
pueden
cultivarse por in
vitro como
explantes de
tejidos

Como
cultivos
celulares

El trabajo de
investigacin y
diagnostico que
conllevan al cultivo
de virus se utiliza
siempre.

Medio
El mejor conocido fue
desarrollado por Eagle

Solucin isotnica
Solucin isotnica
tamponada
a PH 7,4 a la que
tamponada
a PH vitaminas
7,4 a la que
se aade glucosa,
aade glucosa,
y se
aminocidos,
que vitaminas
y aminocidos,
que para
contienen
antibiticos
contienen
antibiticos
inhibir
el crecimiento
enpara
inhibiry el
crecimiento en
hongos
bacterias.
hongos y bacterias.

Medios sin suero

Son tiles para el

cultivo de clulas de
``hibridoma que
son utilizados para
la obtencin de
anticuerpos
monoclonales

Medios definidos

Estos suponen ventajas

para el aislamiento de
virus neutralizantes por
los anticuerpos
presentes en suero de
animales.

Tipos de clulas cultivadas

Cultivos celulares primarios

Cepas celulares diploides

Lneas celulares continuas

Estos cuando se preparan cultivos celulares a partir de

tejidos directamente obtenidos de los animales
(generalmente de tejidos u rganos fetales) contienen
varias clase de clulas la mayora de las cuales muestran
capacidad limitada de crecimiento in vitro ya sea 5 o10
divisiones.
Son clulas capaces de experimentar un numero de
divisiones en los cultivos bastante prximo a su periodo
de vida en la especie animal, unas 50 en el caso de las
clulas fetales humanas y unas 10 en el caso de clulas
fetales en equinos y bovinos.
Son clulas de un tipo capases de
propagarse in vitro indefinidamente, estas
lneas celulares inmortales se obtienen a
partir de tumores malignos o por
transformacin espontanea de una cepa
celular diploide.

Aplicaciones de los cultivos celulares

Algunos virus se replican en casi todas las lneas celulares y
alguna lneas celulares pueden ser utilizadas para la replicacin
de muchos tipos de virus diferentes.

Por el contrario, muchos virus solo pueden ser aislados a partir

de los animales infectados en determinados cultivos celulares.

Los cultivos celulares son tiles para

tres finalidades:
1: para el aislamiento de virus a partir de casos clnicos.
2: para la obtencin de vacunas y antgenos para el diagnostico serolgico.
3: para estudios bioqumicos de replicacin vrica, para lo que se requiere
recurrir a las lneas celulares continuas preferiblemente cultivadas en
suspensin.

Reconocimiento del crecimiento de los

virus sobre cultivos celulares
El crecimiento de los virus en cultivos celulares pueden seguirse
mediante diversos mtodos bioqumicos que indican el aumento
intracelular de macromolculas vricas y viriones.
Tcnicas utilizadas para diagnostico.
1:
2:
3:
4:

Efecto citopticos
Hemoadsorcin y hemoaglutinacin
Inmunofluorescencia
Interferencia

Huevos embrionarios
Anteriormente en los aos 50, en los que fueron ampliamente adoptados
los cultivos celulares para el cultivo de los virus, el hospedador para el
cultivo de muchos de los virus fue el huevo embrionado de gallina ( con
polluelo en desarrollo).

Actualmente los huevos embrionados han sido sustituidos por los cultivos
celulares siguen utilizndose para el aislamiento y cultivo de muchos
virus aviares.

Animales de laboratorio
Tanto como los huevos embrionados los
animales de laboratorio han desaparecido
de los laboratorios de diagnostico ya que los
cultivo celulares son mas sencillos de
manejar.

Para la virologa tumoral se utilizan

animales como: hmster y otros roedores
ya que son muy susceptibles a la
produccin de tumores por diversos virus
oncognicos.

Estudio de la infectividad de los virus

Tipos de pruebas de infectividad

Cuantitativas

Cuantales

En las pruebas cuantitativas se encuentra el mtodo de la placa

MTODO DE LA PLACA:
introducida en el ao
1952 por Dulbecco.
Algunos virus como los
herpesvirus
y
los
poxivirus,
producen
placas
incluso
en
monocapas
celulares
mantenidas con medio
liquido, ya que la mayor
parte de los virus
permanecen asociados a
las clulas y las placas
se
forman
por
propagacin del virus
entre
clulas
adyacentes.

PRUEBAS
DE
TRANSFORMACIN:
algunos
virus
oncognicos no matan
las clulas sino que las
``transforman lo que
determina
una
reduccin
de
la
inhibicin por contacto
y
el
consiguiente
crecimiento
sin
limitacin, conduciendo
la formacin de un
``microtumorprominente del fondo de las
clulas normales de la
monocapa.

MTODO DE LAS
PSTULAS:
Los virus formados
liberados
de
las
clulas infectadas se
propagan
principalmente a las
clulas adyacentes,
por lo que cada
partcula infectante
da lugar a una lesin
localizada conocida
como ``pstula.
Su morfologa y color
de las pstulas es
caracterstica de un
grupo de virus.

PRUEBAS CUANTALES

No determinan el numero exacto

de partculas vricas infecciosas
en el inoculo sino nicamente su
presencia o ausencia.

Pruebas basadas en otras propiedades de los vi riones

Hemoaglutinacin:
Este fenmeno fue descrito por primera vez por Hirst en 1941, quien
fue que analizo el mecanismo de la hemoaglutinacin por el virus
influenza.
La hemoaglutinacin no es un indicador sensible de la presencia de
un numero pequeo de viriones pero su sencillez hace de ella una
pruebe muy adecuada.

Recuento de viriones por microscopia

electrnica
La tincin negativa con fosfotungstato potsico
permite el recuento del numero de partculas
vricas presentes en una suspensin por
microscopia electrnica.

Gracias