OPERACIONES

UNITARIAS EN LOS
BIOPROCESOS
Bolivar Yactayo Billy
Salas Pastor Mario
Mallqui Salazar

FILTRACIN

FILTRACIN?

Es una Operacin Unitaria donde, las partculas slidas se separan de una mezcla
fluido-slido forzando el fluido a travs de un pao de que acta como medio de
filtrante

Y QU SUCEDE?

Como resultado, los slidos son retenido por el medio filtrante y se obtiene el
filtrado, que es una solucin clara sin partculas slidas. Las partculas slidas
depositadas en el filtro forman una capa, llamadas torta de filtracin.

CARACTERSTICAS

Los slidos depositados crean resistencia que reduce el flujo de filtro.

La profundidad de la torta de filtro aumenta gradualmente a medida que se

retienen ms slidos, creando una resistencia.

Existencia de una presin diferencial, llamada cada de Presin

Facilidad de filtracin depende de las propiedades de partculas y de fluido

de filtracin.

Tomemos en cuenta que:

Los caldos de fermentacin son incomodos y difcil de filtrar

Porqu?
Debido al comportamiento no newtoniano del caldo
OBSTRUCCIN

Cuando los poros del filtro estn obstruidas por cuerpos

celulares; se crea ms presin y cae gradualmente la tasa de
filtracin.
Como lo prevengo?
Los caldos de fermentacin pueden ser pre-tratados para
mejorar las caractersticas de filtracin.

Calefaccin: desnaturalizar protenas mejora la filtrabilidad

de los caldos. Ejm Penicilina.

Coagulacin: los coloides en partculas ms densas, ms

grandes, que son ms fciles de filtrar.

EQUIPOS:

Filtros de Placas:

- Sistema Discontinuo

Filtro de Tambor vaco Rotativo:

Sistema Continuo

TEORA DE FILTRACIN

Como Ingenieros nuestra prioridad es hallar la velocidad a la cual se efectuar la

filtracin de determinada solucin para un sistema de filtrado.

Supongamos que el flujo es laminar a travs de la torta de filtro.

La tasa de filtracin (como la velocidad a la que se recoge filtrado lquido) est

dada por la ecuacin:

Donde: A: es el rea de filtro,

Vf :volumen de filtrado,
t : tiempo de filtracin,
P es la cada de presin a travs del filtro,
c es la viscosidad del fluido,
W es la masa de slidos en la torta de filtracin.
rm es la resistencia a los medios de filtro
es la resistencia de la torta especfica media.

W se define como:

Donde:
m: relacin de masa de torta hmeda sobre la masa de torta seca
w : fraccin de masa slida.
Si la torta de filtro es incompresible, es constante; para torta
compresible (comn en los caldos de cultivos) se define como:
Donde:
S : es la compresibilidad de la torta,
: constante, dependiendo del tamao de las partculas en la torta.
=0,
incompresible
S
=1,
compresible

Para la integracin conveniente, reescritura (7.3.1.1) en su forma

recproca:

La separacin de variables se usa con integraciones adecuadas, que

se traducen en las siguientes ecuaciones:

El uso de una condicin inicial para el clculo para la definicin de

constante de integracin en t=0, Vf=0,


Ahora
el (7.3.1.7) es lineal como contra el modelo linealizando es
(y=k1x+k2):

Donde,

En general, los micelios de hongos se filtran de forma relativamente fcil,

porque la torta de filtro de micelio tiene una porosidad grande.
Las levaduras y bacterias son mucho ms difciles de manejar debido a su
pequeo tamao

Regmenes de Filtracin

Filtracin a presin constante:

Se forma una torta apenas sensible a la presin

El lquido turbio llega al filtro desde el primer momento con una

presin que se ha de mantener durante toda la operacin.

velocidad de filtracin se va a reducir paulatinamente

Filtracin a volumen constante:

La torta recogida est constituida , por sustancias sensibles a la

presin.

