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Replicao do DNA

Agradecimentos: Profa. Dra. Aline Maria da Silva


Instituto de Qumica- USP

Bibliografia:
Genes VII - Benjamin Lewin
Biologia Molecular Bsica-Arnaldo Zaha
Lenhinger Principles of Biochemistry (3a. Ed.)

Replicao
do DNA
O mecanismo de
replicao est
baseado no
pareamento das
bases da dupla
hlice do DNA.
A estrutura do
DNA contm a
informao
necessria para
perpetuar sua
sequncia de
bases

A replicao do DNA semi-conservativa


Cultivo em meio

NH4Cl

15

Experimento realizado
por Meselson & Stahl
em 1958

Cultivo em meio
14

NH4Cl

Purificao do DNA
seguida de
centrifugao em
gradiente de CsCl

A replicao
bidirecional

A replicao do cromossomo circular

Replicon: Unidade do DNA onde est ocorrendo um


evento de replicao
Replicon:
1. Origem + Trmino
2. Ativados apenas uma nica vez em cada ciclo
celular
3. O genoma de uma clula procaritica constitue um
nico replicon
4. Cada cromossomo eucaritico constitue vrios
replicons e todos so ativados uma nica vez no
ciclo celular ainda que no simultaneamente

A replicao vista como um olho flanqueado


por DNA no replicado

O genoma bacteriano circular constitue um nico replicon

A velocidade da forquillha de
replicao bacteriana
50000pb/min
Um nica origem de replicao
em E.coli (OriC, 245 pb)

Origem de Replicao em bactrias: Somente origens


completamente metiladas podem iniciar a replicao

O genoma eucaritico constitue vrios replicons

A velocidade da forquillha de replicao eucaritica 2000pb/min


Os replicons eucariticos tem 40-100 kb e so iniciados em
tempos diferentes
Fase S demora ~ 6hrs em uma clula somtica

Forquilha de replicao: Regio do DNA onde ocorre a


transio do DNA parental fita dupla para as novas
fitas filhas duplas

Fita contnua (lder)

Fita descontnua

Polimerases de DNA:
As enzimas que
sintetizam DNA
A sntese de DNA
ocorre pela adio de
nucleotdeos a
extremidade 3OH da
cadeia em crescimento. O
precursor da sntese o
desoxiribonucleosdeo 5
trifosfato
Sentido da sntese
sempre 5 3
A replicao um
processo extremamente
fiel. As DNApolimerases tem atividade
revisora

Desoxiribonucleosd
eo 5trifosfato
(precursor)

Fita sendo
polimerizad
a

Fita molde

As DNA-polimerases sempre requerem um iniciador


previamente pareado ao molde que ser copiado

correto

Pareamento de
bases

incorret
o

Atividade revisora 3 5 garante a fidelidade da replicao

Modelo da estrutura das DNA-polimerases

Propriedades das DNA-polimerases Bacterianas

Pol I
+
+
+

PolII
+
+
-

Nmero de subunidades
Tamanho em kDa

1
103

4
90

10
~900

Velocidade de
Polimerizao(nt/seg)

16-20

40

250-1000

Polimerizao 5 3
Exonuclease 3 5
Exonuclease 5 3

Processividade
3-200
(nt adicionados antes
da dissociao do molde)

1500

PolIII
+
+
-

500000

DNA-polimerase III uma holoenzima de mais de 10


cadeias de estrutura dimrica

A subunidade
Beta da
DNApolimerase
III envolve o
duplex das
fitas-filhas

OriC do
cromossomo
de E.coli

Protenas presentes na origem de Replicao de E.coli


DnaA
DnaB (helicase)

Reconhece a origem e abre a dupla fita em


stios especficos
Desenrola o DNA

DnaC

Auxilia a ligao de DnaB na origem

HU

Protena do tipo histona que estimula a


iniciao
Sintetiza os primers de RNA

Primase (DnaG)

Single strand binding Liga a fita simples de DNA


(SSB)
RNA polimerase
Facilita a ao da DnaA
DNA girase
Dam Metilase

Alivia a tenso torsional gerada pela


abertura da dupla-fita
Metila as sequncias GATC na OriC

A sntese do DNA semi-descontnua e requer um


iniciador (primer) de RNA
Sntese da Fita descontnua

Fita descontnua
Fita contnua

Sntese da Fita Contnua

Fragmentos
de Okasaki
ocorrem na fita
descontnua
A DNA
polimerase III
responsvel
pela sntese da
maior parte do
DNA
A DNA
polimerase I
remove o
primer de RNA
e preenche as
lacunas
A DNA
ligase sela as
quebras

A DNA ligase sela as quebras

Mecanismo de ao da DNA ligase

Protenas presentes na forquilha de Replicao de E.coli


SSB

Liga a fita simples de DNA

DnaB (helicase)

Desenrola o DNA

Primase (DnaG)

Sintetiza os primers de RNA

DNA Polimerase III

Sintese da fita nova

DNA Polimerase I

Preenche as lacunas e excisa os primers

DNA Ligase

Liga os fragmentos

DNA girase

Superenrolamento

Sntese das fitas contnua e descontnua independente

O complexo de
replicao
A protena DNA B
(helicase) responsvel
pelo movimento para
frente da forquilha
Cada core cataltico
da DNA PolIII sintetiza
uma das fitas-filhas
O primossomo afasta
uma das fitas molde
Protenas SSB
mantem as fitas
parentais separadas

Forquilha
sentido
antihorrio

Terminao

Forquilha
sentido
horrio

Terminao

Duplicao dos
cromossomos

Separao dos
cromossomos e
diviso celular

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