MEDIOS DE

CULTIVO Y
ESTERILIZACIN

Para poder estudiar a un microorganismo es

necesario cultivarlo.
Cultivar a un microorganismo es proporcionarle las
condiciones adecuadas para su crecimiento y
multiplicacin.
El objetivo principal de cultivar a un microorganismo
es obtener un cultivo axnico; es decir un cultivo puro
que se forma a partir de una sola clula.

Los nutrientes que requieren los microorganismos

son: agua, carbohidratos, nitrgeno, fsforo, azufre,
calcio, cobre, etc.
Tambin es necesario brindarle las condiciones
ambientales adecuadas de luz, temperatura,
oxigenacin, humedad, etc. Las bacterias crecen a
37C y un pH de 6.5 - 7.5 y los hongos a 27 C y un
pH de 4.5 - 6.
Para cultivar a los microorganismos es necesario el
uso de medios de cultivo.

QU ES UN MEDIO DE CULTIVO?
Esunasolucinlquidaogelatinosaquecontienelosn
utrientesnecesariosparaelcrecimientodelosmicro
organismos.

COMO SE CLASIFICAN LOS MEDIOS DE

CULTIVO?
Por su consistencia:
Lquidos: tambin se llaman caldos de cultivo, no
contienen agar y se preparan en matraces pequeos.
Semislidos: contienen 0.5 % de agar y se preparan
en matraces pequeos.
Slidos: contienen de 1.5 a 2 % de agar y se
preparan en cajas de Petri (placa) o en tubos de
ensayo.

Por su composicin:
Definido: se conoce su composicin exacta, se utiliza
cuando ya se conocen los microorganismos que se van
a cultivar.
Complejo: no se conoce su composicin, pueden
tener sangre, leche, extracto de levadura o carne; se
utiliza cuando no se conocen a los microorganismos o
no se conocen sus requerimientos nutricionales.
Mnimo: es un medio definido que proporciona solo
los nutrientes necesarios.

Por su funcin:
Selectivos: promueve o inhibe el crecimiento de los
microorganismos.
Diferenciales: permiten distinguir entre diferentes
tipos de microorganismos.
De enriquecimiento: contiene factores de
crecimiento, un nutriente esencial que el
microorganismo no puede sintetizar.

Condiciones que deben cumplir los medios de

cultivos
Disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin, ha de contener,
como mnimo,carbono, nitrgeno, azufre,fsforoy sales inorgnicas.
Consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia
aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que
obtendramos medios en estado semislido o slido.Los medios
solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la
capacidad de licuarla.

Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una
atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias,
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.

Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se
deseque el medio.

Luz ambiental

pH

La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos.
PH neutro , aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. la presencia de cidos
o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo
o incluso alterar sus procesos metablicos normales.

Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos
medios.
Autoclave El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)

Temperatura

Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y

43 oC. Otros como los psicrfilos crecen a 0 oC y los temfilos a 80 oC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37
oC, y los saproftos tienen rangos ms amplios.

Utilidad de los medios de cultivo y

sus distintas clasificaciones.

 1. Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patgeno (secrecin

purulenta, orina, rgano, fecales, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.)
2. Estudio morfolgico de las colonias.
3. Conservacin de cepas identificadas (coleccin de cepas microbianas o
cepario).
4. Clasificacin y tipificacin de bacterias por estudio de sus propiedades
bioqumicas en medios diferenciales.
5. Obtencin de toxinas o investigacin de sus caractersticas.
6. Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboracin de productos biolgicos
(vacunas, antgenos, bacterias, toxoides, etc.).

Clasificacin.
Los medios de cultivo pueden clasificarse segn
diferentes criterios, pero los ms importantes son
aquellos que se basan en:
Su consistencia
Su utilizacin
Su composicin
Su origen

1.- por su consistencia.

a)Medios lquidos: Son los que se presentan en este
estado, denominndose por esta razn caldos.
b)Medios slidos: Se preparan a partir de los medios
lquidos, agregndoles un agente gelificante. Los ms
utilizados son la gelatina y el agar. Tiene el
inconveniente de que es hidrolizada por muchas
bacterias, y adems su uso est muy limitado porque
su punto de fusin es bajo (lica a temperatura
ambiente) razn por la que no puede utilizarse para
cultivos a 37C, que es la tempera ptima de
crecimiento para muchos microrganismos.
c)Medios semislidos: Se preparan a partir de los
medios lquidos, agregando a stos un agente
solidifcante en una proporcin menor que para
preparar medios slidos. Uno de sus usos es la
investigacin de la movilidad de las bacterias.

Por su
utilizaci
n

Medios
comunes

Son aquellos
que poseen los
componentes
mnimos para
que pueda
producirse el
crecimiento de
bacterias que
no necesiten
requerimientos
especiales

Medios de
enriqueci
miento

Son aquellos
que, adems de
las sustancias
nutritivas
normales,
incorporan una
serie de factores
indispensables
para el
crecimiento de
microorganismos

Medios
selectivos
.

