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INSTRUMENTOS PARA

CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS
IQ Laura Vzquez

Sistemas de bombeo
Entre los requisitos para las bombas en cromatografa
de lquidos esta
1) La generacion de presiones de hasta 6000
psi (lb/in.2) o 414 bares.
2) Salida libre de pulsos.
3) Tasas de flujo de 0.1 a 10mL/min.
4) Reproducibilidad del flujo de 0.5% relativo o
mejor.
5) Componentes resistentes a la corrosion a causa de
la diversidad de solventes.

Bombas reciprocantes

Bombas reciprocantes
El solvente esta en contacto directo con el
pistn.
Tambin se puede comunicarla presin al
solvente mediante un diafragma flexible, el
cual a su vez es bombeado hidrulicamente por
un embolo de vaivn.
Las bombas reciprocantes tienen la desventaja
de producir un flujo pulsado que se tiene que
amortiguar porque los pulsos se manifiestan
como ruido en la lnea base del cromatograma.

Bombas de desplazamiento

Por lo general, las bombas de


desplazamiento consisten en unas
grandes cmaras similares a las de
una jeringa, equipadas con un embolo
que se activa por medio de un
mecanismo de tornillo accionado
mediante un motor de etapas.
Estas bombas tambin producen un
flujo que tiende a ser independiente
de la viscosidad y de la contrapresin.

Adems, el flujo que resulta esta libre de


pulsos.
Entre las desventajas estn una capacidad
de solvente limitada (250 mL)
Muchas dificultades cuando este se tiene
que cambiar.

Sistemas de inyeccin de muestra


el factor limitante en la precisin de las mediciones en
cromatografa de lquidos es la reproductibilidad con que
se pueden introducir las muestras en el relleno de la
columna.
El problema se acenta por el ensanchamiento de banda
que acompaa al tapn o sobrecarga de inyeccin.
Por consiguiente, los volmenes de muestra que se
emplean tienen que ser muy pequeos, de unas pocas
decimas de microlitro hasta quiz
unos 500 L. Adems, lo apropiado es introducir la
muestra sin despresurizar el sistema.

La mayor parte de los cromatografos actuales se


venden con autoinyectores.
Dichas unidades tienen la capacidad de inyectar
muestras en el cromatografo de liquidos a partir
de frascos que estan en un carrusel o desde
placas microtituladoras.
Algunos poseen medios controlados por
temperatura que facilitan el almacenamiento de
la muestra y efectan reacciones de derivacin
antes inyectarla.

Columnas para cromatografa


de lquidos de alta resolucin
Las columnas para esta tcnica se construyen de
ordinario con tubo de acero inoxidable de dimetro
interno uniforme.
Algunas ocasiones las columnas para cromatografia de
lquidos de alta resolucin se fabrican con tubos de
vidrio de paredes resistentes o con polimeros como el
polieteretercetona.
Ademas, tambin hay columnas de acero inoxidable cuyo
interior esta revestido con vidrio o polieteretercetona.
Estn disponibles cientos de columnas de diversos
precios y rellenos

Columnas analticas
5 a 25 cm de largo.
Invariablemente se usan columnas rectas.
A veces se pueden alargar acoplando dos o mas
de ellas.
El dimetro interior de las columnas analiticas
es a menudo de 3 a 5 mm.
Los tamaos de las partculas de los rellenos mas
comunes son 3 o 5 m.

Precolumnas
Funcion: aumentar la vida de la columna
analtica se coloca una precolumna que elimina
no solo la materia en suspension y los
contaminantes de los solventes, sino tambien los
componentes de la muestra que se unen de
manera irreversible a la fase estacionaria.

Tipos de rellenos de la columna


En cromatografa de lquidos se utilizan dos tipos
bsicos de rellenos, pelicular y de partcula
porosa.
Los rellenos de partculas porosas caractersticos
para cromatografia de lquido estan formados por
micro partculas porosas cuyos dimetros varan
entre 3 y 10 m.
Para un tamao de partcula dado es deseable
tener una distribucin muy estrecha de
dimensiones de partcula.

Detectores
Los detectores de cromatografa de lquidos han
sido instrumentos analticos tradicionales
adaptados con celdas de flujo para medir
concentraciones bajas de solutos en flujos de
lquidos.
El problema principal en el mejoramiento de la
cromatografa de lquidos es la adaptacin y
perfeccionamiento de los detectores.

Caracteristicas de un detector ideal


1. Sensibilidad adecuada. Justo lo que constituye una adecuada
sensibilidad no puede evaluarse de forma cuantitativa. Aunque todos se
utilizan extensamente y son satisfactorios en ciertos casos, los menos
sensibles no son adecuados para algunas aplicaciones.
2. Buena estabilidad y reproductibilidad.
3. Respuesta lineal para los solutos que se extienda a
varios ordenes de magnitud.
4. Intervalo de temperaturas adecuado.
5. Tiempo de respuesta corto independiente de la tasa
de flujo.
6. Alta confiabilidad y manejo sencillo. El detector deberia estar a
prueba de la impericia de operadores inexpertos, si es posible.
7. Respuesta semejante para todos los solutos o, por el
contrario, una respuesta selectiva y altamente predecible para uno o mas
tipos de solutos.
8. No debe destruir la muestra.

Ejercitario