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Introduccin a la

Cromatografa
Qumica Analtica
Instrumental
Comisin B

Temario
Definicin
Clasificacin de las tcnicas
cromatogrficas
Qu es un cromatograma?
Parmetros de retencin
Eficiencia
Resolucin
Aplicaciones de la cromatografa

Definicin

Ejemplos
CGL (Cromatgrafo de
Gases)
HPLC (Cromatgrafo de
Lquidos)

Cromatografa en Capa Fina

Cromatografa en Columna

Origen de la cromatografa
M. TSWEET (1903): Separacin de mezclas de
pigmentos vegetales en columnas rellenas
con adsorbentes slidos y solventes varios.
ter de
petrleo
mezcla de pigmentos

CaCO3

pigmentos
separados

Principios bsicos
Muestra

Fase
Estacionaria

Fase
Mvil

Detector

Clasificacin de las tcnicas


cromatogrficas
SEGN LA NATURALEZA DE LA FASE MVIL

Clasificacin de las tcnicas


cromatogrficas

Clasificacin de las tcnicas


cromatogrficas

Clasificacin de las tcnicas


cromatogrficas
Segn el mecanismo:

Clasificacin de las tcnicas


cromatogrficas

MECANISMOS
PARTICIN O REPARTO
Lquido Lquido

Gas Lquido

PERMEACIN EN
GELES

Las molculas pequeas


quedan retenidas en los
poros del gel
Las molculas grandes no
caben en ellos y siguen su
recorrido

Clasificacin de las tcnicas


cromatogrficas

Tcnicas: Elucin

Tcnicas: Elucin

Tiempo

Qu es un cromatograma?

Tiempo
Anlisis
Cuantitativo
Anlisis
Cualitativo

Parmetros de retencin:
Tiempo de retencin (tR)
Muestra
TIEMPO (total)

Fase
Estacionaria

Fase
Mvil

Detector

Caudal
Volumen
de
retencin

Tiempo

Parmetros de retencin:
Tiempo muerto (tM)
Muestra
TIEMPO (sin retencin)

Fase
Estacionaria

Fase
Mvil

Detector

Volumen
muerto

Tiempo

Parmetros de retencin:
Tiempo de retencin ajustado
(tR)
Muestra
TIEMPO (en la fase estacionaria)

Fase
Estacionaria

Tiempo

Fase
Mvil

Detector

Volumen
de
retencin
ajustado

Equilibrio de Distribucin
Constante de
Distribucin

K = [ A ]est. / [ A] mvil = C / C
D
S M
Soluto Soluto
Fase
Estacionari
a

Fase Mvil

Ecuacin
Fundamental de la
Cromatografa

VR = VM + K DV
S

Parmetros de retencin:
Factor de capacidad (k)
_

tR tM
k =
tM
0 < k <
k << 1 elucin muy
rpida
k > 20 elucin muy lenta

Es un parmetro
que describe la
velocidad de
migracin de los
analitos en la
columna

Parmetros de retencin:
Factor de selectividad ()

(
)
t

K
k

R
B D
B
B
=
=
=
(
)
K
k

A D
A
R A

Eficiencia de la columna
cromatogrfica

Eficiencia
Consecuencias de una baja eficiencia:

Eficiencia
Cmo se mide?
Teora de los platos tericos (termodinmica)
COMPARAR

Columna
cromatogrfic
a

Columna de
destilacin

Teora de las velocidades (cintica)

Nmero de platos, N
t
2
2
L
N= ; N=( R ) ; H= t
H

L
t

w
= 2.354 t N = 5.54 ( R )
1/ 2
w
1/ 2

2
R
w = 4 t N = 16(
)
b
w
b

BUENA
EFICIENCIA

Eficiencia
Teora cintica de la
cromatografa

Ecuacin de van Deemter para


la HETP
B
H = A + + Cu
u

A, B y C son constantes
caractersticas de un sistema dado:
efecto de caminos mltiples
efecto de la difusin longitudinal
efecto de la resistencia
transferencia de masa

