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LA INGENIERA

GENTICA y sus
aplicaciones.

NDICE
1. Introduccin.
2. Conceptos frecuentes en ingeniera
gentica.
3. Clonacin de un gen.
4. Aplicaciones de la ingeniera
gentica (biotecnologa).
5. Ingeniera gentica y biotica.

1. Introduccin
Biotecnologa:

utilizacin de los seres vivos o sus componentes para realizar


determinados procesos qumicos con fines industriales.
Biotecnologa clsica: uso de microorganismos no manipulados genticamente.
(tal cual se encuentran en la naturaleza)

Biotecnologa moderna basada en aplicaciones de la ingeniera gentica: organismos


manipulados genticamente.

La ingeniera es el arte de aplicar los conocimientos cientficos a la invencin,


perfeccionamiento y utilizacin de la tcnica industrial en todas sus dimensiones

Ingeniera gentica:

conjunto de procedimientos que permiten modificar


artificialmente el genoma de los seres vivos / alteracin, intencionada, del genoma
de un ser vivo.
aislar, modificar, replicar y expresar el material gentico

Tecnologa del ADN recombinante: mtodos y tcnicas que se aplican en IG

2. Conceptos frecuentes en ingeniera gentica.


ADN recombinante: es una molcula de ADN formada por la unin artificial de ADN
proveniente de dos organismos diferentes.
Clon: copia idntica.
- de una molcula
- de una clula
- de un organismo
Organismo transgnico: incorporan en su genoma de forma estable ADN procedente de
otras especies.
O.G.M. (GMO): organismo genticamente modificado.
Secuenciacin: tcnica que permite conocer la secuencia de bases del ADN (o de aa de
una protena...)
PCR: reaccin en cadena de la polimerasa. Tcnica que permite aumentar el n de copias
de un fragmento de ADN.
Vectores: elementos genticos que sirven para introducir genes extraos en clulas
hospedadoras.
Enzimas de restriccin: enzimas endonucleasas que cortan el ADN en puntos concretos
(secuencias especficas).
Clula transformada: clula que contiene y expresa ADN forneo.

3. Clonacin de un gen
3.1. Aislamiento y obtencin del gen.
3.2. Seleccin del vector de clonacin.
3.3. Formacin del ADN recombinante.
3.4. Inclusin del ADNr en una clula hospedadora.
3.5. Deteccin del gen clonado.
3.6. Multiplicacin de las clulas que contienen el gen clonado.

3. Clonacin de un gen

3.1. Aislamiento y obtencin del gen:

A ) Proc: corte del ADN cromosmico con ER para obtener el gen o genes.
seleccin del gen a partir de una genoteca

Enzimas de restriccin = Tijeras moleculares

Euc: sntesis a partir de ARNm


ADN sinttico
Biblioteca de ADNc

3. Clonacin de un gen

3.1. Aislamiento y obtencin del gen:


Anlisis de los fragmentos obtenidos.
Los fragmentos obtenidos se pueden separar por tamaos mediante la tcnica de
electroforesis

Los fragmentos se desplazan en relacin inversa con su tamao, los fragmentos ms


pequeos se mueven rpidamente, mientras que los grandes lo hacen muy lentamente.

3. Clonacin de un gen

3.2. Seleccin del vector de clonacin.


Vector de clonacin: pequea molcula de ADN en la que se inserta el gen que
queremos clonar que tienen capacidad para replicarse dentro de las clulas
hospedadoras de forma independiente (vehculo del gen).
Seleccin del vector:(tamao y caractersticas del gen).
Tipos de vectores:

1. Plsmidos
2. Bacterifagos.
3. Csmidos.
4. YACs (cromosomas artificiales de levadura).
5. Genomas de los virus modificados.

Marcadores

3. Clonacin de un gen

Adems del origen de replicacin, los vectores de clonacin deben


llevar otros genes denominados marcadores, que sirven para
identificar las clulas que contienen el vector de clonacin.
Se suelen utilizar :

Genes de resistencia a antibiticos. (bacterias crecen en medios


con el al antibitico)

Genes de luminiscencia. (la clula que contenga el gen que se


quiere clonar, tendr la propiedad de emitir luz). Este sistema se
emplea cuando la clula hospedadora es una clula eucariota.

