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ENZIMAS

Javier Medina Domnguez

Se autoriza la utilizacin de este material con citacin expresa del autor del mismo

ENZIMAS
Son protenas que actan
como catalizadores:
Modificando la
velocidad de la
reaccin que catalizan
Rebajando la energa
de activacin de la
reaccin que regulan.

ENZIMAS
Para que una
reaccin se lleve
a cabo las
molculas deben
alcanzar un
estado energtico
determinado
(energa de
activacin).
Puede
conseguirse esta
energa, de dos
formas:

ENZIMAS
Aumentando la
temperatura.
Sin embargo, las
enzimas se
desnaturalizan a
esa T. Adems,
esa energa debe
proceder de otra
reaccin, lo que
aumenta el gasto
energtico.

ENZIMAS
Con enzimas
Las enzimas
rebajan la
energa de
activacin

ENZIMAS

Sin enzimas

ENZIMAS

Con enzimas

ENZIMAS

Sin enzimas
Con enzimas

ENZIMAS:

PROPIEDADES DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS


EFICACIA DE

LA CATLISIS
ESPECIFICIDAD
REGULACIN
REVERSIBILIDAD

ENZIMAS:

PROPIEDADES DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS


EFICACIA DE

LA CATLISIS

Son los catalizadores ms potentes: actan en


concentraciones muy pequeas
La velocidad de catlisis es muy alta (108-1020 veces
que sin enzimas)
El rendimiento es muy alto
Las condiciones de reaccin son suaves (fisiolgicas)

ENZIMAS:

PROPIEDADES DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS


EFICACIA DE

LA CATLISIS
ESPECIFICIDAD
Puede ser:
Absoluta o de sustrato. (v.g. ureasa)
Relativa o de reaccin
Estereospecificidad (v.g. D-aminooxidasas)
De grupo (v.g. hexoquinasas)
De clase (v.g. estearasas)

ENZIMAS:

PROPIEDADES DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS


EFICACIA DE

LA CATLISIS
ESPECIFICIDAD

ENZIMAS:

PROPIEDADES DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS


EFICACIA DE

LA CATLISIS
ESPECIFICIDAD
REGULACIN
Mediante la cantidad de enzima, regulando la
expresin gnica (transcripcin)
Mediante el control de la actividad enzimtica

ENZIMAS:

PROPIEDADES DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS


EFICACIA DE

LA CATLISIS
ESPECIFICIDAD
REGULACIN
REVERSIBILIDAD
Mecanismos de irreversibilidad:
- Salto energtico grande
- Compartimentacin celular de algn paso, lo que
separa enzima y sustrato

ENZIMAS
Nomenclatura
Nomenclatura

histrica:

SUSTRATO + ACTIVIDAD + SUFIJO(asa)


(v.g. glucoquinasa)

SUSTRATO + SUFIJO(asa)
(v.g. ureasa)

DONADOR + ACEPTOR + ACTIVIDAD + SUFIJO(asa)


(v.g. oxalacetilaminotransferasa)

Nomenclatura

IUB (1972): 6 grupos segn la


reaccin catalizada

ENZIMAS
Nomenclatura
1.

OXIDORREDUCTASAS
Sin transferencia de hidrgenos

Regulan reacciones REDOX


Existen dos tipos esenciales:
Con transferencia de
hidrgenos
Sin transferencia de
hidrgenos

ENZIMAS
Nomenclatura
1.

OXIDORREDUCTASAS

Regulan reacciones REDOX

Con transferencia de hidrgenos

Existen dos tipos esenciales:


Con transferencia de
hidrgenos
Sin transferencia de
hidrgenos

ENZIMAS
Nomenclatura
2.

TRANSFERASAS

Transfieren grupos funcionales

ENZIMAS
Nomenclatura
3.

HIDROLASAS

Rotura de enlaces por medio de


agua

ENZIMAS
Nomenclatura
4.

LIASAS

Rotura o formacin de
molculas sin intervencin de
agua.
Suele producirse adicin a
dobles enlaces: C=C, C=O,
C=N

ENZIMAS
Nomenclatura
5.

ISOMERASAS

Cambio de posicin de grupos


dentro de la molcula

ENZIMAS
Nomenclatura
6.

LIGASAS O SINTETASAS

Formacin de enlaces con


rotura de ATP

ENZIMAS
Mecanismo de actuacin

Formacin del
complejo enzimasustrato

Transformacin
Activacin deldel
complejo
complejoE-S
enzimaen E-P
(enzima-productos)
sustrato

Liberacin de los
productos y de la
enzima

Plsame

ENZIMAS
Cintica enzimtica

Es la concentracin de sustrato a la
que la velocidad de reaccin es la
mitad de la velocidad mxima.
Es una medida de la afinidad de la
enzima por el sustrato:
KM alta AFINIDAD baja

ENZIMAS
Cintica enzimtica

Cmo calcular la
velocidad mxima?

