Ingeniera Gentica

herramientas y/o vectores

Alumna : Garrido Ortiz Judith E

INTRODUCCION

Si se acepta en un sentido amplio que la Biotecnologa es la tecnologa aplicada a la

utilizacin de los seres vivos o partes de stos con fines prcticos o industriales, es
indudable que la historia de la Farmacia constituye una parte significativa de la historia de
la Biotecnologa o viceversa.
La mayora de los medicamentos y principios activos que se han venido utilizando desde la
antigedad hasta el desarrollo de la moderna qumica orgnica procedan de los seres
vivos. Incluso hoy en da muchos de los denominados compuestos lderes, que sirven
de base para la sntesis de los nuevos medicamentos se obtienen originalmente a partir de
extractos de seres vivos.

QU ES LA INGENIERIA GENTICA?
La ingeniera gentica es una parte de la

biotecnologa que se basa en la manipulacin

gentica de organismos con un propsito
predeterminado, aprovechable por el hombre: se
trata de aislar el gen que produce la sustancia e
introducirlo en otro ser vivo que sea ms
sencillo de manipular. Lo que se consigue
es modificar las caractersticas hereditarias de
un organismo de una forma dirigida por el
hombre, alterando su material gentico.

 El proceso puede utilizarse ya en bacterias y en clulas eucariotas vegetales o animales.

Una vez adicionada o modificada la carga cromosmica, el organismo en cuestin sintetiza

la protena deseada y el aumento del rendimiento de la produccin puede obtenerse

mediante el aumento en la poblacin portadora.

Para realizar la manipulacin de genes, son necesarias varias herramientas

Son muchas y muy variadas las tcnicas y herramientas que se utilizan en la Ingeniera Gentica y,
por supuesto, ser imposible describirlas todas aqu, pero el conocimiento de las ms importantes
puede ayudar a comprender mejor cmo se realiza el trabajo con esta tecnologa.
Enzimas de restriccin. Son protenas bacterianas que cortan el ADN en puntos concretos.

ENZIMAS DE RESTRICCION
a) Enzimas.

Las enzimas son las herramientas ms utilizadas en Ingeniera Gentica y, dentro de

estas, las ms empleadas son las enzimas de restriccin (endonucleasas) que reconocen
secuencias especficas de nucletidos del ADN y producen la rotura de las dos cadenas.
Tras la rotura del ADN en pequeos fragmentos, las ADN ligasas son las que
catalizan la unin de estos fragmentos y propician as la recombinacin gentica in vitro.
Otras enzimas como polimerasas, nucleasas, fosfatasas, etc., completan la gran
coleccin de opciones que permiten al ingeniero manipular in vitro el ADN.
La fuente de estas enzimas es muy diversa y alcanza a todos los seres vivos, si bien
la mayora proceden de microorganismos, muchos de ellos recombinantes.

VECTOR DE TRANSFERENCIA
Vector de transferencia. Es el agente que transfiere un segmento de ADN de un

organismo a otro. Los ms utilizados son los plsmidos, pequeas molculas de

ADN circular que se encuentran en las bacterias. Tambin se pueden utilizar
como vectores ciertos virus.

b) Vectores.

Se denominan vectores a las cadenas de ADN o ARN extracromosmicas que se utilizan para

transportar informacin gentica.

Los ms utilizados son los plsmidos, molculas de ADN generalmente circulares y de
pequeo tamao en torno a las 5 Kb (5000 pares de bases) de media.
Como ya se ha comentado, los virus animales y bacterianos se utilizan tambin como
vectores.
Los vectores pueden ser de mltiples tipos en funcin de la utilidad que se les asigne.
Algunos slo sirven como portadores de la informacin (vectores de clonaje), pero los ms

interesantes son los denominados vectores de expresin, que portan secuencias promotoras, que
permiten sintetizar grandes cantidades de protenas a partir del gen o genes clonados en el vector.
El nmero de vectores disponibles en el mercado es enorme y cada da son ms lo que se
venden en forma de kits listos para su uso con una simple receta o protocolo, lo que facilita
enormemente el trabajo de clonacin y expresin de genes.

VECTOR DE CLONACION

PLASMIDOS
Llevan consigo genes en grado de conferir particularidades fenotpicas a las bacterias que los
contienen, como la resistencia a los antibiticos. El plsmido pBR 322 es el ms ampliamente
usado para clonar, es de pequeas dimensiones y lleva los genes para la resistencia a los
antibiticos ampicilina y tetraciclina.

COSMIDOS
Son vectores hbridos entre un
plsmido, que proporciona la
resistencia a los antibiticos, y
una regin del ADN de un
bacterifago llamada "cos" que le
otorga
sus
particulares
caractersticas.

VECTORES BACTERIOFAGOS

BACTERIOFAGOS
Los bacterifagos son unos virus que infectan a las bacterias. Algunos de ellos (Lambda y M13)
se han adaptado a las exigencias de los bilogos moleculares que han modificado
oportunamente sus cromosomas.

CROMOSOMAS BACTERIANOS ARTIFICIALES

ADN LIGASAS

ADN ligasas. Son enzimas encargadas de unir fragmentos de ADN.

c) Tcnicas de transformacin gentica.