3. Clonacin de un gen

3.3. Formacin del ADN recombinante

Gen que queremos clonar


CORTADO CON E.R.

Vector

ADN recombinante

CORTADO CON E.R.

ENZIMAS: ADN LIGASAS

3. Clonacin de un gen
INSERCIN DEL GEN EN VECTORES DE CLONACIN
PLSMIDOS

- ADN circular
- tamao menor que el del
cromosoma.
- origen de replicacin

3. Clonacin de un gen
INSERCIN DEL GEN EN VECTORES DE CLONACIN

Bacterifagos

(Ej. Fago lambda, fago M13)


Se inserta el gen deseado en un fragmento de ADN
vrico.

B
Posteriormente se ensamblarn las distintas partes
del virus.

As quedar el virus completo. En el siguiente paso


se insertar este ADN por el proceso de la
TRANSDUCCIN.

INSERCIN DEL GEN EN VECTORES DE CLONACIN

Csmidos

Son
plsmidos
que
contienen el fragmento de ADN
deseado que posee un extremo
cos (borde cohesivo procedente
del genoma del fago lambda) y se
empaqueta en el interior de un
fago.

Se construye el csmido
uniendo los tres elementos
gnicos, y el resultado final es
poder introducir en la clula
receptora fragmentos largos de
ADN.

3. Clonacin de un gen

3. Clonacin de un gen
3. 4. Introduccin del ADNrec en la clula hospedadora
para que sta, al multiplicarse, origine un clon celular que lleve el gen concreto.

Transformacin.
Transduccin

Euc: electroporacin, microinyeccin,


pistola de genes, Agrobacterium...

Clula hospedadora *:
- crecimiento rpido
- ausencia de patogenicidad
- captar o tomar
e incorporar ADN del medio.

3. Clonacin de un gen

3.5. Deteccin del gen clonado.


(deteccin de clulas transformadas).

A travs de los marcadores:


Ejemplo de resistencia a un antibitico
por ejemplo un gen de resistencia a la
ampicilina) las bacterias que se
consideran transformadas, sern
aquellas que sobrevivan en un medio
con ampicilina.

A travs de sondas
marcadas: por complementariedad
con el gen clonado (hibridacin).

3. Clonacin de un gen

3.6. Multiplicacin de las clulas que contienen el gen


clonado.

Poner a las bacterias en un medio de cultivo apropiado para que se


multipliquen (lo hace tambin el vector con el gen que interesa).
El resultado es que se obtiene un clon de clulas que llevan todas
ese gen de inters.
Se pueden formar por tanto diferentes clones con genes de inters para el
hombre.
Cuando contienen el conjunto de genes de un organismo se denominan
biblioteca genmica o genoteca.
Si se clonan genes para que se expresen (produzcan la protena) dentro de
la clula hospedadora necesitamos vectores de expresin (sec reguladoras
de transcripcin y traduccin) y el gen clonado ha de ser ADNc.

Secuenciacin
Tcnica del dideoxi.
Secuenciacin automtica.

PCR: reaccin en cadena de la polimerasa.


(Aumenta el n de molculas de ADN)
Ciclos de 3 fases:

Desnaturalizacin.

Anillamiento.

Elongacin.

APLICACIONES DE LA PCR
Secuenciacin
Una de las razones mas comunes para el uso de la PCR es la
formacin de suficiente cantidad de ADN molde para su secuenciacin.
Es mucho mas sencillo y rapido que la clonacin en clulas.
Estudios evolutivos
Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya
extinguidos, como del mamut, o restos antiguos humanos. Se pueden
comparar estos genes con los genes semejantes de organismos
actuales y poder reconstruir rboles filogenticos.
El PCR tambin se ha utilizado para conseguir el mapa del genoma
humano.
Huellas dactilares del ADN.
La determinacin de las huellas dactilares genticas constituye una de
las aplicaciones mas interesantes de la PCR.
Mediante esta tcnica es posible comparar muestras diferentes de ADN
para comprobar si pertenecen al mismo individuo o no, o si existe
parentesco entre ellas.
Esta tcnica se aplica actualmente en Medicina forense e
investigaciones policiales, con el fin de identificar indiividuos a partir
de muestras biolgicas, como sangre, semen, piel o cabellos. Tambin
se utiliza en las pruebas de paternidad.

