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CULTIVO IN VITRO DE

VEGETALES
EN BIOFABRICAS

Cultivo de tejidos

Presupone el cultivo de plantas o partes


de plantas (explantos
) en un medio de
(
cultivo apropiado
El cultivo se desarrolla en condiciones
de temperatura, humedad, fotoperodo
e irradiancia controlados.
La manipulacin se realiza en cabinas
de flujo laminar
Esta tcnica es importante en la
propagacin de especies de inters
agroforestal
y
agrcola:
micropropagacin

Producen innumerables productos de


importancia
en
la
industria
farmacutica,
cosmtica
y
alimentaria,
como
alcaloides,
compuestos aromticos o pigmentos.
Los cultivos in vitro permiten obviar
los inconvenientes derivados de
condiciones geogrficas, climticas y
de tiempo de produccin.

Cultivo in vitro

Plasticidad

Totipotencialidad
Es

la capacidad de una clula vegetal


de dar lugar al desarrollo de una
planta completa. Las clulas
totipotentes son clulas somticas que
han retenido su capacidad de dividirse
y diferenciarse en una planta madura
si se coloca en el medio adecuado.

Cultivo de clulas
vegetales
Definicin
Cultivo asptico in vitro de cualquier parte
de una planta en un medio nutritivo.
Tipos de cultivos:

cultivo de clulas
cultivo de tejidos
cultivos de rganos

Cultivos vegetales

Cultivos agronmicos

Cultivos in vitro
1.

2.

Cultivos
diferenciados
( races, tallos, embriones,
races
y
tallos
transformados)
Cultivos
indiferenciados
( callos, suspensiones)

Cultivos indiferenciados

Callos : en medio slido,


crecimiento lento, gran
heterogeneidad celular,
Cultivos
en
suspensin: derivan de
los anteriores, en medio
lquido de composicin
adecuada,
crecimiento
ms
rpido
y
homogneo.
Composicin del medio
de cultivo. Fuente de
carbono,
minerales,
vitaminas, fitohormonas
(auxinas, citoquininas)

Callos

Tejidos no diferenciados ( a veces diferenciados),


en divisin activa.
Frecuentemente se desarrollan a partir de heridas .

Medio de cultivo

Mezcla de sustancias en los que las clulas,


tejidos y rganos pueden dividirse y crecer.
Sustancias inorgnicas: N, P, K, Ca, Mg, Cl, Na
Cu, Zn, Mn, Fe, Bo, Mo, Co, I
Suplementos orgnicos complejos: leche de
coco, extracto de levadura.
Reguladores de crecimiento : hormonas.
Fuente de carbono: sacarosa
Con o sin agar: medio semi -slido o lquido .

Reguladores de
crecimiento
Hormonas/ Fitohormonas:

Auxinas: grupo de hormonas vegetales

(naturales o sintticas) que


inducen la elongacin, o en
algunos casos la divisin celular.

Frecuentemente inducen
races adventicias e
inhiben la formacin de
tallos adventicios.

Cytokininas: grupo de hormonas


vegetales (naturales o sintticas) que
inducen divisin celular y
frecuentemente tallos adventicios y
en muchos casos inhiben la
formacin de races adventicias.
Reglas generales para la accin hormonal:
Auxina : Cytokinina = ~1
Callo
Auxina : Cytokinina < 1
Tallo
Auxina : Cytokinina > 1
Races
Son producidos por microorganismos

Terminologa y tcnicas

1. Explanto: porcin de tejido u rgano que se


separa de la planta para iniciar el cultivo.

2. Esterilizacin: procedimiento
eliminacin de microorganismos.

para

la

Autoclave: aparato en el que el medio, material d


vidrio, instrumental, etc., es esterilizado por vapor
bajo presin (121oC, 15 psi, 10-20 min.).
Requerimientos de asepsia: desinfeccin de superficie
del explanto: generalmente usando lavandina
comercial diluido para evitar el desarrollo de
microorganismos.
Cabina de flujo laminar: rea de trabajo, mantenida
estril por el flujo continuo, no turbulento de aire
estril.

Subcultivo: pasaje
de clulas, tejidos,
rganos, etc. Desde
un medio de cultivo
agotado a otro
medio fresco.
Micropropagaci
n: propagacin
vegetativa in vitro
de plantas.

