UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

INVESIGACIN Y DESARROLLO DE
PRODUCTOS
Determinacin simultnea de siete colorantes sintticos en el vino por
Micro extraccin dispersiva en fase slida Junto con la fase inversa de alto
rendimiento Cromatografa lquida
INTEGRANTES:
Hurtado Sharon
Surez Mara Judith
Rosero Cristian

INTRODUCCION
COLORANTES
Colorantes alimentarios, incluidos los colorantes naturales y colorantes sintticos,
son una clase importante de aditivos alimentarios, que son ampliamente utilizado
en bebidas y productos alimenticios para restaurar el color natural y proporcionar la
apariencia de color deseada. Los colorantes naturales son las preferidas por los
consumidores; Sin embargo, los colorantes sintticos son ampliamente utilizado
debido a su bajo precio, alta eficacia y excelente estabilidad.
Cada vez hay ms evidencias en las que se indica que algunos colorantes sintticos
representan un riesgo potencial para la salud humana y puede incluso ser
cancergenos, especialmente cuando se consumen en exceso. Por lo tanto, para
proteger la salud pblica, el uso de colorantes sintticos es estrictamente
controlado por las diferentes legislaciones nacionales y organizaciones como la
Organizacin de las Naciones Unidas de Agricultura y la Alimentacin.
En China, la cantidad mxima permitida para la mayora de los colorantes es .100
mg kg

Mtodos Analticos
Algunos mtodos analticos para colorantes sintticos
han sido propuesto, tal como electroforesis capilar,
espectrofotometra, la cromatografa de iones,
cromatografa de capa fina, cromatografa de masa y
de alto rendimiento el (HPLC) con ultravioleta / visible
o de red de diodos detectores.
HPLC es la tcnica ms utilizada con excelente
precisin, exactitud y costo relativamente ms bajo.
HPLC en fase inversa (RP-HPLC)

 Debido a las complejidades de matrices y los bajos niveles de

colorantes en muestras reales, es difcil determinar los
colorantes sintticos por lo que el pretratamiento de las
muestras es crucial para la determinacin simultanea
Por lo tanto, en nuestro trabajo, el balance Hidrofilico-Lipofilico
(HLB) de extraccin en fase slida (SPE) se utilizaron
cartuchosen el procedimiento de limpieza de colorantes
sintticos en el vino. La razn para la eleccin de los cartuchos
de SPE HLB era que su copolmero contena dos monmeros: el
hidrfilo N-vinilpirrolidona y el divinilbenceno lipfilo (DVB). La Nvinilpirrolidona podra proporcionar un gancho polar especial
para mejorar la captura de analitos polares, y la DVB podra
proporcionar una mejor reserva para analitos polares dbiles.

 Aunque HLB SPE ha sido verificado a ser eficaz para la limpieza

de las muestras de vino en nuestro estudio, se comparo con la
extraccin en fase slida micro dispersivo (d-m-SPE), que es
relativamente caro, complicado, consume tiempo y requiere
grandes volmenes de disolventes. Basado en el mtodo de HLB
SPE, nos inspiramos que los polmeros con funcionalidad amino
superparamagnticas
con
la
separacin
magntica,
probablemente convertido en una potente adsorbente para
llevar a cabo procedimiento de d-m-SPE, que se considera como
uno de los ms potentes tecnologas de limpieza y extraccin.
En este estudio, un eficaz etanodiamina funcionalizada
magntica Fe3O4 polmero (EDA-MP) se ha sintetizado, que se
espera que tenga gran capacidad de adsorcin de colorantes
sintticos y posea caractersticas superparamagnticas para una
conveniente separacin bajo un campo magntico. El objeto de
este estudio era preparar un polmero magntica nuevo aminofuncionalizado (EDA-MP)

MATERIALES Y REACTIVOS
Las soluciones estndar (1.000 mg) L21 de la
tartrazina, amaranto, carmn, amarillo anaranjado, rojo
allura, azul brillante y eritrosina fueron adquiridos por
el Instituto Nacional de Metrologa, Repblica Popular
de China.
Metanol, cido metanoico y acetato de amonio (AMAC)
de calidad HPLC se adquirieron de Merck
(Darmstadt,Alemania).
Las muestras de vino que incluyen vino tinto seco, el
vino semiseco y vino dulce se adquirieron en los
mercados locales (Zhejiang, China).

EQUIPOS
Las caracterizaciones de EDA-MP se llevaron a
cabo mediante el uso de la transmisin
microscopa electrnica (TEM)
Un imn permanente se utilizo para la separacin
magntica
Un mezclador de vrtice se utiliz durante la
extraccin
El anlisis por HPLC se realiz con un sistema
equipado con una bomba de G1311A, G1314A un
detector UV y un muestreador automtico, para la
separacin de colorantes sintticos se hizo en una
placa de C18

Sntesis y Caracterizacin de EDA-MP

Figura 1. El procedimiento de preparacin de la AED-MP.