Una vez que se ha obtenido un vector que porta una molcula de ADN o ARN recombinante es

necesario introducirlo en la clula husped, que actuar como sistema de almacenamiento o

expresin de la informacin.
Para esto se han desarrollado mltiples sistemas de transformacin gentica.
En los microorganismos y clulas aisladas, la transformacin a veces se hace mediante
procesos naturales como la infeccin viral, la conjugacin o la competencia natural (capacidad
natural de internalizar molculas de ADN), pero lo habitual es hacerlo mediante procesos
artificiales, ya sean qumicos (sales, polmeros), bioqumicos (enzimas), fsicos (electroporacin), o
mediante combinaciones de stos.
Las plantas se transforman generalmente mediante tcnicas de infeccin (viral o bacteriana) o
por sistemas biolsticos utilizando las denominadas pistolas o caones de genes.
Para la obtencin de animales transgnicos, los embriones se transforman mediante
microinyeccin o se crean mediante tcnicas mucho ms complejas embriones clnicos, como en el
famoso caso de la oveja Dolly.
Por ltimo, hay que sealar que despus del proceso de transformacin se requiere un periodo
de adaptacin y crecimiento del organismo transformado que si bien en los microorganismos es por
lo general muy sencillo, en las plantas y, por supuesto, en los animales es muy complejo.

d) Amplificacin del ADN.

Si hubiera que poner la medalla de honor a una herramienta de la Ingeniera Gentica tal

vez sta le correspondera a la tcnica denominada PCR (polymerase chain reaction,

reaccin en cadena de la polimerasa).
Esta herramienta permite copiar millones de veces (amplificar) el ADN o el ARN gracias
a la accin conjunta de una polimerasa termoestable y dos oligonucletidos (cebadores o
primers) que se anillan en ambos extremos de un fragmento de ADN que se quiere copiar.
Mediante esta herramienta es posible extraer la informacin gentica del cromosoma de
un ser vivo para colocarla despus en un vector y poder as expresarla en cualquier clula
husped.
Esta tecnologa, entre otras muchas cosas, per- mite realizar con gran sencillez procesos
de mutagnesis al azar o dirigida, que son de una gran utilidad para el desarrollo de los
procesos biotecnolgicos.
Para realizar la PCR existen en el mercado mltiples tipos de equipos automticos
denominados termocicladores y un gran nmero de polimerasas termoestables.

PCR

e) Secuenciacin del ADN.

La secuenciacin del ADN es un proceso clave en el desarrollo de la Ingeniera

Gentica, ya que permite conocer la estructura primaria de los genes y de ello deducir la
secuencia de aminocidos de las protenas.
Aunque no es imprescindible conocer la secuencia de un gen para poder obtener
organismos recombinantes de inters industrial, hoy en da gracias a la facilidad que
ofrecen los secuenciadores automticos de ADN se trabaja siempre conociendo la
secuencia del gen o del fragmento de ADN que se est manipulando.
La secuenciacin completa de muchos genomas, entre ellos los de Saccharomyces,
E. coli, y sobre todo la secuenciacin del genoma humano, ha abierto las puertas a
numerosos desarrollos biotecnolgicos.

f) Ingeniera de protenas e ingeniera metablica.

Cuando la Ingeniera Gentica se aplica a la modificacin de las protenas se utiliza el trmino de

ingeniera de protenas (Ogawa y Shimizu, 1999).

De la misma manera, cuando de lo que se trata es de modificar un proceso metablico se
emplea el trmino de ingeniera metablica (Chartrain y col., 2000; Stafford y Stephanopoulos,
2001).
Las herramientas de la ingeniera de protenas y de la metablica se han desarrollado no slo para
ampliar el conocimiento de la Bioqumica, sino que hoy en da mediante estas herramientas se
optimizan muchos procesos biocatalticos para producir compuestos de inters qumico y sobre todo
farmacutico, como se ver ms adelante (Nielsen, 1998).
Junto con estas herramientas se han desarrollado nuevos conceptos y metodologas, como la
evolucin dirigida o la gentica combinatorial en sus distintas versiones, que pretenden conseguir
nuevas formas de protenas o de sistemas metablicos mediante la inclusin al azar en un organismo
de distintos genes o libreras gnicas (biblioteca o conjunto de genes clonados en un vector).
La posterior seleccin del organismo recombinante mediante el empleo de sistemas robotizados de
cribado masivo de muestras (high-throughput screening) permite obtener en poco tiempo la protena o
el organismo deseado.

g) Genmica y protemica.

La secuenciacin completa de algunos genomas ha permitido desarrollar una nueva herramienta

para la Ingeniera Gentica denominada ADN-chips (microarrays), que permite analizar en una sola etapa
la expresin o la composicin de un genoma.
Aunque existen muchos dispositivos de ADN-chips y varias tecnologas para construirlos,
bsicamente lo que todos ellos contienen son fragmentos de ADN (oligonucletidos o genes) ordenados en
forma matricial, que representan a cada uno de los genes de un genoma.
Mediante marcaje del ARN o del ADN extrado de un organismo y su posterior hibridacin con el ADNchip se puede saber qu genes estn activos (transcriptoma) o qu genes estn mutados en una
determinada clula.
Por otro lado, las tcnicas de electroforesis bidimensional de protenas junto con los nuevos
sistemas de espectrometra de masas aplicados a las protenas permiten obtener una visin panormica
de la composicin proteica de una clula en un determinado momento de su desarrollo (proteoma).
El anlisis del genoma, del transcriptoma, y del proteoma permiten conocer de una forma ms precisa
cmo se desarrolla el metabolismo celular y como consecuencia de ello aplicar la Ingeniera Gentica de
forma ms racional para conseguir mejorar la produccin de frmacos.
Si a todo esto se unen las nuevas tecnologas para el anlisis de metabolitos (metaboloma) es fcil
hacerse una idea del gran futuro que se abre para el desarrollo farmacutico.

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Enzima de restriccin.mp4

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