Son medios
utilizados para
favorecer el
crecimiento de
ciertas
bacterias
contenidas en
una poblacin
polimicrobiana
.

Medios
inhibidor
es

Cuando las
sustancias
aadidas a un
medio
selectivo
impiden
totalmente el
crecimiento de
una poblacin
microbiana, se
denomina
inhibidor.

Medios
diferenciale
s

Se utilizan
para poner en
evidencia
caractersticas
bioqumicas
que ayuden a
diferenciar
gneros o
especies.

Medios de
conservacin

Se utilizan
para conservar
una cepa que,
por diversas
razones nos
interese
mantener.

3. Por su composicin.

a . Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los

ms empleados se preparan a partir de tejidos animales, y
ms raramente de vegetales. Su composicin no es
exactamente definida, y por consiguiente no es
rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos
inconvenientes en condiciones experimentales, donde la
reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente
estos medios dan excelentes resultados y son los ms
empleados.

b. Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su

composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas y
disueltas en agua destilada en proporciones determinadas,
resultando un medio de composicin perfectamente definida.

C .Medios semisintticos: El gran nmero de factores de

crecimiento exigidos para ciertos grmenes hace que la
fabricacin de un medio sinttico para estos grmenes sea
imposible o demasiado cara.

4. Segn su origen.
NATURALES: son los preparados a partir de
sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y
cuya composicin qumica no se conoce
exactamente.
SINTTICOS: son los medios que contienen una
composicin qumica definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.
SEMISINTTICOS: son los sintticos a los que se
les aaden factores de crecimiento bajo una
forma de un extracto orgnico complejo, como
por ejemplo extracto de levadura.

Principales presentaciones

BASICOS

Son aquellos cuya frmula contienen nutrientes necesarios

para el desarrollo de la mayora de los microorganismos
no fastidiosos, entre stos nutrientes tenemos: Infusin
de carne, peptona, agua, sal, etc.Ejemplo:
Calco nutritivo, caldo de peptona, agar nutritivo
inclinado, agar nutritivo de base profunda.

CALDO NUTRITIVO

MEDIO LIQUIDO.

COMPUESTO:
H2O, PEPTONA EXTRACTO DE
CARNE.

CULTIVO:
E. COLI, ESTAFILOCOCOS

Agar nutritivo de base profunda:

Son caldos nutritivos a los

que se les ha agregado Agar
para su solidificacin. Puede
servir para el cultivo y
recuento de los
microorganismos en las
aguas, heces orinas y
cualquier otro producto.

CALDO PEPTONA
MEDIO LIQUIDO.
CULTIVO DE
ENTEROBACTERIAS.
OBSERVAR PRODUCCION :
INDOL
ES UN MEDIO LQUIDO
DIFERENCIAL QUE SE
UTILIZA PARA EL
CULTIVO DE LAS ENTERO
BACTERIAS Y PARA
OBSERVAR LA
PRODUCCIN DE INDOL

ENRIQUECIDO
S
Son los mismos medios de cultivos bsicos a
los que se les ha agregado ciertos nutrientes
como: Vitaminas, protenas y sangre
desfibrinada.
Agar chocolate, agar sangre,Thayer Martn,
Mueller Hinton.

AGAR SANGRE
MEDIO SOLIDO.
CONSTITUIDO:
PROTEINASVITAMINAS Y
SANGRE DE
CONEJO
DESFIBRINADA.
DETERMINA:
TIPOS HEMOLISIS,
( ESTREPTOCOCOS,
ESTAFILOCOCOS)

27

AGAR MULLER
-HINTON
MEDIO SOLIDO.
AISLAMIENTO,
CULTIVO:
(G. NEISSERIA.)
PRUEBAS DE
SENSIBILIDAD
meningococos y
gonococos

AGAR CHOCOLATE
MEDIO SOLIDO.
CULTIVO DE
MICROORGANISMOS

PATOGENOS:
( G.
NEISSERIAS )

AGAR TAYER
-MARTHIN

MEDIO SOLIDO.

AISLAMIENTO:
NEISSERIA (GONORRHOEAE,
MENINGITIDIS).

TRANSPORTE DE MATERIAL
SEMBRADO

MEDIO DE LOEFLER
ALTAMENTE
NUTRITIVO.
CULTIVO,
AISALAMIENTO:
CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE.

CALDO TRIPTOSA
SOYA
AISLAMIENTO, CULTIVO:
ESTREPTOCOCOS,
NEUMOCOCOS,
MENINGOCOCOS,
MICROORGANISMO
PATOGENOS.

AGAR BORDET -GENGOU

MEDIO BASE.
DIAGNOSTICO:
TOS FERINA.
AISLAMIENTO:
BORDETELLA PERTUSSI

DIFERENCIALES
Son aquellos medios que contienen sustancias que son
metabolizadas por las bacterias para formar una
reaccin bioqumica determinada.
Agar TSI Kliger, Agar rea, Agar Citrato.

