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2016
MS RAPIDO
MS EFICIENTE
Tratamiento antifngico
IMPACTO CLINICO
DIAGNSTICO MICOLGICO
Diagnstico etiolgico frente a un cuadro
clnico sospechoso de micosis .
Sitios no estriles :
Muestras respiratorias ( expectoracin, aspirados traqueales,
cepillados y lavados bronquiales )
orina 2 miccin
lavados gstricos
piel, pelo, uas
heridas operatorias
Cavidad orofarngea , vagina, deposiciones
Examen
microscpico Diagnstico en tiempo real (menos de
directo
10 min )
Un informe rpido al clnico -inicio de
tratamiento.
Observar caractersticas morfolgicas
especficas.
Evidencia de infeccin - cultivo
negativo - Pacientes en tratamiento.
Estructuras fngicas
Hifas septadas hialinas ( 3-4 u) :. Aspergillus, Fusarium,
Paecilomyces
Hifas septadas pigmentadas( 3-4 u):.. Alternaria, Bipolaris
Curvularia
Hifas aseptadas ( 6-10 u) ......................... Zygomycetes
Hifas hialinas , septadas , artroconidios .......... Trichophyton
Esfrulas
.......................... Coccidioides
Levaduras ( blastoconidios )
Levaduras encapsuladas ........................ Cryptococcus
Globosas
brotacin mltiple, base angosta ................... Paracoccidiodes
con base ancha .......................
Blastomyces
brotacin simple, con base angosta..........
Cryptococcus,Histoplasma
Ovoides
4- 7 u..................... Candida
2-3 u ......................Candida, Histoplasma, Sporotrix
levaduras intracelulares......................Histoplasma
levaduras , pseudohifas ................... Candida
artroconidios , blastoconido ,hifas ..................Trichosporon
Montaje
destilada
Observacin al fresco de secrecin vaginal : levaduras
y pseudohifas.
secrecin vaginal
Biopsia cerebral
Material queratinizado .
Efecto clarificador.
No afecta las estructuras fngicas.
KOH : 10-40%
* Tinta parker
3:1
* DMSO - glicerol
LCR
Blancocalcofluor
Tiempo : 1 min
Imposibilidad
sensibilidad.
de
realizar
estudios
de
Limitacin : lento
Velocidad de crecimiento del hongo.
Tiempo
cloramfenicol+ cicloheximida.
* Agar Sabouraud + Brain Heart Infusion ( SABHI ) :
medio rico, hongos dimrficos, agentes de micosis
sistmicas.
* SABHI + sangre de cordero ( 5-10% ) : recuperacin de
Histoplasma capsulatum.
Criterios macro y
micromorfolgicos
Identificacin de levaduras
Caracteristicas micromorfolgicas y
fisiolgicas : asimilacin de azcares y otros
compuestos - 15 y 72 hrs.
Identificacin rpida por sistemas comerciales.
- Medios diferenciales : identificacin por
color y morfologa de las colonias Ej. medios
cromognicos .
- Tcnicas moleculares basadas en el anlis
de la secuencia del ADN .
Candida y diagnstico
......................
pero con otros hongos la
identificacin puede tardar mas de 1 mes
EL ESTUDIO MICOLOGICO NO
CONVENCIONAL CONSTA DE:
Estudio histolgico
Inmunodiagnstico
INMUNODIAGNOSTICO
Numerosos procedimientos serolgicos se han
empleado en el diagnstico de las diferentes
micosis.
Importante : estado inmunolgico del paciente,
en inmunodeprimidos puede existir una baja
respuesta de anticuerpos ------> detecta
antgenos.
Antgenos capsulares, de pared fngica y de
otros componentes especficos para cada hongo.
Paracoccidioidina
Tricofitina
Pronstico
negativa positiva evolucin favorable
positiva negativa indica mal pronstico
Tcnicas serolgicas
ANTIGENO
ANTICUERPO
Antgenos utilizados
Histoplasma capsulatum
metablico (H y M)
Paracoccidioides brasiliensis
Coccidioides immitis
metablico (F)
Aspergillus fumigatus
metablico
Aspergillus flavus
metablico
Aspergillus niger
metablico
Candida
somtico
Lectura de la prueba
Identidad
Identidad parcial
No identidad
Candidiasis
IDD
?