Existe una velocidad


ptima para operar
con cualquier
columna, a la cual la
HETP alcanza un valor
mnimo

la

Ecuacin de Van Deemter


Trmino A (caminos mltiples)

Direccin
del flujo

A = 2dp

Ecuacin de Van Deemter


Trmino B (difusin
longitudinal)

Direccin
del flujo

D
B
M
=
u
u

Ecuacin de Van Deemter


Trmino Cs (transferencia de
masa en la fase estacionaria)

2
d
2 k
f u
Cs u =
3 (1+ k) 2 Ds

Trmino Cm (Transferencia
de masa en la fase mvil)

d 2
p

C u=
M D

Ecuacin de Van Deemter

Ecuacin de Van Deemter


Efecto del porcentaje de
fase estacionaria

Efecto del tamao de


partcula de relleno

Influencia del caudal de la fase


mvil

= B
optimo
C

min imo

= A + 2 BC

Resolucin

RS =

2( ( t R ) B - ( t R ) A )
WA + WB

Resolucin

Si la relacin
de alturas es
similar

Rs= 1.5 buena separacin (solapamiento


inferior a 0.3%)
Rs = 1.0 solapamiento de 2.2%
Rs = 0.75 separacin insuficiente

Resolucin: Relacin entre Rs,


N y k

2( t - t ) t R 2 - t R1
R = wR 2+ wR1 =
S
w
1
2
2

-t
R
2
R1
w =
2
R
S

Reemplazando en N2:
2

t + t
M
R
2
R
2
R2
2
2
N = 16(
) = 16R (
) = 16R (
)2
2
S t
S t + t -t - t
w
-t
M
2
R 2 R1
R 2 M R1
Introducimos la definicin de :t
t

M +
t
N = 16R 2 ( R1_ )
2
S
1

k K
R
2
=
= 2 = D2
t
K
R1 k1
D1

Resolucin: Relacin entre Rs,


N y k

Resolucin

- 1 k 2
N
)(
)
Rs = (
1 + k 2 4

Selectividad (),
se relaciona con
los
valores
de
retencin relativa
y mide el poder
discriminatorio del
sis-tema
cromatogrfico.
Retencin (k'),
mide la fraccin
de
analito
presente en la FE
y expresa el poder
de retencin del
sistema
cromatogrfico.

Eficiencia (N),
mide la estrechez
relativa de los picos
mediante el nmero
de platos tericos
con que funciona la
columna

Tiempo de anlisis
Fijar un valor de RS aceptable y determinar las
condiciones que permiten obtenerla en el menor tiempo
posible
anlisis por tiempo mnimo

Sea t el tiempo de retencin del soluto ms retenido


t t

(1 k)

L
NH
(1 k)
(1 k)
u
u

introduciendo la expresin del nmero de platos


2
1 k
2

2
2
N 16 R

S k 1

3
1 k
2
H

2
2
t 16 R

2 1 u
S
k
2

Anlisis de los factores que influyen en


el tiempo de anlisis
Para , k, H y u constantes, duplicar la resolucin
implica cuadruplicar el tiempo de anlisis.

Influencia del factor


de capacidad k

Para una resolucin dada, maximizar minimiza el


tiempo de anlisis


441
1

120
1
2

1.05

1.10

Debe minimizarse H/u, por lo tanto es muy importante minimizar el


trmino de transferencia de materia C

El problema general de la
elucin

Efecto de la temperatura sobre


el desarrollo de un
cromatograma
(a) corrida isotrmica a 45C
(b) corrida isotrmica a
145C
(c) programa de temperatura
de 30 a 180C
Para muestras cuyos
componentes presentan un
amplio intervalo de
temperaturas de ebullicin.
es conveniente emplear una
programacin de
temperatura.
Se aumenta la temperatura
de la columna de forma
continua o por etapas, al
mismo tiempo que tiene
lugar la separacin.

Ventajas de una elucin con


gradiente en HPLC