CONDICIONES CROMATOGRAFICAS
Los analitos se separaron por RP-HPLC usando 20 mmol L En agua
como eluyente (A), y metanol como eluyente (B). El gradiente lineal
fue: 0-5,0 min, 92-65% A (8-35% de B); 5,0-10,0 min, 65-20% A (35
a 80% B) y 10,0% -14,0 min, 20% A (80% B). Finalmente, la
concentracin de la fase mvil se devolvi a 92% A (8% B), y se
mantiene durante 2 min para el equilibrado de la columna.
La longitud de onda de deteccin de los colorantes se llev a cabo
de acuerdo con el siguiente Procedimiento: 0 a 10,20 min, 254 nm;
10,21-12,00 min, 600 nm; 12,10-15,00 min, 254 nm. La separacin
cromatogrfica de los colorantes sintticos se logr en la columna
Kromasil C18 a un caudal constante de 1,0 ml min y el volumen de
inyeccinfue de 10,0 ml. La temperatura de la columna se mantuvo
a 30C.

El d-m-SPE procedimiento EDA-MP

1,0 ml de vino (ajustado a pH 3,0 con HCl 0,5 mol L se
transfiri a un tubo de centrfuga de vidrio que contiene 20
mg de EDA-MP. La mezcla se agit en vrtex inmediatamente
para 1,0 min, a continuacin, separacin bajo un campo
magntico durante 1 min.
Posteriormente, el adsorbente EDA-MP se eluy en 5,0 ml de
2% de amoniaco (v / v) en metanol. El sobrenadante
concentrado a sequedad con una corriente de nitrgeno y se
redisolvi con 1,0 ml de 20 mmol L en agua: metanol (92: 8, v
/ v) y se filtr utilizando una membrana de 0,45 mm antes de
su inyeccin en el sistema de RP-HPLC. La EDA-MP utilizado
fue reciclado por lavando con metanol durante 30 min.

El procedimiento HLB SPE

Para el mtodo de HLB SPE, 1,0 ml de muestra de vino se
coloc en un plato de evaporacin abierta y se evapor a
sequedad en un bao de agua a 80C. Despus, el residuo se
disolvi de nuevo con agua pura y se transfiere sobre el
cartucho de SPE HLB, que era secuencialmente acondicionado
con metanol (5,0 ml) y 0,1% acido metanoico:agua (5,0 ml, v /
v). El cartucho de extraccin fue de lavado por otro cido
metanoico 0,1%: agua (5,0 ml, v / v). Los colorantes absorbidos
a continuacin se eluyeron con 2,0% de amonaco solucin:
metanol (5,0 ml, v / v).
Se recogi el eluato final y se concentr a sequedad con una
corriente de nitrgeno y se redisolvi con 1,0 ml de 20 mmol L
en agua: metanol (92: 8, v / v) y se filtr utilizando una
membrana de 0,45 mm antes de su inyeccin en el sistema de
RP-HPLC.

mtodo de adsorcin de poliamida

Para el mtodo de adsorcin de poliamida, la misma
cantidad de muestra de vino se evapor a sequedad en un
bao de agua. Despus, el residuo se redisolvi y se ajust a
pH 4,0 mediante la adicin de 0,5 mol de solucin de cido
crtico L. 1,0 g de adsorbentes, los polvos de poliamida se
aadieron y la mezcla se agito durante 2 minutos. A
continuacin, los polvos de poliamida se filtraron y
lavaroncon metanol: cido metanoico (6: 4, v / v) hasta que
el filtrado se convirti en neutro. La desorcin de los
colorantes se llev a cabo con etanol: solucin de amoniaco:
agua (7: 2: 1, v / v / v). El eluato final se concentr a
sequedad con una corriente de nitrgeno y se vuelve a
disolver con 1,0 ml de 20 mmol.L AMAC en agua: metanol
(92: 8, v / v) y se filtr utilizando una membrana de 0,45 mm
antes de su inyeccin en el sistema de RP-HPLC.

Mtodo de validacin
Los linealidad de las curvas de calibracin
obtenidas por rea de pico (y) frente a la
concentracin (x, en mg /L
) Fueron estudiados usando patrones de
calibracin en el disolvente a siete
concentraciones de 0.5, 1.0, 2.0, 5.0,
10,0, 20,0 y 50,0 mg /L

Las
La precisin del mtodo y las precisiones,
se obtuvieron por siete colorantes
sintticos se dispararon a concentraciones
de 1,0, 5,0 y 20,0 mg en el vino tinto en
blanco. Se expresaron las precisiones del
mtodo como las desviaciones estndar
relativas intra(DTR) e interdiaria (RSD)

DTR intrada se obtuvieron mediante la

repeticin de los tres niveles
de muestras
adicionadas cinco veces en un da, y el RSD
interdiaria se obtuvieron mediante la repeticin de
los tres niveles de muestras enriquecidas por
triplicado en 9 das separados dentro de 2 semanas
perodo. Los resultados se resumen en la Tabla I. Se
muestra que la mayora de las recuperaciones
medias estn en el rango de 88,6 a 105,2%.