CIEF
Ag
_
Sospecha de candidiasis sistmica (muestras
seriadas)
seroconversin o aumento del nmero de bandas.
xito en la terapia antifngica
Disminucin o desaparicin de bandas
Se deben remover catteres, sondas o vlvulas
contaminadas
Aspergilosis
IDD
T
Ag
Una o ms bandas
de identidad con el
suero control
POSITIVO (100%
especificidad)
Reacciones
cruzadas: 90% de
los casos de
aspergilomas y en
el 70% de las
aspergilosis
broncopulmonar
alrgica
CIEF
Histoplasmosis
CIEF
IDD
H
T
Ag
M (70% de los
pacientes)
Inmunofluorescencia
ELISA
ELISA
WESTERN BLOT
P. brasiliensis
97 Kda (M)
Gp 43
H. capsulatum
Enfermedad
Sensibilidad
Aspergilomas
90%
90%
Coccidioidomicosis
90%
Paracoccidioidomicosis
94%
Histoplasmosis
85%
Deteccin de anticuerpos
C.neoformans: sin utilidad diagnstica
Platelia Candida Ab/Ac/Ak: ELISA detecta
anticuerpos anti-manano en suero.
Resultado positivo: concentracin >10AU/ ml
Resultado negativo : < 5AU /ml
Tiempo: 3 hrs
Deteccin Antgenos
Ltex (LA)
Enzimoinmunoanlisis (EIA)
Anticuerpos fluorescentes (IF)
Pacientes inmunocomprometidos
oncohematolgicos, corticoterapia, trasplantados
Deteccin de antgenos
Antgeno capsular de Cryptococcus
neoformans.
Anticuerpos monoespecficos unidos a partculas
de ltex.
LCR, Suero.
Tiempo: 10-15 min
Sensibilidad 93-100%
Especificidad 93-98%
LECTURA DE RESULTADOS
diluciones
comenzar 1:2
Comenzar 1:128
Candidiasis invasora
Candidiasis
Sensibilidad
Pastorex Candida (LA)
mananos de pared celular 1991
Cand-Tec (LA)
Platelia Candida (EIA) 1999
citoplasmticos (enolasa) Dot
Beta glucan
Especificidad
26%
100%
77%
87%
40%
98 %
72%
100%
84%
87%
Aspergilosis invasora
ELISA detecta galactomanano de Aspergillus en
suero utilizando el anticuerpo monoclonal EBA2.
Reconoce galactomanano de A. fumigatus.A.flavus,
A.niger
Deteccin de antgenos de
Histoplasma capsulatum (EIA)
(orina, LBA, suero y LCR)
Especificidad: 98%
Sensibilidad
Diseminada: Orina 92% suero 82%
HPP aguda: 44-75%
Primoinfeccin: 29-39%
Pulmonar Crnica: 14-21%
Meningitis: 40-67%
Reacciones cruzadas con B.dermatitidis, P. brasiliensis, y P. marneffei.
Histoplasmosis reference laboratory 2001
Utilidad de la serologa en el
diagnstico micolgico
Deteccin de
Anticuerpos Antgenos
Histoplasmosis
Paracoccidioidomicosis
Coccidioidomicosis
Aspergilosis
Candida
Criptococosis
Neumocistosis
SI
SI
SI
SI
SI
NO
NO
SI
NO
NO
SI
SI
SI
NO
Pontn J. RIAM, 2002
BIOLOGA MOLECULAR
DIAGNSTICO
RESISTENCIA
Desafios: MICROARRAY
Basados en la hibridacin de fragmentos de cidos
nucleicos presentes en la muestra clnica con varios de
miles de oligonucletidos fijados en un soporte de vidrio.
Microchips con sondas
especficas de agentes
infecciosos
Pocillos Muestra
Reaccin Computador
Diagnstico directo de varios
agentes simultneamente
Una antigenemia
negativa no descarta
infeccin