Diferenciacin: desarrollo de clulas o tejidos con una


funcin especfica y/o regeneracin de rganos,
estructuras tipo rganos (races, tallos) o embriones.
Adventicios: desarrollo de rganos (races, yemas, tallos,
flores, etc.) o embriones (embryo-like structures) desde
puntos de origen no usuales, incluyendo callos.

Organognesis
(formacin de rganos)
Formacin de tallos, races, flores, etc.

Regeneracin de una planta


completa!!
Explanto
Organognesis
Formacin de tallos

Formacin de races

Enraizamiento

Tallos
Planta completa

Embriognesis (formacin
de embriones)
Proceso mediante el cual se desarrolla un embrin a partir de
una clula huevo fertilizada o asexualmente desde un grupo
de clulas somticas (embriognesis somtica).

Embriognesis Somtica

Procedimiento para la regeneracin va


embriognesis somtica
1. Iniciacin: callos embriognicos
2. Proliferacin: callos embriognicos, masas
proembriognicas (PEM)
3. Desarrollo y maduracin de embriones :
embriones
4. Germinacin de embriones (Regeneracin)
Estados de desarrollo en dicotiledneas:

Masas proembriognicas
Estado globular
Torpedo
Embrin somtico

Semillas artificiales

Semillas sintticas (artificiales)


1. Produccin en masa de semillas
genticamente mejoradas.
2. Procedimientos:
Encapsular en cpsulas de gel, recubrir con una
cubierta adecuada, almacenar
3. Encapsulacin de embriones somticos:
proteccin, nutricin, permeable al agua,
biodegradable.
Polmeros: gel de alginato, gelatina, agar, goma,
etc.

Variacin Somaclonal

Variacin fenotpica, gentica o epigentica en su


origen.
Permite describir la variabilidad gentica
observada en tejidos regenerados a partir de
cultivos in vitro
Es comn cuando se regeneran plantas a partir
de callos, o cuando los cultivos se establecen a
partir de explantos que no contienen un
meristema pre-organizado.
En muchos casos, el grado de variacin es
proporcional a la duracin del cultivo in vitro.
Se aplica para mejora de cultivos

Aislamiento de
protoplastos

Protoplasto: clula vegetal sin pared celular


Procedimiento:
(1). Digestin de la pared celular: celulasa,
hemicelulasa, pectinasa. Son producidos por
microorganismos.
(2). Regeneracin de la pared celular:
usualmente dentro de las 24 hrs.
(3). Divisin celular: la primera divisin
ocurre dentro de las 24-48 hrs
(4). Proliferacin y diferenciacin

Protoplastos

Aislamiento, cultivo y fusin de


protoplastos

Aplicaciones:
1. Remocin de pared para captacin de
DNA : Microinyeccin y electroporacin
2. estudios de sntesis de pared celular,
transporte de membrana, citoesqueleto.
3. estudio de desarrollo de embriones
somticos.
4. hibridizacin somtica (cybridizacin) de
especies
sexualmente
compatibles
o
incompatibles, por fusin de protoplastos
se obtiene un nuevo germplasma.

Aplicaciones

1. Mantenimiento del background


gentico deseado: micropropagacin.
2. Produccin en gran escala de cultivares
apropiados: embriognesis somtica
3. Sntesis de productos usando tcnicas
de cultivo continuo.
4. Eliminacin de virus y otros patgenos.
5. Regeneracin de plantas obtenidas por
ingeniera gentica.

Cultivos diferenciados

Races
y
tallos
transformados:
obtenidas
por
transformacin gentica
con la bacteria patgena
del suelo Agrobacterium
sp.
Se pueden usar para la
produccin de metabolitos
derivados
de
races,
crecimiento rpido, mayor
estabilidad
gentica,
mayor productividad.

