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Bacillus
thuringiensis
Bacillus thuringiensis
Familia Bacillaceae
Género Bacillus
Bacteria esporulada
Gram positiva
ES COSMOPOLITA, SIN
EMBARGO LA RAZÓN
DE ESTA DIVERSIDAD
NO ES CONOCIDA
Bacillus thuringiensis
•FORMA INCLUSIONES
CRISTALINAS VISIBLES AL
MICROSCOPIO ÓPTICO
DURANTE LA
ESPORULACIÓN
•ESTAS INCLUSIONES
CRISTALINAS ESTÁN
COMPUESTAS POR
PROTOXINAS, QUE
CONTIENE DELTA
ENDOTOXINAS, TÓXICAS
PARA LOS INSECTOS
Bacillus thuringiensis
ECOLOGÍA DE Bt
ECOLOGÍA DE Bt
ECOLOGÍA DE Bt
FACTORES DE VIRULENCIA
FACTORES DE VIRULENCIA
Especificidad del rango de huésped: L,Lepidoptera; C, Coleoptera; D,Diptera; N, Nematoda; Cytol, citolítico.
kur, kurstaki;
kurstaki; thu, thuringiensis; sot,sotto;
sot,sotto; aiz, aizawai; ent, entomocidus; ale, alest; dar, darmstadiensis;
darmstadiensis;
tol,tolwarthi
tol,tolwarthi;; ken, kenya, gal, galieriae;
galieriae; mor, morrisoni;
morrisoni; ten, tenebrionis;
tenebrionis; san, sandiego;isr,
sandiego;isr, israelensis;
israelensis; med,
Medellín;
Medellín; ND, no disponible. Tomada de Galán et al (1995a) y Bravo et al (1998).
Bacillus thuringiensis
Protein
Gene Crystal shape Insect activity
size(kDa)
cry I [several subgroups:
lepidoptera
A(a), A(b), A(c), B, C, D, bipyramidal 130-138
larvae
E, F, G]
lepidoptera and
cry II [subgroups A, B, C] cuboidal 69-71
diptera
cry III [subgroups A, B,
flat/irregular 73-74 coleoptera
C]
cry IV [subgroups A, B, C,
bipyramidal 73-134 diptera
D]
ESPECIFIDAD
ESPECIFIDAD
ESPECIFIDAD
A)ALTA ESPECIFICIDAD
D)ASPECTO INOFENSIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE, LA
FAUNA BENÉFICA Y DEMÁS ORGANISMOS
VIVOS, INCLUYENDO AL HOMBRE
C)ADAPTABLE A MÚLTIPLE TIPOS DE
FORMULACIONES.
Bacillus thuringiensis
D) LA ALTA PROBABILIDAD DE
DISMINUCIÓN DE LOS COSTOS DE
PRODUCCIÓN DEBIDO A LOS AVANCES
TECNOLÓGICOS, MICROBIOLÓGICOS
Y GENÉTICOS, LO QUE LO HACE
COMERCIALMENTE COMPETITIVO
FRENTE A LOS INSECTICIDAS
QUIMICOS
Bacillus thuringiensis
CEPA DE COMPAÑIAS
HUÉSPED PRODUCTO
Bt. PRODUCTORAS
Bactospeine
Duphar
Bactuside
Compagina di Ricerca
Bernan Bt.
Chim
Biobit
Bactec
Foray
kurstaki Lepidoptera Novo
Dipel
Novo
Delfin
Abbott
Javelin
Sandoz
Thuricide
Sandoz
M-One Mycogen
sandiego Coleoptera
M-One-Plus Mycogen
Trident Sandoz
tenebriosis Coleoptera
Novodor Novo
Lepidopteral
Foie Ecogen
conjugado Coleoptera
Agrree Ciga-Giegy
Lepidoptera
Larvas de lepidópteros y
EG 2424 Bacteria Foil (Ecogen)
coleópteros
Pseud. fluorescens+B.t.
