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NUTRICIN Y

CULTIVO DE
MICROORGANISMO
Macronutrientes, micronutrientes y factores de
crecimiento.
S
Medios de cultivo. Tcnica Aseptica.

DRA. FLOR TERESA


GARCA HUAMN
Dra. Flor Teresa Garca Huamn

Una caracterstica de las clulas es su capacidad


para llevar a cabo reacciones qumicas y organizar
sus molculas para formar estructuras especficas.
La expresin final de esta organizacin es el
crecimiento(reproduccin).
Antes que una clula se divida, deben ocurrir
muchas reacciones qumicas en la clula; estas
reacciones se denominan metabolismo.

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Las reacciones metablicas o bien


liberan energa o consumen energa.
Reacciones Catablicas: Liberan
energa.
Reacciones anablicas: Consumen
energa

En la clula ocurren varios tipos de


reacciones anablicas y catablicas.
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NUTRICIN MICROBIANA
Las
clulas
estn
compuestas
fundamentalmente de macromolculas y agua,
y que las macromolculas se componen de
unidades
ms
pequeas
denominados
monmeros.
La nutricin microbiana consiste en suministrar
a las clulas los ingredientes qumicos que
necesitan para hacer monmeros.
Estos compuestos qumicos son los nutrientes.
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Diferentes organismos necesitan diferentes tipos de


nutrientes y a menudo los requerimientos son especficos.
Adems, no todos los nutrientes se requieren en las mismas
cantidades; algunos llamados, MACRONUTRIENTES, se
necesitan en grandes cantidades; mientras que otros
llamados MICRONUTRIENTES se requieren en menores
cantidades, y a veces slo en cantidades trazas

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MACRONUTRIENTES
CARBONO Y NITROGENO:
Muchos procariontes necesitan algn tipo de compuesto
orgnico como fuente de carbono. Las bacterias pueden
asimilar varios compuestos orgnicos carbonatados y
usarlos para hacer nuevo material celular. Los
aminocidos, los cidos grasos, los cidos orgnicos, los
azcares, las bases nitrogenadas, los compuestos
aromticos y un sinfn de compuestos orgnicos de otro
tipo pueden ser usados por una u otra bacteria.
Algunos procariotas son auttrofos, capaces de construir
todas sus estructuras orgnicas a partir del dixido de
carbono (CO2) con la energa obtenida de la luz o
compuestos inorgnicos.
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En peso seco, una clula tpica contiene un 50%


de carbono; el carbono es el principal elemento de
todas las clases de macromolculas.

Despus del carbono el siguiente elemento


ms abundantes en la clula es el nitrgeno.
En una bacteria tpica alrededor del 12% de
su peso seco es nitrgeno, este elemento es
importante en las protenas, en los cidos
nucleicos y en otros constituyentes celulares.
En la naturaleza, el nitrgeno se presenta en
forma inorgnica y orgnica.

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Sin embargo, la mayor parte del nitrgeno natural


disponible est en forma inorgnica, como
amoniaco(NH3), nitratos (NO3-) o N2. La mayora de
las bacterias son capaces de usar amoniaco como
nica fuente de nitrgeno, y otras muchas pueden
usar nitratos. El nitrgeno gaseoso N2 puede ser
usado como fuente de nitrgeno por algunas
bacterias, las bacterias fijadoras de nitrgeno.

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OTROS MACRONUTRIENTES: P, S, K, Mg, Ca, Na.


El fsforo se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos
orgnicos e inorgnicos, y la clula lo necesita
fundamentalmente para la sntesis de cidos nucleicos y
fosfolpidos.
El azufre se requiere por que es un componente estructural
de los aminocidos cistena y metionina y porque se
presenta en ciertas vitaminas, como la tiamina, la biotina y
el cido lipoico, as como en la coenzima A.
El azufre sufre una serie de transformaciones qumicas en la
naturaleza, muchas de las cuales son llevadas a cabo
exclusivamente por microorganismos y es utilizado por ellos
en varias formas qumicas. La mayora del azufre celular
procede de fuentes inorgnicas, ya sean sulfatos (SO 4) o
sulfuros (HS-).
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El POTASIO es necesario en todos los organismos. Una gran


diversidad de enzimas lo requieren especficamente como
por ejemplo algunas implicadas en la sntesis de protenas.
El MAGNESIO funciona como estabilizador de los
ribosomas, las membranas celulares y los cidos nucleicos,
y tambin se necesita para la actividad de muchas
enzimas.
El CALCIO (que no es un nutriente esencial para el
crecimiento de muchos microorganismos) ayuda a
estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una funcin
importante en la termo resistencia de las endosporas.
.

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El SODIO es requerido por algunos microorganismos,


aunque no todos, y su necesidad suele ser un reflejo
del hbitat del microorganismo. Por ejemplo, el agua
de mar tiene un elevado contenido de sodio y los
microorganismos marinos normalmente lo requieren
para su crecimiento; en cambio, otras especies muy
relacionadas, pero de agua dulce, crecen bien en
ausencia
de
este
elemento.