Tecnologa del ADN


recombinante

El uso de la biotecnologa moderna


implica, inicialmente, el conocimiento
y aislamiento de secuencias de ADN
que
corresponden
a
genes
responsables
de
conferir
una
caracterstica deseada (fenotipo)
El aislamiento de los genes de inters
es realizado por medio de tcnicas de
clonado molecular

Clonado molecular

Induccin de la amplificacin de una secuencia


de ADN en un organismo vivo.
Vectores de clonado (plsmidos o virus): vectores
en los que la secuencia de ADN es introducida
usando una DNA ligasa. Cuando es necesario el
fragmento de ADN de inters puede ser liberado
del vector por medio de enzimas de restriccin.
Una vez aislados los genes de inters son
incorporados al organismo blanco resultando en
un organismo genticamente modificado (OGM)
y esta caracterstica adquirida pasa a ser
hereditaria

Es posible transferir genes de


animales, bacterias o virus a las
plantas.
Se amplan los recursos para el
mejoramiento gentico.
Los genes de un organismo que son
insertados en otro se denominan
transgenes y tienen la capacidad de
conferirle a este ltimo una
determinada caracterstica.

Organismos transgnicos

Son excelentes modelos para el


estudio de procesos generales
bsicos como regulacin de la
expresin gnica y la gentica
molecular del desarrollo y
diferenciacin celular
Ofrecen la posibilidad de correccin
de numerosas enfermedades
hereditarias: terapia gnica

Organismos transgnicos

Pueden funcionar como bioreactores para


la produccin de protenas valiosas o con
propsitos industriales
Deben ser capaces de producir la protena
de inters en niveles aceptables sin
comprometer el normal funcionamiento de
sus clulas
Deben tener la capacidad de transmitir esta
caracterstica a las siguientes generaciones
En el caso de ser un organismo multicelular
deben ser capaces de producir la protena
exgena en un rgano definido

Estrategia actual

Acoplar a la secuencia de ADN que codifica


para la protena de inters secuencias de ADN
que contengan seales responsables de dirigir
altos niveles de produccin (promotor) de la
protena deseada en un rgano especfico.
Las tcnicas para la insercin de ADN en
clulas vegetales (transformacin) usadas
son:

Infeccin con Agrobacterium tumefaciens


Electroporacin de protoplastos
Mtodo biolstico

Avances
Los

primeros experimentos a campo con


plantas transgnicas se realizaron en 1986 en
Estados Unidos y en Francia.
En 1996 y 1997 el nmero de pases que
ensay plantas transgnicas a campo aument a
45 habindose realizado en 2 aos mas de 10
mil experimentos.
Los cultivos ms usados fueron: maz, tomate,
soja, batata, algodn, canola.
Las caractersticas genticas introducidas son
tolerancia a herbicidas, resistencia a insectos,
calidad de producto y resistencia a virus.

Clonado de plantas

La tcnica del clonado in vitro es


posible mediante el cultivo de tejidos

Esta tcnica se basa en la


totipotencialidad de las clulas
vegetales, por medio de la
regeneracin in vitro, va
organognesis o embriognesis
somtica

Transformacin

Se producen cambios por insercin de un


gen proveniente de otro organismo
La transferencia de DNA/genes de un
organismo a otro se realiza sin necesidad
de reproduccin sexual.
La transformacin exitosa depende de la
incorporacin estable del gen nuevo en el
genoma de la planta receptora y su
subsiguiente transmisin a sucesivas
generaciones.

Transformacin
Requerimientos
Mecanismo de transferencia del gen
Mecanismos de transferencia indirecta
Mecanismos de transferencia directa

Sistemas de regeneracin

Transformacin indirecta
Mediada por Agrobacterium:
Agrobacterium es una bacteria patgena
del suelo para dicotiledneas y algunas
conferas.
Agrobacterium tumefaciens crown gall
disease (tumors)
Agrobacterium rhizogenes hairy root
disease (hairy roots)
Las Monocotiledneas presentan
resistencia natural a Agrobacterium.

Transformacin

Agrobacterium tumefaciens & crown gall


disease
Crown gall disease produce ndulos anormales
en races. Los rboles jvenes no crecen, en los
rboles adultos la corteza se pudre.
Esta bacteria entra al rbol a travs de heridas.