Determinacin de los Siete colorantes sintticos en Vino las DTR

intrada que van desde 2.1 hasta el 8,2% y el RSD interdiaria que
van desde 3.4 a 8.7%.
Los lmites de deteccin (LOD) y lmites de cuantificacin (LOQ)
se calcularon en los extractos en blanco como la concentracin
ms baja de analito que produjo una relacin seal a ruido de 3 y
10, respectivamente.
El LOD y LOQ estaban en el rango de 0,04-0,11 mg y
0.12 -0.45 mg/L.

Anlisis de muestras
Tres tipos de vino (seis muestras para cada especie), incluyendo vino tinto, vino semiseco y el vino dulce, se analizaron por e
lMtodo EDA- MP d - m - SPE - RP-HPLC desarrollado.

Cada lote deLas muestras se procesaron junto con una matriz en blanco. La matriz en blanco elimina los falsos positivos como
resultado de la contaminacin en el proceso de extraccin , productos qumicos del instrumento .

Un blanco de reactivo se obtuvo mediante la realizacin de todo el proceso sin una muestra. En este ejemplo se elimina la
posibles falsos positivos producidos por la contaminacin en el instrumento o disolvente utilizado .

Un extracto blanco enriquecido hasta concentraciones de1,0 mg/L permitido era el control de la eficacia de la extraccin(Figura
5). Los resultados indicaron que los colorantes sintticos, incluyendo tartrazina , amaranto , carmn , amarillo anaranjado, rojo
allura eritrosina azul y brillante , no se encontraron por encima de LOQ en el vino.

Discusin

El efecto de AMAC en la
separacin cromatogrfica es
lograr una ptima separacin ,
es decir los efectos de AMAC
como supresor de ion en el
comportamiento de retencin en
los colorantes sintticos
estudiados.

Una serie de fases acuosa

mviles fueron compuestas de
diferentes concentraciones de
AMAC preparado en 1.0, 2.0, 5.0,
10.0, 20.0 y 25.0 mmol /L. Los
resultados indicaron que con el
aumento de la concentracin de
AMAC, los tiempos de retencin
para los siete colorantes
disminuyeron significativamente.

El fenmeno podra atribuirse al

hecho de que no slo AMAC tiene
un efecto de supresin de iones,
tambin tiene una modificacin
orgnica.

La separacin de lnea de base

de los siete colorantes sintticos
se puede lograr mediante el uso
de solucin de AMAC (20,0
mmol/L) Y metanol como fase
mvil

Anlisis XPS de EDA-MP

Seales caractersticas para el carbono (C1s) y oxgeno (O1s) se detectaron en 282,6 y

529,6 eV. Se le asign la aparicin de una seal a 396,4 eV a nitrgeno (N1s), que fue
presentado por el monmero EDA.

 Los C 1s de alta resolucin se demuestra en cuatro picos

con energas de enlace de 282,6, 283,7, 284,3 y 286,5 eV,
que pertenece a (C-C / C-H), ter (C-O), C-N y un carbono de
ster (O-CO).
Y una seal de N 1s entre 390 y 410 eV en un espectro XPS
de alta resolucin.
No hay seal caracterstica para la hierro (Fe 2p) lo que
confirma que no hay fugas de Fe3O4 en la superficie de
EDA-MP.

Efecto de la cantidad de EDA-MP en las propiedades de extraccin

La eficacia de diversas cantidades de adsorbentes en la eficiencia de extraccin
se llev a cabo por las muestras de vino tinto enriquecida con cada uno de los
siete colorantes sintticos en 10,0 mg L-1.
Al aumentar la cantidad de adsorbentes EDA-MP de 5 a 20 mg, las recuperaciones
de las siete colorantes sintticos aumentaron .
De 20 a 35 mg, las recuperaciones de los colorantes sintticos no fueron
evidentes. La combinacin de la cantidad de adsorbentes EDA-MP en la
proporcin de 20 mg por 1,0 ml de la muestra de vino sera la ptima.

La reutilizacin de los adsorbentes

El EDA-MP utilizado para el procedimiento se recogi y empap en una solucin de NaOH

1,0 M durante 30 min y luego se lav con agua y metanol a un pH~7.0.

Se separ y sec bajo un vaco a 60C durante 12h. Los resultados mostraron que la EDAMP se puede reutilizar al menos seis veces.

Conclusiones

EDA-MP fue sintetizado y el mtodo analtico EDA-MP d- SPE-RP-HPLC fue desarrollado y

reproducible para la determinacin simultnea de siete colorantes sintticos en el vino.

Los resultados mostraron la eficiencia en la extraccin utilizando EDA-MP que era ms

eficaz que la de la adsorcin de poliamida.

La EDA-MP sintetizado tuvo aplicaciones potenciales en la extraccin de la muestra y los

procedimientos de limpieza.