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Cromatografa

UNVES

Eficiencia / Rendimiento
de la columna
Es la capacidad que tiene una
columna de separar dos solutos

Mejoramiento del
rendimiento de la
columna

1) Incrementar la velocidad de separacin de la


banda .
2) Disminuyen la velocidad de ensanchamiento de
la banda.

VELOCIDADES DE
MIGRACION DE LOS
SOLUTOS
La eficacia de una columna de
cromatografa para separar dos solutos
depende en parte de las velocidades
relativas con las que se lavan o se
purifican las dos especies.
Esas velocidades estn determinadas por
la magnitud de las constantes de
equilibrio para las reacciones mediante
las cuales los solutos se distribuyen entre
las fases estacionaria y mvil.

Constantes de
distribucin

Cuando las concentraciones son bajas o cuando


intervienen especies no anionicas, los coeficientes
de actividad.

Tiempo de retencin
Aunque la constante de distribucin es fundamental
para las separaciones cromatograficas, no se puede
medir con facilidad. En cambio, es factible medir la
cantidad llamada tiempo de retencion que es una
funcion de Kc.

Tm= al tiempo que se requiere para que una


molcula de la fase mvil pase por la columna.

La velocidad lineal promedio de la migracin del


soluto a lo largo de la columna

De manera semejante, la velocidad lineal


promedio de las molculas en la fase mvil

Relacin entre la tasa


de flujo volumtrico y
la velocidad del flujo
lineal

Relacin entre tiempo


de retencin
y constante de
distribucin

La velocidad de
migracin del soluto:
el factor de retencin
factor de retencin k es un parmetro experimental
importante que se usa con frecuencia para
comparar
las velocidades de migracin de los solutos en las
columnas.
La razn por la cual k es tan til es que no depende
de la forma de la columna o de la tasa de flujo
volumtrico. Esto quiere decir que para una
combinacin
dada de soluto, fase mvil y fase estacionaria.
Cualquier columna de cualquier forma que funciona
a cualquier tasa de flujo de fase mvil dar el
mismo

Velocidades de
migracin relativas: el
factor de selectividad

Teora cintica de la
cromatografa
El descenso por la columna ocurre solo mientras la molcula
esta en la fase mvil. Por tanto, ciertas partculas viajan con
rapidez gracias a su inclusin accidental en la fase mvil la
mayor parte del tiempo, mientras otras se retrasan a causa de
que estn incorporadas en la fase estacionaria por un tiempo
mayor al promedio.
El resultado de estos procesos aleatorios individuales es una
dispersin simtrica de velocidades alrededor del valor medio,
lo cual representa el comportamiento de la molcula de analito
promedio.

Deformaciones de la
curva de gauss
Una causa comn de estas deformaciones es una
constante de distribucin que varia con la
concentracin.
La asimetra o deformacin del frente tambin se
presenta cuando se introduce demasiada muestra
en una columna.
Las distorsiones de este tipo son indeseables
porque ocasionan separaciones deficientes y a
tiempos de elucin menos reproducibles.

Descripcin
cuantitativa de la
eficiencia de la
columna N= L/H
La teoria del plato explica de manera satisfactoria
la
forma gaussiana de los picos cromatograficos y su
velocidad
de desplazamiento por la columna.
Pero la teoria se abandono en favor de la teoria de
la velocidad,
debido a que la primera fallaba al intentar justificar
el
ensanchamiento de los picos de una manera

Definicin de altura de
plato
A menudo se supone que las bandas
cromatograficas tienen una forma gaussiana, lo
cual es conveniente para definir la eficiencia de
una columna en trminos de la varianza por
unidad de longitud de la columna.

La evaluacin
experimental de H y N

El numero de platos N y la altura de plato H se


utilizan con frecuencia, tanto en la bibliografa
como entre los fabricantes de instrumentos. Son
cantidades que pueden ser muy utiles al
comparar la potencia de separacin y las
eficiencias entre columnas. Sin embargo, para
que estas cantidades tengan sentido al comparar
dos columnas, es esencial que se hayan
determinado con el mismo compuesto.

Variables cinticas que


influyen en la
eficiencia de la
columna

Influencia de la tasa de
flujo de la fase mvil
El grado de ensanchamiento de la banda depende
del tiempo que la fase mvil esta en contacto con
la fase estacionaria, lo cual a su vez depende de
la tasa de flujo de la fase mvil.
Por esta razn, los estudios sobre la eficiencia se
han realizado casi siempre determinando en
funcin de la velocidad de la fase mvil.