Transformacin
Agrobacterium tumefaciens

La enfermedad crown gall resulta


de la expresin de genes
codificados por un segmento de
DNA de la bacteria que se
transfiere e integra en forma
estable al genoma vegetal
El fragmento de DNA bacteriano
contiene genes que producen
hormonas cuando se expresan en
las clulas vegetales ocasionando
divisiones y crecimiento
anormales (tumores).
Agrobacterium es un ingeniero
gentico natural(1983).
Es un mecanismo de
transferencia entre reinos

Transformacin
Transformacin mediada por Agrobacterium
Plsmido Ti: plsmido inductor de tumores ( A.
tumefaciens)
Plsmido Ri: plsmido inductor de hairy roots ( A.
rhizogenes)
T-DNA: DNA que se transfiere
1.

2.

genes para sntesis de hormonas: codifican para enzimas


involucradas en la biosntesis de auxinas y citoquinias.
La expresin de estos genes en la clula vegetal causa la
enfermedad de agalla de corona o la formacin de hairy
roots
Secuencias en los bordes: 25 bp direct repeats, borde
derecho (RB) y borde izquierdo (LB),a ambos lados del TDNA. Son los elementos necesarios (en la regin del TDNA ) para dirigir la transferencia del T-DNA.

Transformacin mediada por


Agrobacterium
PlsmidoTi o plsmido Ri:

Genes de sntesis de opinas: responsables de la sntesis de nuevas opinas.

Opinas: derivados de aminocidos o azcares producidos por tejidos


vegetales infectados que son por Agrobacterium como nica fuente de
carbono/nitrgeno.
Clasificacin de los plsmidos Ti y Ri:
Plsmidos Ti: plsmidos Nopalina
Octopine plasmid
Agropine plasmid
Succimanopine plasmid

Plsmidos Ri: plsmidos Manopina


Agropine plasmid
Cucumopine plasmid

Genes involucrados en la transferencia del


T-DNA
Localizados en la regin T-DNA:
1.Genes de sntesis de hormonas
2. Secuencias de los bordes: LB y RB
Localizados en cualquier regin del plsmido Ti:
3.Genes de sntesis de opinas
4. Genes de virulencia
Localizados en el cromosoma de Agrobacterium (4 loci)
Sntesis de fibrillas de celulosa por Agrobacterium para cubrir la superficie de la
clua vegetal(irreversible). Clusters de Agro son entrampadas en la red de
fibrillas de celulosa.
chvA ychvB (linked): sntesis y excrecin de 1,2-glucan
cel locus: sntesis de fibrillas de celulosa
pscA locus: afectan la sntesis de cicloglicanos y cido succinilglicano
att locus: afecta protenas de la superficie celular
Algunos de estos loci se encuentran conservados en otras bacterias del suelo que se
interasocian con plantas

Genes Vir y transferencia de genes T-DNA


Las clulas vegetales se vuelven sensibles a
Agrobacterium cuando son heridas.
El proceso de transferencia se puede dividir en:
En la bacteria: proceso de conjugacin
bacteriana
En la clula vegetal: las clulas heridas producen
compuestos fenlicos de bajo PM que actan
como inductores especficos de los genes de
expresin vir.
Acetosyringona (AS), hirdroxi-acetosyringona (OH-AS)
Estos compuestos fenlicos actan a travs de dos sistemas
para Regular la expresin de los genes vir

Transformacin mediada por


Agrobacterium

Uso del plsmido Ti de Agrobacterium


como vector de transformacin
Se remueven los genes para hormonas
(desarmado)
Para la transformacin de introducen
genes en el plsmido Ti

Clonado de DNA

Genes marcadores para seleccin:


de resistencia a antibiticos

Cassetes:
Promotor + gen + terminador

Transformacin mediada por


Agrobacterium
Ventajas:
Transformacin estable
Desventajas:
No para monocotiledneas

Aplicaciones de las
tcnicas de cultivo
in vitro

Micropropagacin

Mantiene la identidad gentica del


material propagado sin introducir
ninguna variabilidad gentica
Propagacin
clonal
rpida
(floricultura,
fruticultura,
plantas
medicinales, silvicultura)
Eliminacin de virus (cultivo
de
(
meristemas) hibridacin o fusin
somtica (fusin de protoplastos)

Bancos de germplasma
Semillas
sintticas
(embriones
somticos recubiertos de gel de
alginato que tambin encapsula
nutrientes para el desarrollo del
embrin)