Bacteria Lepidópteros (orugas) MVP (Mycogen)
kurstaki toxin
Pseud. fluorescens+B.t. San Escarabajo de la patata
Bacteria M-Trak (Mycogen)
Diego toxin (Leptinotarsa decemliniata)
Pseud. fluorescens+B.t. toxin Bacteria Piral del maíz (Ostrinia nubilaris) M-Peril (Mycogen)
Nosema locustae Protozoo Saltamontes, langostas Nolo Bait (Evans BioControl)
Naturalis (Agrichem), Botanigard y
Beauveria bassiana Hongo Mosca blanca
Mycotrol (Mycotech)
Verticillium lecanii Hongo Mosca blanca (Bemisia tabaci) Mycotal(Koppert)
Mosca blanca (Trialeurodes
Paecilomyces fumosoreus Hongo PreFeRal (Biobest)
vaporariorum)
Pine sawfly nuclear Virox (Novo Nordisk), Noecheck
Virus Diprion similis
polyhedrosis virus (USDA Forest Service)
Heliothis nuclear
Virus Helioicoverpa zea Elcar (Sandoz), Condor (Ecogen)
polyhedrosis virus
Gypsi moth nuclear
Virus Lymantria dispar Gypcheck (USDA Forest Service)
polyhedrosis virus
Spod-X (Crop Genetics
Spodeptera exiqua virus Virus Spodoptera exigua
International)
FASE 1:
•SELECCIÓN CON ACETATO DE SODIO – CHOQUE TÉRMICO
•CADA MUESTRA FUE PESADA Y MACERADA
•COLOCÁNDOSE 500 MG EN 10 ML DE CALDO L. BROTH
ACETATO 0.25 M
FASE 2:
ESPORULACIÓN Y DETERMINACIÓN MORFOLÓGICA
CARACTERÍSTICAS DESCRIPCIÓN
Tamaño Grande
Forma de crecimiento Irregular
Elevación de la colonia Plana
Forma de los bordes Lobulado
Consistencia de la colonia Cremosa
Aspecto Opaco- mate
Pigmentación Blanco cremoso
Bacillus thuringiensis
CARACTERÍSTICAS
MICROSCÓPICAS
DE Bt
Bacillus thuringiensis
FASE 3:
REVISIÓN FINAL DEL COMPLEJO CRISTAL – ESPORA
L. broth Acetato(CLA)
20 g
NaCl
10 g
Extracto de Levadura 1X
10 g
Triptona
20.6 g
Acetato de Sodio
Agar Luria Bertani ( LB)
NaCl 10 g
Extracto de Levadura 5g
1X
Triptona 10 g
Agar-agar 15 g
Medio T3
3g
NaCl
2g
Extracto de Levadura
1.5 g
Triptona 1X
5 mg
MnCl
6.9 g
Fosfato de Sodio pH 6.8
15 g
Agar-agar
Agar Tríptico de Soya
( TSE) 5g
Peptona de Soya 5g
1X
NaCl 1.5 g
Extracto de Levadura 15 g
Agar-agar
Bacillus thuringiensis
FASE
1 Lavar 2 Tomar
veces 1.5ml
Observación
Incubar a Picar a media Observar a Aislamiento Resultado
a 100X Incubar
30ºC por 5 T3 100X Tinción por de colonias
Forma y 30ºC por
días Método de la de GRAM(+) agotamiento en la
Posición de 24 horas
cuadrícula por estrías superficie
la espora
FASE
3
•PRODUCCIÓN DE CATALASA
•HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN Y CASEINA
•CRECIMIENTO EN NaCl AL 7%
•FORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORAL
CATALASA + + + + + + +
CRECIMIENTO
+ + + + - - +
ANAERÓBICO
CRECIMIENTO
- + - + + - +
ANAERÓBICO A 50 C
CRECIMIENTO EN NaCl 7% + + + + + + -
FORMACIÓN DE ÁCIDO Y
GAS A PARTIR DE - - - - - - -
GLUCOSA
REDUCCIÓN DE NO3 A NO2 + - + + - V V
HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN + + + + - + +
CRECIMIENTO A 65 C - - - - - - -
pH EN VP MEDIO 6.0 - V - V - V -
FORMACIÓN DE ÁCIDO DE
+ + + + + + -
GLUCOSA
HIDRÓLISIS DE CASEINA + + + + + + V
FORMACIÓN DE CRISTAL
+ - V - - - -
PARAESPORAL
Bacillus thuringiensis
GRUPO II IV I
CATALASA + + -
HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN + - -
FORMACIÓN DE ÁCIDO DE
+ - +
GLUCOSA
HIDRÓLISIS DE CASEINA + V -
C: central, PC: paracentral; ST: subterminal; T: terminal; O: ovalada, R: redonda; N: no deforma el cuerpo del bacilo;
S: si deforma el cuerpo del bacilo; V: carácter variable.
Bacillus thuringiensis
PLANTAS “Bt”
CARACTERISTICAS INCORPORADAS
100
resistencia a
80 herbicidas
60 resistencia a
insectos
40 resistencia a
virus
20
calidad del
0 producto
1985 1990 1995 2000 2003
APLICACIONES
APLICACIONES
Spodoptera frugiperda
Bacillus thuringiensis
APLICACIONES
APLICACIONES
Erwinia
carotovora
Bacillus thuringiensis
APLICACIONES
APLICACIONES
Eldana saccharina
Bacillus thuringiensis
APLICACIONES
APLICACIONES
APLICACIONES
Aedes
aegypti
Bacillus thuringiensis
APLICACIONES
APLICACIONES