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ESPECTROFOTOMETROS UV/VIS

Lic. Rodolfo M. Orozco


Anlisis Instrumental

Espectrofotmetros
* Los espectrofotmetros son aquellos instrumentos en
los que se mide fundamentalmente la distribucin
espectral de energa radiante en las regiones
espectrales: UV, VIS e IR (cercano hasta el medio)
* Estos instrumentos utilizan un complejo sistema ptico
de seleccin de longitud de onda (monocromador).
Estos instrumentos pueden seleccionar longitud de
onda en forma continua y en algunos casos con
precisin de dcimas de nm. Por lo tanto, es posible
obtener en forma continua el espectro de absorcin de
una molcula.

Clasificacin
Un solo haz
Doble haz
Multicanal
Doble dispersin
Longitud de onda dual

Componentes Bsicos

Fuente de luz
Monocromador
Portamuestra
Detector y Sistema de Lectura

Espectrofotometro de un solo haz


Tipo de espectrofotometro ms simple, se
basa en la absorcin de la luz al pasar un
solo haz por la muestra a una longitud de
onda especifica
Este instrumento produce luz
monocromtica y la detecta despus de
atravesar la muestra de estudio

Componentes Opticos
Utilizan lmparas intercambiables de
wolframio, H2 D2
Tubos fotomultiplicadore y redes de
dispersin
Unos utilizan dipositivos de salida digitales,
otros diferentes medidores
Los diseos pticos de los instrumentos
difieren por el fabricante

Conventional Spectrophotometer

Schematic of a conventional single-beam spectrophotometer

Fundamentals of modern UV-visible spectroscopy

Figure : 23

CARACTERISTICAS
Equipo sencillo y econmico ($10,000)
Trabajan en la regin Vis y otros en la regin
UV/Vis (190/210 800/1000)
Producen anchos de banda de 2 - 8 nm.
DESVENTAJAS
Presencia de ruido de parpadeo de las fuentes y
detectores
Cambios de intensidad de la fuente y sensibilidad
del detector con la longitud de onda de trabajo

Espectrofotmetros de doble haz


En este tipo de instrumento la radiacin se divide
en dos (Po similares) uno pasa por la muestra y el
otro al blanco.
Costo del equipo ($ 15000)
El doble haz realiza corecciones por:
La intensidad de la fuente de luz
Sensitividad (respuesta) del detector
Transmisin del monocromador
(estos factores cambian con la long. de onda)

Espectrofotmetro de doble haz

Instrumento de doble haz


Beam Chopper

Semi-transparent
Mirror
Sample

Tungsten
Lamp

Grating

Slit

Quartz
Cuvette

Photomultiplier

Reference

Mirror
Mirror

Mirror

VENTAJAS
Resultados ms confiables (Abs. diferencial de la muestra
y blanco)
Operan automaticamente, eliminan ajustes manuales
(ahorrando tiempo)

COMPONETES OPTICOS
Espejos giratorios: dividen el haz, ambos se juntan por un
espejo reticular que refleja uno y tansmite el otro.
Detector: recibe pulsosalternativos del haz de referenica y
de la muestra
Sistema de seales: compara la respuesta de los dos haces
y efectua la correccin.
Dispositivos que igualan la intensidad de los dos haces.

INSTRUMENTOS MULTICANAL
Tienen pocos componentes pticos (mayor
rendimiento de la radiacin)
Obtencin rpida de barrido y espectros (1s)
Se acoplan a diferentes ordenadores personales
Elevada relacin S/N
Determinacin simultnea de multicomponentes
Obencin de espectros con barrido electrnico y
reproducibilidad de long. de onda (200 800 nm,
UV/VIS/IR)

Espectrofotometro Multicanal

Componentes y Funcionamiento
Lmparas intercambiables de deuterio y
tungsteno
El haz de luz depus de atravesar el la
muestra se enfoca en la rendija de entrada y
pasa a una red de reflexin hologrfica
El detector es de serie de diodos de silicio
que consta de 316 elementos
Costo = $15,000

Instrumentos de doble dispersin


Estos instrumentos mejoran la resolucin espectral
y reducen la radiacin parsita
Tienen dos monocromadores en serie (red o
prisma)
Trabajan en el rango de 185 a 3125 nm.
Producen resluciones de 0.07 nm
Luz parsita = 0.0008 % de Po.
A long. > 800 nm, utilizan detector de
fotoconductividad de sulfuro de plomo con
lmpara de wolframio.

Componentes y Funcionamiento
La radiacin atraviesa la rendija de entrada 1, se
dispersa en la red 1. Luego se dirige a la rendija
de entrada 2 y se dispersa en la red 2.
Al salir de la rendinja de salida 2, el haz se divide
en dos (espejo obturador) uno atraviesa la muestra
y otro la solucin de referencia
Se dirige hacia el detector para registrarse en la
regin de trabajo.

Instrumentos de longitud de onda dual


Los espectros se obtienen de la derivada (1o, 2o, 3er orden
de la Abs %T vrs. long. Onda
Muestran detalles espectrales que se pierden en un espectro
ordinario
Mejoran la determinacin de concentracin de analito en
presencia de interferentes
No usan haz de referencia, peron pueden operar con el.
Dos haces de longitudes diferentes llegan alternativamente a
la muestra y al detector.
La diferencia entre seales alternas da una buena
aproximacin a la derivada de las absorbancias
Equipo muy costoso

Espectro derivado

EJEMPLO
Espectros de absorcin de la
ampicilina sdica (a)
la dicloxacilina sdica (b)
y la mezcla (c).
Observe la sobreposicin de los
espectros de (a) y (b) a 200 nm.
(b) tiene una mayor absorcin en
todo la zona espectral utilizada,
por lo que no podramos realizar
estudios cuantitativos ni una
caracterizacin confiable.

Si obtenemos la primera derivada


de los espectros (fig. 2) se aprecian
diferencias, puesto que ya se
empiezan a resolver mejor.
En la segunda derivada de los
espectros se aprecia la estructura
fina que nos permite diferenciar los
puntos de cruce en cero para la
ampicilina sdica en 248.8 nm y
para la dicloxacilina sdica en 215.2
nm y 221.6 nm que nos sirven para
realizar estudios cuantitativos.
Los mnimos definidos nos ayudan
a su caracterizacin.