Resistencia a insectos
Puede ser obtenida mediante la
utilizacin de inhibidores de
proteasas vegetales o a partir de
toxinas
bacterianas
(Bacillus
thuringiensis), o gen Bt
Como
ejemplos
de
plantas
resistentes a insectos estn el
maz, batata y soja transgnicos

Tolerancia a herbicidas
Esta modalidad engloba a la
mayor parte de las plantas
transgnicas actuales
Ejemplos: maz, eucalipto, soja,
caa de azcar
Un ejemplo cotidiano es la Soja
Roundup Ready

Resistencia a virus

Las perspectivas son cada vez mayores a


medida que aumentan los conocimientos
acerca de fitovirus
Silenciamiento gnico o proteccin mediada
por ARN
Por medio de la tecnologa del Agrobacterium
tumefaciens o de la biolstica y el cultivo de
tejidos, es posible introducir en la planta genes
de la cpside viral posibilitndose as la
adquisicin de resistencia por parte de la
planta.

Alteracin del color floral


Dentro del mercado de la floricultura
se abren nuevas perspectivas con el
clonado de genes asociados con la
coloracin de las flores.
Tambin se abre la posibilidad de
modificar la arquitectura de la
planta y de las flores, las fragancias
y la mayor durabilidad de las flores.

Obtencin de nuevos
productos y alteracin de la
calidad nutricional

La empresa Calgene produjo aceites ricos


en cido esterico.
Se alter la composicin en hidratos de
carbono con vistas a la produccin de
tubrculos de papa, aumento del contenido
de almidn y reduccin de amilosa
En el ao 2000 se inform la obtencin de
arroz genticamente modificado que
produce beta- carotenos, precursor de la
vitamina A

Ingeniera metablica

Es posible alterar rutas metablicas para


permitir que las plantas, o sus clulas,
funcionen como bioreactores (reactores
biolgicos).
Es posible, de esta manera, la produccin de
sustancias de valor farmacolgico, como por
ejemplo, vacunas y biofrmacos.
La manipulacin del metabolismo secundario
de vegetales, por medio de la transformacin
gentica, promete ser una de las
contribuciones ms importantes de la
ingeniera gentica aplicada a la industria.

La
sobre
expresin
constitutiva
de
genes
involucrados
en
la ruta
biosinttica de metabolitos
secundarios podr aumentar
significativamente
la
cantidad
de
compuestos
tiles producidos en plantas.
Los avances en esta rea
permitirn
aumentar
las
productividad de metabolitos
secundarios obtenidos en
cultivos in vitro con la
consiguiente reduccin de
costos
de
produccin
o
logrando la produccin de
nuevos compuestos.

Ejemplos de metabolitos secundarios


producidos por cultivos in vitro de
clulas vegetales
Metabolito secundario

Cultivo productor

Acido rosmarnico

Anchusa officinalis

Ajmalicina

Catharanthus roseus

Berberina

Coptis japonica

Digoxina

Digitlis lanata

Ginsensidos

Panax ginseng

Hiosciamina

Hyoscyamus niger

Nicotina

Nicotiana tabacum

Piretroides

Pyrethrum cinerea

Shikonina

Lithospermum erytrorhizon

Taxol

Taxus cuspidata

Vinblastina

Catharanthus roseus

Biotransformacin
Se usan para realizar reacciones
bioqumicas sencillas en las que
no se necesita diferenciacin ni
crecimiento celular
Hidroxilacin estereoespecfica
en posicin 12- de la - metil
digoxina, glicsido cardiotnico,
por clulas de Digitalis lanata.

Diferencias ms importantes en el cultivo


de clulas microbianas, animales y
vegetales
Caracterstica

Clulas
microbianas

Clulas
animales

Clulas
vegetales

Tamao

1-5 m3

105-106 m3

105-106 m3

Forma de
crecimiento

Clulas
individuales

Individuales o
adheridas a
superficies

En grupos

Tiempo de
generacin

1 hora

20horas

>24 horas

Sensibilidad al
esfuerzo cortante

baja

alta

Alta

Requerimiento de
oxgeno

Hasta 180 mmol l1 -1


h

0.7-1.0 mmol l-1


h-1

0.5-1.8 mmol l1 -1
h

Requerimientos
nutritivos

simples

complejos

Simples

Poblacin celular
alcanzada en cultivo
lquido

1010 clulas ml-1

106 clulas .ml-1

106 clulas .ml-1

Molecular
farming

Qu es?
El Molecular
farming es la
produccin de
protenas de alto
valor agregado en
plantas.