CURVA DE VAN DEEMTER

Teora del
ensanchamiento
de bandas

ECUACION DE VAN
DEEMTER

Termino de trayectoria
mltiple A
El ensanchamiento
de una zona en la
fase mvil se debe
en parte a la
multitud de caminos
por los cuales las
molculas o los
iones pueden
desplazarse por la
columna rellena
.

Que factores afectan a


A?

DIFUSION EN REMOLINO
Las moleculas de soluto alcanzan el extremo de la
columna durante un intervalo de tiempo, lo cual
ocasiona un ensanchamiento de banda.
velocidades bajas de la fase mvil, las
molculas no se dispersan de manera apreciable
por el efecto de las trayectorias mltiples
Velocidades moderadas o elevadas, no se
dispone de tiempo suficiente para que se
produzca el promedio por difusion, y por ello se
observa un ensanchamiento de banda debido a
las diferentes longitudes de los caminos.

Estancamientos de fase
mvil en la cavidades de
la fase estacionaria.
Cuando un solido funciona como fase
estacionaria, sus poros se llenan con volmenes
estticos de fase mvil.
Las molculas del soluto tienen que difundirse
entonces a travs de estos estancos antes de que
la transferencia ocurra entre la fase mvil que se
desplaza y la fase estacionaria.

La presencia de estancos de fase mvil hace que


los procesos de intercambio sean lentos y produce
una contribucin a la altura de plato que es
directamente proporcional a la velocidad de la
fase mvil e inversamente proporcional al
coeficiente de difusin del soluto en la fase mvil.

El termino de difusin
longitudinal B/u
La difusin es un proceso en el cual las especies
migran desde una zona de un medio con mayor
concentracin a una regin mas diluida. La
velocidad de migracin es proporcional a la
diferencia de concentracin entre las regiones y al
coeficiente de difusin DM de las especies
DM es una medida de la movilidad de una
sustancia en un medio, es una constante para una
especie dada igual a la velocidad de migracin en
un gradiente de concentracin unitario.

La difusin longitudinal es un a causa


comn del ensanchamiento de banda en
la cromatografa de gases porque las
molculas de gas se difunden a
velocidades relativamente altas. El
fenmeno tiene poca importancia en la
cromatografia de lquidos porque las
velocidades de difusin son
mucho menores.

El termino de la
transferencia de masa
en la fase estacionaria
CSu.
Cuando la fase estacionaria es un liquido
inmovilizado, el coeficiente de transferencia de
masa es directamente proporcional al cuadrado del
espesor de la pelcula que hay sobre las partculas
de soporte e inversamente proporcional al
coeficiente de difusin DS del soluto en la pelcula.
La consecuencia de todo ello es una menor
velocidad de transferencia de masa y un
aumento de la altura de plato.

El termino de
transferencia de masa
de la fase mvil CMu.
Se sabe que el coeficiente de transferencia de
masa de la fase mvil CM es inversamente
proporcional al coeficiente de difusin del
analito en la fase movil DM.

Efecto de la velocidad
de la fase mvil sobre
los trminos de la
ecuacin
Note que hay un
caudal optimo al
cual la altura de
plato mnima y la
eficiencia en la
separacin es
mxima.

Resumen de los
mtodos para
reducir el
ensanchamiento
de banda

En el caso de las columnas empacadas, la


variable mas importante que afecta su eficiencia
es el dimetro de las partculas que constituyen el
relleno.
En el caso de columnas tubulares abiertas, el
dimetro de la columna ya de por si es una
variable importante.
Con fases mviles gaseosas, la tasa de difusin
longitudinal puede reducirse de forma apreciable
disminuyendo la temperatura y, por tanto, el
coeficiente de difusin.
Con fases estacionarias liquidas, el espesor de la
capa de liquido adsorbido debera ser el menor
posible.
Para cada columna hay una velocidad de fase

MEJORAMIENTO DEL
RENDIMIENTO
DE LA COLUMNA
Una separacin cromatografa se mejora al variar
las condiciones experimentales hasta que los
componentes de una mezcla se separan con
claridad en el menor tiempo posible.

Ejercitario