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
pH

Cada enzima tiene su pH ptimo de actuacin

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
pH
T

La velocidad enzimtica aumenta con la T


hasta un valor crtico en el que la protena se
inactiva por desnaturalizacin

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
pH
T
La concentracin salina puede llegar a precipitar
una protena e inactivarla

Cocatalizadores

Activadores e inhibidores

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores
Algunas enzimas requieren la presencia de una molcula no
proteica para la catlisis: son las protenas CONJUGADAS u
HOLOENZIMAS
APOENZIMA: parte proteica
Segn la complejidad de la
porcin no proteica:
Cofactor
Coenzima
Grupo prosttico

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores
GRUPO PROSTTICO

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores
Activadores e Inhibidores

REGULACIN ALOSTRICA

Plsame
La unin no covalente de una
molcula a la enzima, en un
sitio diferente del centro
activo (sitio alostrico)
provoca un cambio
conformacional que modifica
la afinidad de la enzima por el
sustrato.
El regulador alostrico puede
ser activador o inhibidor

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores
Activadores e Inhibidores

REGULACIN ALOSTRICA

Las enzimas alostricas son


grandes, oligomricas y su cintica
no se ajusta a la curva de MichaelisMenten, por presentar
cooperativismo:
La unin del sustrato a un centro
activo favorece la unin de ms
sustratos a los dems centros
activos de las dems subunidades.

Plsame

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores
Activadores e Inhibidores

REGULACIN ALOSTRICA

TIPOS

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Moduladores ambientales
Cocatalizadores
Activadores e Inhibidores

REGULACIN NO ALOSTRICA (ISOSTRICA)

El inhibidor o activador acta sobre el centro activo.


La enzima muestra una cintica de Michaelis-Menten, aunque
alterada respecto de la grfica normal.
Puede ser:
IRREVERSIBLE: si el enzima queda modificado
covalentemente, alterando su estructura terciaria. Su
reversin requiere la accin enzimtica.
REVERSIBLE: La inactivacin no es permanente.

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN IRREVERSIBLE

Ejemplo: zimgenos o proenzimas

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN IRREVERSIBLE
Ejemplo:

compuestos organofosforados:

Actan sobre enzimas sernicas


nicamente sobre la Ser activa
Insecticidas: Parathion, Malathion
Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
Neurogases

DFP:
Diisopropil fluorofosfato
Los animales envenenados
con este gas quedan
paralizados, debido a la
imposibilidad de transmitir
adecuadamente los
impulsos nerviosos.

Ser CH CH2

H3C

OH

Ser CH CH2
H 3C

CH3
CH

P O

CH
H 3C
CH3

CH3
CH

O P O
CH
H3C
CH3

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN IRREVERSIBLE
Ejemplo:

ligandos de coordinacin de

metales:
Cianuro: bloquea el Fe hemnico de la
citocromoxidasa enzima de la cadena
respiratoria-, impidiendo toda modificacin
posterior, por lo que es muy txico
Agentes quelantes (EDTA: tetracetato de
etilendiamina: quelacin del calcio en la
aterosclerosis; eliminacin de metales
pesados (Pb) de aguas, suelos y sangre;
detergente, anticoagulante (captura calcio) e
inactivacin de enzimas que afectan al ADN

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE

La inactivacin no es permanente.
Segn su modo de actuacin puede ser:

Competitiva: se unen al centro activo del enzima


Acompetitiva: se une al complejo E-S
No competitiva: puede unirse a ambos

E+S

E-S

Ic

Iac
Inc

E-P

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE: COMPETITIVA

El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre, impidiendo la


fijacin del substrato.
Los inhibidores compiten con el sustrato por el centro activo,
debido a su similar estructura espacial.
Se revierte su efecto aumentando la concentracin de sustrato

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE: COMPETITIVA

COO-

FAD

FADH2

CH2
CH2
COOSuccinato

SDH

COO-

COO-

COO-

CH

CH2

C O

CH

COO-

CH2

COOFumarato

COO-

Malonato Oxalacetato

Inhibicin de la succinato deshidrogenasa por malonato u oxalacetato

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE: COMPETITIVA


COO-

COO-

CH2
CH2

C O

COOSuccinato
COO

C O

CH2
COO-

CH2
COOOxalacetato

Oxalacetato

Inhibicin de la succinato deshidrogenasa por malonato u oxalacetato

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE: ACOMPETITIVA

El inhibidor se une al complejo E-S, inactivndolo.


La inhibicin acompetitiva es poco frecuente en las reacciones de
un solo sustrato, pero es corriente en las reacciones de dos
sustratos.

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE: NO COMPETITIVA

El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo haga o no el


substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la fijacin del substrato a la
enzima, pero s impide la accin cataltica.
Esta inhibicin se caracteriza por que no se puede revertir el efecto del
inhibidor, aumentando la concentracin del substrato.
Ejemplo : inhibicin de la deshidrogenasa del gliceraldehido-3-fosfato por
la yodo-acetamida:

Enzima-SH + I-CH2 - CONH2

Enzima-S-CH2 - CONH2 + IH

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE:
CINTICA DE LA INHIBICIN

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN REVERSIBLE:
CINTICA DE LA INHIBICIN

Tipo

Vmax

Ic

Iac
Inc

Pendiente KM aparente

=
=

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN MIXTA: SUSTRATOS SUICIDAS


Son inhibidores activados enzimticamente.

Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera


especfica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos.
Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la molcula
en una especie qumica muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola.
Tienen por tanto la especificidad del inhibidor competitivo y la
potencia de los inhibidores irreversibles

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN MIXTA: SUSTRATOS SUICIDAS

E+I

EI

EI*

E + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima


2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I en una especie
altamente reactiva I*
3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola de forma definitiva
al igual que un inhibidor irreversible.

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN MIXTA: SUSTRATOS SUICIDAS


Ejemplo: Sistema de la monoaminooxidasa (MAO) cerebral
Los estados depresivos, en general, estn relacionados con un
descenso en la concentracin de neurotransmisores adrenrgicos
(dopamina, noradrenalina, etc.) en determinadas regiones del
cerebro.
Una de las enzimas encargadas de la degradacin de estos
neurotransmisores es la monoaminooxidasa (EC 1.4.3.4).
Por tanto, la inhibicin de la monoaminooxidasa se emplea como
tratamiento de los estados depresivos. Se han desarrollado muchos
inhibidores suicidas de la MAO

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN MIXTA: SUSTRATOS SUICIDAS


Ejemplo: Sistema de la monoaminooxidasa (MAO) cerebral
HO
HO

Noradrenalina
CHOH CH2 NH2

O2 + H2O

MAO
NH3 + H2O2
HO
HO

CHOH CHO

Dihidroxifenilglicol

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN MIXTA: SUSTRATOS SUICIDAS


Ejemplo: Sistema de la monoaminooxidasa (MAO) cerebral
La MAO es una flavoprotena: lleva como coenzima fundamental
para la catlisis, el FAD. Los inhibidores suicidas de la MAO inactivan
al FAD.

ENZIMAS

Factores que influyen en la actividad enzimtica

INHIBICIN MIXTA: SUSTRATOS SUICIDAS


Ejemplo: Sistema de la monoaminooxidasa (MAO) cerebral
O

H 3C

H 2C

NH
N

Flavina
HC C CH N

CH3

pargilina

CH3

H 3C

Inhibicin suicida de la
MAO mediante Pargilina
E

N+

CH CH

H 3C

CH

H 3C

H 2C

N
R

O
NH
NH

Flavina
INACTIVA

ENZIMAS
Isoenzimas

Es un modo de regulacin que consiste en la existencia de


distintas formas moleculares de una misma enzima que
presentan o muestran especificidad por el mismo sustrato y
realizan la misma funcin.
Su distribucin vara con los tejidos y la localizacin
subcelular, de forma que unas se encuentran en el citoplasma,
otras en las mitocondrias, algunas en cloroplastos, etc.
Se diferencian entre s por su composicin de aminocidos, al
estar codificadas por genes distintos (con un origen evolutivo
comn, por duplicacin gnica)

ENZIMAS
Isoenzimas

La lactato deshidrogenasa cataliza la transformacin de


pirvico a lctico, que se produce en condiciones de anoxia,
dando lugar a una fermentacin a partir de la glucosa.

ENZIMAS
Isoenzimas

Est formada por 5 isoenzimas, con el mismo peso molecular,


con una estructura tetramrica: combinaciones de 2 tipos de
cadenas, M y H.
LDH-1 (H4): en corazn, msculos y eritrocitos.
LDH-2 (H3M): en sistema retculoendotelial y leucocitos.
LDH-3 (H2M2): en pulmones.
LDH-4 (HM3): en riones, placenta y pncreas.
LDH-5 (M4): en hgado y msculo esqueltico.

ENZIMAS
Isoenzimas

ENZIMAS
Isoenzimas

Estas isoenzimas presentan carctersticas cinticas distintas.

KM piruvato baja (afinidad alta) Tejido especializado en el uso

M4 V mx alta

anaerbico de la glucosa con


alta formacin de lactato

KM piruvato alta (afinidad baja) Especializado en el uso

H4

V mx pequea

aerbico del pirvico. Slo se


emplea la ruta anaerbica en
emergencias.

ENZIMAS

Sistemas multienzimticos

Son asociaciones de enzimas que realizan funciones


complementarias, actuando de modo secuencial, catalizando
reacciones consecutivas: el producto de una reaccin es el
sustrato de la siguiente.
La eficacia de la reaccin aumenta, al favorecer el encuentro
del enzima y el sustrato.
Existen dos niveles de asociacin:

Complejos multienzimticos: existe unin covalente entre las


enzimas. Generalmente estas enzimas no funcionan fuera del
complejo. Ej: sintetasa de cidos grasos de levadura (7 enzimas)
Asociacin a membranas. Ej: cadena respiratoria en la
membrana mitocondrial interna.

ENZIMAS

Sistemas multienzimticos
Plsame