Se comienza a filtrar a pequea presin y, a medida que va

aumentando el espesor de la torta se va elevando la presin para
mantener constante el volumen de filtrado

CENTRIFUGACIN

La centrifugacin se utiliza para :

Separar clulas de los caldos

Recoger desechos

Eliminar precipitados

Clarificar soluciones

Basndose en la diferencia de densidades cuando una fuerza mayor que la

gravedad se ha aplicado, como por ejemplo las fuerzas centrfugas.
La velocidad de la partcula se correlaciona con velocidad de sedimentacin
obstaculizada (uh), la velocidad de la partcula (u o) y la fraccin de volumen de
las partculas (p).
La correlacin es:

Las relaciones empricas para , para diferentes p son:

TEORA DE LA CENTRIFUGACIN

La velocidad de la partcula en una centrfuga en particular se compara con la velocidad de

sedimentacin que se produce bajo la influencia de la gravedad.

La velocidad mxima durante la sedimentacin por gravedad de una pequea partcula, est dada
por la ley de Stokes:

Donde:
g : velocidad de sedimentacin por gravedad
p : densidad de la partcula
f : densidad del fluido
: viscosidad del fluido
Dp : dimetro de la partcula slida
g :aceleracin gravitacional.

En (7.4.1.1) la fuerza centrfuga se implementa para obtener la velocidad

terminal en la centrfuga:

Donde:
c: velocidad de las partculas en la centrfuga
w: velocidad angular de la taza en rad / s
r : radio de la taza o de centrfuga de tambor.
La relacin de la velocidad en la centrfuga a la velocidad bajo la gravedad
(c / g) se llama el efecto de centrifugado o de g-nmero:

La fuerza desarrollada en una centrfuga es Z veces la fuerza de gravedad y se

expresa a menudo como tantas g-fuerzas.

centrifugadoras industriales tienen factores Z de 300 a 16000.

Las

En una pequea centrfuga de laboratorio el Z puede ser de hasta 500000

La velocidad de las partculas en una centrfuga dada se puede aumentar

mediante:

aumento de la centrfuga la velocidad angular (w)

aumentando el dimetro de partcula (D p)

aumento de las diferencias de densidad entre las partculas y el

lquido

disminucin de la viscosidad de suspensin ()

El rendimiento de centrifugadoras de diferente tamao se puede comparar

mediante el uso de un parmetro conocido como el factor sigma (.

Para una centrfuga continua

Donde:
Q :caudal volumtrico
g :velocidad terminal de las partculas en un campo gravitatorio.

Para dos centrifugadoras con velocidades iguales de partculas, el desempeo de su eficacia est

relacionada por su velocidad de flujo:

El factor sigma depende de diseo de la centrifugadora, para una centrifugadora de disco de pila:

(se define como:

Donde:
w: velocidad angular en rad/s,
N: nmero de discos en las pilas,
r2: radio exterior del disco,
r1: radio interior del disco,
: mitad del ngulo de cono del disco .

Adsorcin

En general, la adsorcin es un fenmeno de superficie, donde el gas o el lquido se concentran en

la superficie de partculas slidas o interfaces de fluido.

Intercambio Inico
Los lechos de adsorcin de carbn activado para la purificacin de cido ctrico, y la
adsorcin de productos qumicos orgnicos de carbn o polmeros porosos, son buenos
ejemplos de los sistemas de adsorcin de intercambio inico.

El modelo de de la adsorcin isoterma de Langmuir.

se basa en el modelo lineal de la siguiente ecuacin:

C* es la concentracin de equilibrio (kg de soluto /

kg de slidos) y CASM es el mximo carga de
adsorbato.

Isoterma de adsorcin de Freundlich

donde kF y n son constantes en base a las

caractersticas del sistema de adsorcin particular.
Si adsorcin es favorable, el valor de n es mayor
que 1. Para n menor de 1, el proceso de adsorcin
no es favorable.