Cmo se hace?
Se usa el mejoramiento
gentico para introducir
y expresar genes que
codifican para protenas
de alto

Transformacin

1 El disco de la hoja es sumergida en una


suspensin bacteriana. LA bacteria "Trojan Horse"
infecta los bordes de la hoja y en este proceso
integra los genes que codifican para la protena de
inters en el genoma vegetal.
2 & 3 Despus de la infeccin los discos se ubican
en medio de seleccin para las clulas que portan el
gen de la protena y regeneran en plntulas. Luego
de aproximadamente seis semanas en medio de
seleccin, un gran nmero de plntulas que portan
el gen de inters son visibles en los bordes.
4 se remueven las plntulas de los bordes de hojas
y se colocan en cajas plsticas transparentes con
medio de enraizamiento.
5 Las plntulas se colocan en macetas y crecen
hasta producir semillas. Estas semillas pueden ser
usadas para la produccin en gran escala de
protenas de inters farmacutico..

Trfico

Proteico

6 Luego de la traduccin, la protena se mover a


travs del retculo endoplsmico y el aparato de
Golgi
para
su
procesamiento,
plegado
y
glicosilacin..
Produccin

en
campo

7 Luego de la cosecha el tejido que acumula la


protena puede ser directamente consumido o la
protena puede ser extrada para un uso posterior.

Por qu en plantas?
En las plantas las protenas se
pueden producir a muy bajos costos y
en grandes cantidades. Tambin son
flexibles y pueden producir una gran
variedad de protenas.

Protenas obtenidas por


Molecular Farming

Reactivos de diagnstico
Vacunas animales
Alimentos animales
Enzimas industriales
Productos farmacuticos para el
hombre

Ventajas del Molecular Farming para la


produccin de protenas de uso
farmacutico y enzimas industriales
1.

Riesgos sanitarios reducidos de contaminacin por


patgenos

2.

Pueden ser escalados a costos relativamente bajos

3.

Son capaces
proteicas

4.

Requieren de infraestructuras limitadas (para cultivo,


cosecha, almacenamiento y procesamiento del
material vegetal)
No se requiere, en muchos casos, la purificacin de la
protena (por ej. Procesamiento de alimentos, aditivos
alimenticios, fermentaciones y vacunas orales)

5.

de

modificaciones

postraslacionales

Valor de mercado de los productos


proteicos del molecular farming
1.

2.

3.

La demanda del mercado de protenas


para la industria farmacutica se
incrementa
Las protenas expresadas en plantas
resultan al menos 10 veces ms baratas
que las expresadas en otros sistemas (por
ej, microorganismos)
El costo de vacunas expresadas en
plantas , anticuerpos o protenas puede
ser 100- 1000 veces menor

Ventajas de los vegetales como


bioreactores

Las plantas son los productores ms


eficientes de protenas
son bioreactores escalables
presentas ventajas en cuanto a costos
Las clulas vegetales son similares a las
humanas en cuanto a:
Maquinaria para sntesis proteica
Pauta de lectura del cdigo gentico
Ensamble, plegamiento y secrecin de
protenas complejas

Anticuerpos
recombinantes en
vegetales
Plantibodies

Los Anticuerpos producidos en plantas


pueden ser utilizados en especialidades
medicinales?

Los anticuerpos producidos en plantas


son seguros y efectivos.

Los glicanos vegetales pueden ser


inyectados.

Son para administracin oral, inhalatoria


o tpica.

Las regulaciones de FDA y USDA estn


evolucionando?

Etapas del proceso


1.

2.

3.

4.

Clonado y expresin de los genes


de inters
Regeneracin y seleccin de las
plantas
Recuperacin y purificacin de la
protena
Caracterizacin del producto final

Introduccin de genes de
anticuerpos en plantas
1.
2.

3.

4.

Transformacin con Agrobacterium.