El HIERRO es fundamental en la respiracin celular


y es tambin un elemento clave para los citocromos
y para las protenas que contienen hierro y azufre
implicadas en el transporte de electrones.
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En condiciones anaerbicas, el hierro se encuentra


por lo general en el estado de oxidacin +2 y es
soluble, sin embargo, bajo condiciones aerbicas
suele estar en el estado de oxidacin +3 y forma
varios minerales insolubles. Para obtener hierro de
tales minerales, las clulas las producen agentes
quelantes de hierro llamados siderforos que
solubilizan el hierro y lo transportan dentro de la
clula.
Un grupo importante de siderforos derivan del cido
hidroxmico y quelan el hierro frrico (Fe +3) fuertemente.
Una vez que el complejo hierro-hidroxamato pasa a la
clula, el hierro se libera y el hidroximato puede salir y
ser reutilizado de nuevo en el transporte del hierro.
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Las bacterias como Escherichia coli y Salmonella


typhimurium,
producen
siderforos
fenlicos,
estructuralmente complejos llamados enterobactinas.
Estos siderforos derivan del compuesto aromtico
catecol y tienen una elevada afinidad de unin de
hierro. Sin tales agentes quelante de hierro muchas
bacterias seran incapaces de iniciar la infeccin
debido a la limitacin del hierro.

En las agua marinas, el hierro es prcticamente


indetectable (las aguas ocenicas superficiales
contienen tpicamente slo unos cuanto picogramos
de hierro por mililitro) y se han encontrado
bacterias marinas que producen siderforos
estructuralmente complejos capaces de secuestrar
el hierro en concentraciones
muy bajas.
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al Fe+3 y una regin lipdica que se asocia con la


membrana
celular.
Compuestos como la aquachelina unen hierro, se
agregan en micelas y luego transportan el hierro a
la
clula.
Algunos procariotas pueden crecer en ausencia
total
de
hierro.
Por ejemplo, las bacterias Lactobacillus plantarum y
Borrelia burgdorferii, no contienen hierro. El
manganeso sustituye en estas bacterias al hierro
como componente metlico de las enzimas que
normalmente contienen Fe2+

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Mecanismos de captacin de fierro


El hierro es un factor importante para el crecimiento de
la mayora de las bacterias. El mejor mecanismo por
medio del cual las bacterias captan fierro son los
siderforos, los cuales son compuestos de bajo peso
molecular que quelan (atrapan) fierro con alta afinidad.
Existen tres tipos principales de siderforos: catecoles,
hidroxamatos y un tercero que es una combinacin de
ambos.

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Los siderforos son producidos por la bacteria y


excretados al medio en el cual se unen al fierro y el
complejo siderforo-fierro se une a receptores para
siderforo en la superficie bacteriana, una vez que se ha
internalizado el complejo siderforo-fierro, ste es roto
para que libere el fierro en el interior de la bacteria.
Algunas bacterias no solo producen sus propios
siderforos sino tambin producen receptores capaces de
unir siderforos producidos por otras bacterias.

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MICRONUTRIENTES (Elementos traza)


Aunque los micronutrientes se requieren en muy
pequeas cantidades son tan importantes para el
funcionamiento celular como los macronutrientes.
Los micronutrientes son metales, muchos de los
cuales tienen una funcin estructural en varias
enzimas (los catalizadores de las clulas).

Debido a que la necesidad de estos elementos traza


es muy pequea en cuanto a su concentracin, con
frecuencia no es necesario aadirlos a los medios de
cultivo para cultivar microorganismos en el
laboratorio.
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No obstante, si un medio de cultivo contiene


compuestos muy puros, disuelto en agua destilada
de elevada pureza, puede darse una deficiencia en
algn elemento traza. En tales casos, se aade al
medio una pequea cantidad de una solucin de
metales traza a fin de suministrar los metales
necesarios.

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FACTORES DE CRECIMIENTO
Los factores de crecimiento son compuestos
orgnicos que, como los micronutrientes, se
necesitan en muy pequeas cantidades y slo por
algunas clulas. Los factores de crecimiento son
vitaminas, aminocidos, purinas, pirimidinas.
Aunque la mayora de los microorganismos son
capaces de sintetizar estos compuestos, en algunos
casos es necesario suministrarlos en el medio de
cultivo.

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Las vitaminas son los factores de crecimiento que se


necesitan con mayor frecuencia. Muchas vitaminas
funcionan formando parte de coenzimas. La mayor parte
de los microorganismos son capaces de sintetizar todos
los componentes de sus coenzimas, pero algunos no lo
son y necesitan que se les suministren ciertas partes de
estas
coenzimas
en
forma
de
vitaminas.