Agar rea de Christensen:

Es un medio de cultivo diferencial empleado para la investigacin de la
utilizacin de la rea como nica fuente de nitrgeno.

AGAR T.S.I. /
MEDIO SOLIDO.
KLIGER
IDENTIFICAR
BACILOS
ENTERICOS
GRAM-

AGAR CITRATO
MEDIO SOLIDO.
PARA IDENTIFICAR
MICROORGANISMOS
: ENTEROBACTERIAS
, HONGOS

AGAR UREA
MEDIO SOLIDO.
BACTERIAS UTILIZAN
UREA: (FUENTE DE NITROGENO).

ENRIQUECIMIENTO
Son aquellos medios de cultivos a los que se les ha
aadido sustancias inhibitoria, los que dan como
resultado el desarrollo de bacterias pero en un
margen estricto.Ejemplo:
Caldo de Tertrationato, Caldo de Selenito, Thayer
y Martn modificado.

CALDO TETRATIONATO

MEDIO ENRIQUECIDO CON

ADICION DE BILIS DE BUEY.

SELECTIVO CRECIMIENTO DE
SALMONELLA

El VERDE BRILLANTE DE SU
COMPOSICION INHIBE LA FLORA
GRAM+

CALDO SELENITO

MEDIO PARA
IDENTIFICAR :
SAMONELLAS
EN HECES(COPROCULTIVOS).

SELECTIVOS

AGAR MAC CONKEY

MEDIO SOLIDO.

PARA CULTIVOS DE BACTERIAS

GRAM-

UROCULTIVO, COPROCULTIVO.

Agar Mac Conkey:

Es un medio de cultivo
slido que favorece al
crecimiento de bacterias
gramnegativas. Las sales
biliares inhiben el
crecimiento de las
bacterias grampositivas.

AGAR S.S.
MEDIO PARA EL
AISLAMIENTO:
SALMONELAS
SHIGELLAS. EN
(COPROCULTIVO).
INHIBE B. GRAM+
Agar S.S:
Es un medio de cultivo
slido que se lo utiliza
para el desarrollo en
general shigellas.

CALDO THIOGLICOLATO
MEDIO LIQUIDO.
AISLAMIENTO
BACTERIA
ANAEROBIAS
(ESTRICTAS,
FACULTATIVAS),
GERMENES
MICROAEROFILOS.
TEST DE ESTERILIDAD
(CIERTOS
PRODUCTOS).

AGAR CLED
MEDIO NO INHIBIDOR.
RECUENTO DE
COLONIAS.
UROCULTIVO.
PREVIENE DESARROLLO
INVASOR (SWARMING)
DE PROTEUS.

AGAR CLED CON CRECIMIENTO

BACTERIANO

AGAR TCBS
MEDIO SOLIDO.
CULTIVO: VIBRIO
CHOLEREAE .

COMPOSICION:
THIOSULFITO+CITRATO
+
BILIS+SACAROSA

INHIBE OTRAS
ENTEROBACTERIAS.

DISMINUYE
DESARROLLO PROTEUS
ENTEROCOCOS

LOWESTEIN JENSEN

MEDIO SOLIDO.

CULTIVO:
MICOBACTERIAS. (M. TUBERCULOSIS
).

CONSERVACION:

TUBOS HERMETICOS,
REFRIGERADOS.

MEDIO DE HUEVO-PAY

MEDIO SOLIDO.
EMPLEADO PARA EL
CRECIMIENTO DEL
BACILO DIFTERICO.

Medios de cultivo
Especiales
Son aquellos medios que tienen preferencia para el
crecimiento de una bacteria de un grupo de bacteria
EMJHLeptospira, ELEKToxicidad del
bacilo diftrico
, CNK, Agar Noble, Agar Motilidad

MEDIO DE EUGON
EUGON AGAR o EXUBERANTE
AGAR.Es un medio enriquecido muy adecuado
para obtener el desarrollo exuberante de
distintas bacterias de difcil crecimiento,
como
Hemophilus,
Neisseria,
Pasteurella, Brucella y lactobacilos. Es
muy
utilizado
en
bacteriologa
alimenticia para el control de las carnes
y alimentos. Tambin
para la preparacin de antgeno y
vacunas.

TELURITO
MEDIO SOLIDO.
DIFERENCIACION
COLONIAL DE LOS TIPOS
DE BACILO DIFTERICO:

MITIS, GRAVIS E
INTERMEDIUS (EXUDADOS
NASALES, FARINGEOS.)
CONTENIDO
TELURITO+POTASIO
INHIBE FLORA
CONTAMINANTE.

AGAR MOTILIDAD
MEDIO PARA
IDENTIFICAR:
MOTILIDAD
BACTERIAN.

STUART

MEDIO PARA TRANSPORTAR Y CULTIVAR:

FROTIS DE MICROORGANISMOS PATOGENOS

COCOS,BACILOS, ESPIROQUETAS Y OTROS
MICROORGANISMOS