Microinyeccin de cDNA en ncleo
antes de reimplantarlo en una clula
anucleada (Stieger et al. 1991)
Expresin transiente en hojas
(Schouten et al, 1996)
Mtodos biolsticos

Comparacin de Anticuerpos
derivados de Plantas y Cultivos
Animales

Secuencia Peptdica: idntica


Afinidad: idntica
Tipos de Anticuerpos: El sistema vegetal es ms
verstil
Pueden producir isotipos incluyendo IgA
secretoras
Procesamiento Post-transduccional: diferente
ncleo de glicano idntico, azcar terminal
diferente
Antigenicidad & clearance: aparentemente
idnticos

Anticuerpos efectivos producidos en


vegetales

Anti-Streptococcus mutans (Guys 13)

Previene caries dental en humanos

Las sIgA 10X de plantas son ms estables que


IgG

Nature Medicine 1998

Anti-Herpes simplex virus (HSV8)

Previene la transmisin del herpes vaginal

Probado en ratones con PAbs de arroz y soja

Nature Biotechnology 1998

Aplicaciones de la
Inmunomodulacin

Estudiar la funcin de un antgeno o


incluso de un epitope en las plantas
Modificar caracteres agronmicos
Inmunizar a la planta contra un
determinado agente.

Inmunomodulacin de blancos
endgenos

Actividad de fitohormonas
ABA (scFv en ER de tabaco)
Giberellina (A 19/24 scFv en tabaco)
Inactivacin de producto final en la ruta
biosinttica de una hormona (ABA)
Modulacin de la actividad del receptor
hormonal (scFv contra fitocromo)
Inhibicin enzimtica (DFR en Petunia
hybrida)

Inmunizacin intra y
extracelular

Tabaco que expresa anticuerpos contra


la cubierta viral proteica de TMV
Nicotiana benthamiana que expresa
anticuerpos contra el virus BNYVV
Tabaco que expresa scFv contra
factores de infectividad de fitoplasmas
y espiroplasmas
Tabaco resistente a nematodes (IgM
contra Meloidogyne incognita)

Anticuerpos contra
nematodes

Genes que codifican para enzimas blanco: p.ej celulasas


las cuales han sido clonadas de M. incognita as como de
otros nematodes de este tipo. Estas enzimas desempean
un papel fundamental en la migracin hacia raz y son un
excelente punto de partida para la seleccin de
anticuerpos .Se han generado tambin anticuerpos que
bloquean el inicio del ciclo celular para evitar la induccin
de las clulas de alimentacin por el nematode.
Se han obtenido y caracterizado por su capacidad para
inhibir sus blancos anticuerpos contra las protenas de
TSWV :N (importante para la replicacin viral), G1/G2
(captacin por thrips) y NSm (distribucin en la planta).
Se han hallado motivos estabilizadores que aseguran un
nivel de expresin significativo de los anticuerpos y sus
fragmentos en el citosol de la clula vegetal.

Perspectivas
1.
2.
3.
4.
5.
6.

7.
8.

9.

Regulacin metablica.
Plantas con resistencia a virus mediada por
plantibodies
Reduccin del uso de pesticidas: resistencia a pestes e
insectos
Modulacin de antgenos (DH4R)
Estudio del rol fisiolgico de hormonas.
Remocin de polutantes de suelos (Ac contra txicos
orgnicos, compuestos potencialmente carcinognicos,
herbicidas)
Remocin de polutantes de aguas ( inmovilizacin el Ac
en soporte slido)
Biofarming: produccin de molculas industriales o
farmacuticas basada en cultivos vegetales. (1% TSP:
expresin costo-efectiva). Anlisis de especie, rgano.
diagnstico

Downstream processing

Importante para utilizacin ex planta


Alcaloides y otras sustancias txicas
encarecen y dificultan la purificacin
(tabaco)
Ausencia de virus patgenos, priones y
otras sustancias tpicas de sistemas de
produccin animales.
Posibilidad de usar un tejido vegetal
comestible para inmunidad a nivel de
mucosas (purificacin)

Cul es el desafo?

Desarrollo de drogas para el tratamiento de


ciertas enfermedades; las protenas son la
clase en ms franco desarrollo para la
prevencin y tratamiento de enfermedades.
Desarrollo de resistencia contra patgenos
(microorganismos
y
patgenos
ms
complejos como nematodes)
Anlisis
y
manipulacin
de
rutas
biosintticas.
Seguridad y Eficiencia
tica