La adsorcin en lecho fijo

La adsorcin de lecho fijo puede darnos una zona de adsorcin ms alta por unidad de volumen
que cualquier otro tipo de adsorbente. El punto de saturacin del lecho se llama el punto de
ruptura. Al conocer este punto se puede determinar horarios de operacin. En el diseo de
adsorbedores de lecho fijo, la cantidad de resina y el tiempo requerido para la adsorcin de una
cantidad dada de soluto debe ser estimada.

asa global de transferencia de masa de lquido a la superficie interna est dada por :

donde C * es la concentracin de "A" en el equilibrio, y la funcin de vaco se define como un

volumen fraccional, que es la relacin del volumen de espacio vaco en el lecho y el volumen
total s = (VT - VS) / VT. VT es el volumen total y VS el volumen de resina en el lecho de relleno

Cromatografia
La cromatografa es un procedimiento de separacin para la resolucin de mezclas y el
aislamiento de componentes. La base de cromatografa es la migracin diferencial, y el retardo
selectivo de molculas de soluto durante el paso a travs del lecho de partculas de resina

Tipos de cromatografa
cromatografa de adsorcin
cromatografa de reparto
cromatografa de intercambio inico tal como carboximetil celulosa
(CMC), agarosa y / o dextrinas
cromatografa en gel o cromatografa de tamiz molecular tales como
geles de poliacrilamida
Cromatografa de afinidad, que es la unin de biomolculas con el
lecho matriz, a menudo utilizado para anticuerpos y antgenos

Principio de la cromatografa

La base de la cromatografa es en la migracin diferencial de los

productos qumicos inyectados en una columna. El fluido portador lleva
los solutos a travs del lecho utilizado para la elucin (fase mvil). La
cama es la fase estacionaria. Sobre la base de la movilidad, los
detectores en tiempo de retencin de identificar las molculas rpidos y
lentos. Sobre la base de las normas internas o externas con concentracin
definida, todas las molculas desconocidas se calculan en un mtodo
desarrollado por el software. Columnas de GC se instalan en un horno que
opera a una temperatura especificada. Un diagrama de un horno con
columna de GC se muestra en la siguiente.

Cromatografia de afinidad

Donde
k se conoce como la
capacidad de la columna,
Ve el volumen de disolvente
para eluir el lecho se define
con Ve;
Vo es el volumen vaco, el
volumen libre, fuera de las
partculas del lecho;

Cromatografa de adsorcin
En la cromatografa de adsorcin, el lecho tiene caractersticas especiales para adsorber los
solutos. Los lechos recomendados para cromatografa de adsorcin son de gel de slice,
almina y carbn vegetal.
La fuerza con que es adsorbido un componente depende de la polaridad de este, de la actividad del adsorbente y de
la polaridad de la fase mvil
Es una tcnica que est particularmente bien adaptada para la separacin de compuestos de
polaridad baja y media.

Cromatografia en gel
La cromatografa de filtracin en gel es una
tcnica que permite separar molculas en
funcin de su tamao molecular. La capacidad
separadora reside fundamentalmente en el gel
cuya matriz consta de un gran nmero de
esferas porosas microscpicas.

En el interior de la columna se distinguen los siguientes volmenes

Principio de separacin

Ejemplo
La cromatografa en gel se utiliza para la separacin de la hormona. Una columna de
cromatografa de gel de escala de planta piloto lleno de resina Sephacryl se utiliza
para separar dos hormonas, A y B. La columna es de 5 cm de dimetro y 30 cm de
altura; Vo = 1,9 10-4 m3, Vr = 3 10-3 m3 / kg Sephacryl seca, g = 1,25 103
kg / m3. Los coeficientes de reparto son kPa = 0,38 y KPB = 0,15. Si el caudal de
elucin es de 0,7 l / h, cul es el tiempo de retencin para cada hormona?

Solucin

SEDIMENTACION
Cuando las clulas tienen una alta tendencia a agregarse de cerca
(coagular) o para formar flculos multicelulares con la ayuda de
cationes polivalentes o polmeros extracelulares, la recuperacin de la
biomasa celular llega a ser simple y fcilmente aplicable por el proceso
de sedimentacin.
Dicha agregacin ofrece corrientes de recirculacin de clulas en el
tratamiento de lodos de aguas residuales de activacin; y varias cepas
de levadura altamente floculantes se utilizan en la elaboracin de
cerveza y la produccin de protenas de una sola clula. De hecho,
tenemos que extraer clulas del caldo de fermentacin, por lo que la
sedimentacin se considera como un mtodo de procesamiento
descendente o corriente abajo.
Alumbre, cal y polielectrolitos son comnmente utilizados para crear
macro-flculos.