Las bacterias lcticas, tales como los gneros


Streptococcus, Lactobacillus, Leuconostoc y otros,
destacan por sus requerimientos vitamnicos complejos,
mucho ms amplios que los humanos. Las principales
vitaminas requeridas por los microorganismos son
tiamina,
biotina
y
piridoxina

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MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo son sustancias nutritivas que
se usan en el laboratorio para el cultivo de los
microorganismos.
En microbiologa, se usan dos tipos generales de
medios de cultivo:

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Los medios definidos se preparan aadiendo


cantidades precisas de compuestos orgnicos o
inorgnicos purificados a un volumen en agua
destilada. Por tanto se sabe la composicin qumica
exacta de un medio definido.

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Los medios complejos pueden ser entonces adecuados


o incluso ventajosos por varias razones. A menudo, los
medios complejo se emplean hidrolizados de casena,
carne, soya, levaduras u otras sustancias muy nutritivas
(pero sin embargo , no definidas qumicamente). Tales
hidrolizados se estn disponibles comercialmente en
forma de polvo y pueden ser pesados con facilidad y
disueltos en agua destilada para preparar un medio.
No obstante una limitacin importante al usar un
medio complejo es que no se puede controlar su
composicin nutritiva exacta.

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CULTIVO DE MICROORGANISMOS EN EL LABORATORIO

Una vez que ha sido preparado un medio de cultivo,


puede ser inoculado (es decir se le aaden
microorganismos) y a continuacin incubados en
condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano.
En general, se tratar del crecimiento de un cultivo
axnico o puro, esto es, de un cultivo que contiene slo
un nico tipo de microorganismo.

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Para obtener y mantener un cultivo axnico o puro


es esencial evitar la entrada en l de otros
microorganismos. Los microorganismos no deseados
llamados contaminantes, son muy ubicuos, por lo
que se han diseado tcnicas microbiolgicas para
evitarlos.

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Un mtodo importante para obtener cultivos axnicos


o puros y para asegurar la pureza de un cultivo es el
uso de medios slidos en placas petri.

Los medios de cultivo se preparan con frecuencia en


forma semislida o slida mediante la adicin al
medio lquido de un agente solidificante. Los medios
slidos inmovilizan a las clulas, permitindoles
crecer y formar masas aisladas visibles llamadas
colonias.
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Las colonias bacterianas pueden ser de forma y tamao


variable dependiendo del organismo, las condiciones de
cultivo, el suministro de nutrientes (como la cantidad
de oxgeno presente) y otros parmetros fisiolgicos.

Algunas bacterias producen pigmentos que dan color a


las colonias.
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Independientemente, de su posible pigmentacin,


las colonias permiten reconocer la pureza del
cultivo; las placas que contengan ms de un tipo
de colonia no fueron sembradas de un cultivo
axnico o puro.

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Los medios slidos se preparan igual que los


lquidos salvo que, antes de esterilizar los
medios, se les aade agar como agente
gelificante, normalmente 1,5%. El agar se
funde durante el proceso de esterilizacin y el
medio fundido se vierte sobre las placas petri
y se deja que solidifique antes de usarse.

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TCNICA ASPTICA
Dado que los microorganismos son ubcuos , los
medios de cultivo deben ser esterilizados antes
de usarse. Para la mayora de los medios de
cultivo esto se realiza por calor, habitualmente
mediante calor hmedo en un gran recipiente a
presin llamado autoclave.

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Una vez preparado un medio de cultivo estril, puede


recibir un inculo de un cultivo puro y cultivarlo
nuevamente. Esto requiere el uso de la tcnica asptica.

La tcnica asptica consiste en una serie de procedimientos


que evitan la contaminacin durante la manipulacin de los
cultivos y los medios de cultivo estriles.
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El problema ms comn es la contaminacin ambiental a


travs del aire; ya que ste siempre contiene polvo en
suspensin que generalmente lleva una comunidad de
microorganismos. Cuando las placas o tubos se abren deben
manejarse de tal modo que los contaminantes del aire no
penetren.

La transferencia asptica de un cultivo desde un tubo con medio


a otro, se realiza habitualmente con el asa bacteriolgica
previamente esterilizada a la llama del mechero.
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Los cultivos en los que ha habido crecimiento se


pueden transferir luego a la superficie de placas con
agar, donde se desarrollarn colonias como resultado
del crecimiento y divisin de las clulas aisladas que
han sido sembrados.

La siembra y resiembra por extensin de una colonia


aislada es un mtodo idneo para obtener cultivos
axnicos o puros a partir de mezclas complejas que
contienen muchos organismos diferentes.
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Analizar:
Qu significa la palabra estril?.
Qu ocurrira si los medios de cultivo no se
esterilizaran despus de su preparacin?
Por qu es necesaria la tcnica asptica en la
obtencin de cultivos axnicos o puros en el
laboratorio?

Referencia bibliogrfica:
Madigan, M.; J. Martinko; J. Parker. 2003. Biologa de los
Microorganismos. 10ma
edicin. Editorial Pearson Educacin, S.A. Espaa.

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GRACIAS

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