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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE AGRONOMIA
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS AGRARIAS

WESTERN BLOT O INMUNOBLOT

ALUMNOS

PROFESOR
CURSO
CICLO

ROJAS MORENO, Lebi R.


TORRES IBAEZ, Marvin M.
FRETEL YALICO, Gabriela.
RIVERA GARCIA, Wilian F.
JORGE PANDURO, Augusto B.
HUANCA GUZMAN, Elvis
VALDERRAMA CALERO, Luis F.
:

Biolg. CHIA WONG, JULIO


:

MICROBIOLOGIA GENERAL
:

2015 II.

TINGO MARA PER

INTRODUCCIN
El Western Blot, o inmunoblot, es una
tcnica analtica usada para detectar
protenas especificas en una muestra
determinada. Mediante una
electroforesis en gel se separan las
protenas.
Las protenas son transferidas desde el
gel a la membrana
electroforticamente.
Detecta la unin antgeno-anticuerpo
por actividad enzimtica,
fluorescencia.

CARACTERISTICAS DE LA
TCNICA

Es una prueba independiente con alta especificidad


Western Blot, las pruebas radioinmunoprecipitacion y los
ensayos de inmunoflorescenncia indirecta. El Western
Blot es la mas comn de estas pruebas usadas en los
Estados unidos. Cuando se efecta de acuerdo con los
estndares aceptados de realizacin, las pruebas
sucesivas de ELISA, seguidas del test Western Blot.
La exactitud de esta prueba depende grandemente de la
eleccin de los reactivos qumicos, la pericia de los
tcnicos y la interpretacin subjetiva.

ELECTROFORESIS
Para entender la tcnica de Western Blot es necesario
comprender que es una electroforesis y en que se basa.
Las protenas suelen tener carga neta; por lo tanto, si se aplica
un campo elctrico a una solucin que contenga una mezcla de
protenas, estas migraran a una velocidad que depender de su
carga neta, forma y peso molecular. Esta tcnica es conocida
como electroforesis.
Las separaciones electroforticas se realizan casi siempre en
soporte solidos, generalmente para separar una mezcla de
protenas, el soporte de eleccin son los geles de poliacrilamida.

VENTAJAS
1.- SENSIBILIDAD.- debido a su
capacidad para detectar un mnimo de
0.1 nanogramos de protena en una
muestra.
2.- ESPECIFICIDAD.- la tcnica de
Western Blot se debe a su especificidad
de dos factores principales:
A) La electroforesis en gel, es de gran
paso a la deteccin, como bandas en
gel formado ya dan pistas sobre el
tamao de la protena o polipptido.
B) La especificidad
antgeno=anticuerpo. Es un factor
importante dado que los anticuerpos
especficos muestran afinidad por
protenas especificas, el proceso
puede detectar una protena diana.

DESVENTAJA
S
1.- PROCESO O RESULTADO
ERRONEO O SUBJETIVO.- a pesar de
su sensibilidad y especificidad del
western Blot puede producir
resultados errneos, un anticuerpo
reacciona con una protena que no se
esperaba.
2.- ALTO costo y cuestiones tcnicas.
Debido a que es un proceso delicado
el Western Blot necesita o requiere de
precisin.
Muchos laboratorios no usan mtodos
estandarizados o productos
autorizados del Western Blot.

APLICACIONES EN MICROORGANISMOS
IMPORTANTES EN LA AGRICUCLTURA

PRODUCCION DE PLANTAS TRANSGENICAS MEDIANTE EL USO DE


Agrobacterium tumefaciens EN EL LABORATORIO.

Agrobacterium tumefaciens - sinnimo de Rhizobium radiobacter - es


una bacteria que causa en las plantas dicotiledneas unos tumores
conocidos como "agallas" o "tumores del cuello", que crecen en la zona
donde se unen la raz y el tallo.
Uno de los pasos mas importantes en la produccin de plantas
transgnicas es la eleccin del gen o los genes que van a ser
introducidos en la planta a transformar. La Nicotiana tabacum se ha
convertido en el modelo mas ampliamente difundido para el estudio de
genes en plantas transgnicas.
Los genes identificados como benficos para la caracterstica deseada
deben ser clonados en un vector (plsmido) para el anlisis de su
secuencia y posteriormente subcionados en otro plsmido denominado
vector de expresin, el cual permite expresar la protena de inters en
la planta transformada.

En el caso de transformacin con agrobacterium, el vector debe


contener las secuencias de los bordes derecho e izquierdo del TDNA de agrobacterium. La presencia del gen de inters en
agrobacterium se confirma por PCR o anlisis con enzimas.
Despues de 5 das de la infeccin con A. tumefaciens, los
cortes de tejido son transferidos a un nuevo medio de cultivo que
contiene un antibitico. El tejido transformado generalmente se
desarrolla hasta formar plantas in vitro en presencia del antibitico.
Las plantas resistentes al antibitico son transportadas al
invernadero donde se practica un anlisis para determinar la
presencia de la secuencia del gen introducido en las plantas por
PCR, la transcripcin del gen por Northen blot y la expresin del
mismo por Western blot.

BIBLOGRAFIA:

Alberto Mijan de la
Torre-TECNICAS Y METODOS DE
INVESTIGACION EN NUTRICION
HUMANA-editorial GLOSA.

GUIA DE PRACTICAS PREVENTIVAS


EN LA PRACTICA MEDICAediciones DIAZ DE SANTOS.

MEMORIAS- I CURSO
INTERNACIONAL DE RIESGOS
FITOSANITARIOS PARA LA
AGRICULTURA COLOMBIANASantaf de Bogot, Colombia; 3 al
5 de noviembre de 1999.

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