Hay varias coagulantes naturales

y qumicos utilizados para la
agregacin
de
clulas
suspendidas en bioprocesos.
Figura 5 muestra que las clulas
se eliminan del caldo de
fermentacin y el lodo de
coagulantes con biomasa se
asienta en forma de lodo. La
solucin clara se analiz para
determinar que se necesita la
actividad
enzimtica
y
purificacin adicional proceso
para la recuperacin de la
enzima.

Es ideal para utilizar un tanque de sedimentacin natural para tener

una solucin clara; podemos generar bio-flculos en que se establecen
la biomasa ms rpido. La figura 7 muestra las partculas slidas en
cada libre en un fluido. Cuando las clulas tienen una alta tendencia
a agregarse, con la ayuda de cationes polivalentes, la recuperacin de
la biomasa celular se hace posible.

La velocidad de sedimentacin se define por:

Donde m es una constante emprica en el intervalo de 1.7 a 2.6.

Una vez que la concentracin de clulas alcanza un valor grande,
Cmax, una mayor concentracin se produce a una velocidad
insignificante como se ve en un proceso de lodos activados.

FLOTACIN
La flotacin es otro mtodo de retirar (clulas) slidos a partir caldo de
fermentacin, utilizando burbujas de aire para flotar protena.
Podemos utilizar diferentes tipos de dispositivos de alto esfuerzo
cortante para obtener soluciones homogneas para las enzimas
intracelulares liberadoras. La figura 8 muestra varios tipos de impulsor
para la homogeneizacin.

fig. 8 Varias formas de impulsor

Tambin se utilizan mtodos no mecnicos para romper la pared

celular y liberar enzimas intracelulares o protenas. A continuacin se
enumeran varios mtodos que fracturan las paredes celulares y liberan
contenido de clulas:
Choque osmtico
Congelacin
Solvente
Detergentes
Sobre la base de las fuerzas de corte: homogeneizador de alta
presin
La lisis de las clulas de los productos intracelulares
Pared de clulas lisadas con la extraccin de disolvente orgnico

EXTRACCION SOLVENTE
Muchos antibiticos tienen una excelente solubilidad en disolventes
orgnicos y son inmiscibles con agua. La extraccin de mltiples
etapas separa la fase acuosa de la fase orgnica. La extraccin
puede proporcionar productos concentrados y purificados.
Un caldo tpico penicilina contiene 20 a 35 mg / l de antibitico. La
filtracin se utiliza para eliminar la biomasa del micelio del caldo
de fermentacin. La filtracin puede ser sometida a un filtrado
polmero ayudado. Se requiere la neutralizacin de la penicilina a
pH 2-3. Acetato de amilo o acetato de butilo se usa como un
disolvente orgnico para eliminar la mayor parte del producto del
caldo de fermentacin. Por ltimo, la penicilina es retirada como
penicilina de sodio y se precipit mediante una mezcla butanolagua. La extraccin de la penicilina del caldo de fermentacin se
practica normalmente utilizando disolventes orgnicos tales como
acetato de butilo, acetato de amilo metil isobutil cetona y metil
etil cetona (MEK).


Cuando
biomolculas y fragmentos de clulas se distribuyen en la
fase acuosa, una fase contiene fragmentos de la protena y la
clula se limita a la otra fase. La fase extrada se va a otra unidad
para la precipitacin o cristalizacin. El coeficiente de reparto (K =
CAU / CAL) es constante, donde CAU es la concentracin de equilibrio
del componente "A" en la fase superior y C AL es la concentracin de
equilibrio de "A" en la fase inferior. Si , el componente "A" favorece
la fase superior; si , el componente "A" favorece la fase inferior.
Para la separacin efectiva en una sola etapa de extraccin, se
requiere , para un pequeo k, tambin se requiere un gran
volumen de soluto. El rendimiento se define como la relacin
soluto extrado sobre la cantidad original de soluto en la
alimentacin:

Donde VO es el volumen inicial, Vu es el volumen de la fase

superior, y VL es el volumen de la fase inferior.

Recuperacin del producto por Extraccin lquido-lquido

La extraccin con disolventes es muy popular para la recuperacin de
productos de fermentacin descendente. Los antibiticos se disuelven
en un disolvente orgnico, que puede ser precipitado mediante la
conversin de antibitico por la forma de sal y que lo separa de los
disolventes orgnicos. Alcohol simple (ROH, CH3OH, C2H5OH), propanol,
butanol y cetonas se utilizan en las industrias farmacuticas. Un
embudo de separacin sencilla para mostrar que las dos fases estn
claramente separado se muestra en la Figura 10. Dos etapas
secuenciales de extraccin con disolvente nuevo se muestran en la
Figura 11.

Proceso de columna de extraccin continua, disco rotatorio

contactores
Los disolventes orgnicos se utilizan para extraer los antibiticos. Las
caractersticas de los antibiticos y de productos de procesos de
extraccin se resumen a continuacin:
inmiscibles con agua
extraccin multietapa
purificacin, proporciona productos altamente
concentrados
Etapas del proceso de extraccin utilizando caldo de fermentacin para la
recuperacin del producto se enumeran a continuacin:
20-35 g / l de antibiticos
filtracin: para eliminar los micelios con adicin de polmero para
obtener filtrado transparente
neutralizacin: penicilina, pH aproximadamente 2-3
extraccin con disolvente: el uso de disolvente adecuado tal como
acetato de amilo, una solucin de sal de penicilina
es obtenido
precipitacin de antibiticos se realiza con acetato de butilo, una
cetona de isobutilo e iones minerales tales como Na +.
cristalizacin: producto slido puede ser fcilmente filtrada

La eritromicina se extrae mediante un disolvente orgnico tal como

acetato de pentilo. Del mismo modo, los esteroides, la vitamina B12, la
morfina y la codena se extraen con disolventes orgnicos.
Se utilizan columnas de extraccin en contracorriente. La figura 12
muestra la columna de extraccin a contra corriente con un diagrama
ternario de balance de materiales y la curva de equilibrio.

 constante de equilibrio se define por K, , y el coeficiente de porcin

La
tambin se define por K como una relacin de C AU / CAL que es constante.
Con base en el valor de K, extracciones simples o mltiples etapas se
realizan para hacer un trabajo perfecto en bioseparacin. Otro parmetro
utilizado para caracterizar la particin de dos fases es el factor de
purificacin, que se define como

, donde se muestra el producto en la fase inferior y, donde particiones

producto hasta la fase superior. Cuando la extraccin de una sola etapa no
da suficiente recuperacin, la extraccin repetida puede llevar a cabo en
una cadena o en cascada de unidades de contacto y de separacin.

Ejemplo 4
clulas microbianas se separan de un caldo de cultivo a una
Las
velocidad de flujo de . Suponga las clulas son esfricas con un
dimetro promedio de . Seleccione una centrfuga que puede realizar
esta separacin.
Teniendo en cuenta los datos: , a 25 C; y la viscosidad del agua es 0.9 x 103
N.S/m2.

Solucin

Ejemplo 5
La recuperacin de clulas microbianas se lleva a cabo en una centrfuga
de disco pila continua. La centrfuga se hace funcionar a 5000 rpm para
la separacin de la levadura de panadera. A una velocidad de
alimentacin de 60 L / min, 50% de las clulas se recuperan. A velocidad
constante, la recuperacin slida es inversamente proporcional a la
velocidad de flujo.
Qu tasa de flujo se requiere para recuperar el 90% de las clulas si
la velocidad de centrifugacin se fija en 5000 rpm?
Qu velocidad de funcionamiento se requiere para recuperar el 90%
de las clulas si la velocidad de flujo en la centrfuga se mantiene a
60 L/ min?
Solucin

Ejemplo 6: Utilizando la enzima de recuperacin acuosa de Extraccin

Extractor
de recuperacin de la enzima es un proceso comn. Mezcla de
glicol-dextrano de polietileno se utiliza para recuperar amilasa de caldo
de fermentacin. Teniendo en cuenta un coeficiente de particin de
4,2, se calcula la mxima recuperacin de la enzima cuando

Solucin