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


a) Aplicaciones mdicas

Produccin de sustancias con efecto teraputico.


Tcnicas de diagnstico clnico.
Terapia gnica.
Transplantes de rganos.

b) Aplicaciones agropecuarias.
Plantas transgnicas. Alimentos transgnicos.
Animales transgnicos.

c) Otras
Aplicaciones de la PCR y otras tcnicas para clonar genes,
hacer estudios evolutivos, arqueolgicos, forenses...
Industria alimentaria:aditivos alimentarios, deteccin de fraudes,
elaboracin de productos lcteos y vinos...

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


a) En Medicina

OBTENCIN DE PROTEINAS DE MAMFEROS.

Ej. Insulina humana en Saccharomyces cerevisae

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


a) En Medicina

OBTENCIN DE VACUNAS RECOMBINANTES. Ej. Hepatitis B, meningitis


meningoccica y rabia.

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


a) En Medicina
DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES DE ORIGEN GENTICO. Ej. Corea de
Huntington.

b) Agropecuarias

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica

CMO SE HACE UNA PLANTA TRANSGNICA?


1. tcnicas

indirectas: transformacin de clulas mediada por Agrobacterium tumefaciens.

2. tcnicas directas: electroporacin, microinyeccin, liposomas y mtodos qumicos.

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica

APLICACIONES DE LAS PLANTAS TRANSGNICAS

Resistencia a herbicidas, a insectos y a


enfermedades microbianas. Ej. Bacillus
thuringiensis (toxina - Bt)
Incremento del rendimiento fotosinttico
transfieren los genes de la ruta fotosinttica de
plantas C4 que es ms eficiente.
Mejora en la calidad de los productos
agrcolas Tal es el caso de la colza y la soja
transgnicas que producen aceites modificados,
que no contienen los caracteres indeseables de
las plantas comunes.
Sntesis de productos de inters comercial
Existen ya plantas transgnicas que producen
anticuerpos animales, interfern, e incluso
elementos de un polister destinado a la
fabricacin de plsticos biodegradables.
Asimilacin de nitrgeno atmosfrico se
ensaya la transfeccin del gen nif responsable
de la nitrogenasa.

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


Cmo se hace un animal transgnico?
La transgnesis puede efectuarse siguiendo dos estrategias distintas:
Transgnesis por microinyeccin de zigotos

Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias.

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


APLICACIONES DE LOS ANIMALES TRANSGNICOS

Investigacin:
La posibilidad de estudiar a nivel molecular el desarrollo embrionario y su
regulacin.
Manipular de forma especfica la expresin gnica in vivo.
Estudiar la funcin de genes especficos.
La correccin de errores innatos de metabolismo mediante terapia gnica.
Biotecnologa:

Poder utilizar a mamferos como biorreactores para la produccin de


proteinas humanas.
Mejora de sus caractersticas para obtener mayor rendimiento econmico.

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


CMO SE CLONA UN ANIMAL?
El principio de la clonacin est en la obtencin de organismos idnticos
genticamente, y por tanto morfolgica y fisiolgicamente.
Mtodos:
Por DISGREGACIN DE CLULAS EMBRIONARIAS:separar las clulas de
un embrin en diferentes estados de desarrollo, desde el estado de 2 clulas
hasta el estado de mrula. Cada clula separada puede funcionar como un zigoto
que puede desarrollarse para dar un individuo completo.
Por TRANSFERENCIA NUCLEAR: Se toman clulas embrionarias en fase de
mrula o blstula, se cultivan in vitr ,y despus se transfieren a ovocitos a los
que se les ha quitado el ncleo.
Se provoca la fusin de las dos clulas animales de modo que el ncleo de la
clula embrionaria quede en el interior del ovocito, pudiendo ste empezar a
funcionar como un zigoto.

CLONACIN POR TRANSFERENCIA NUCLEAR

4. Aplicaciones de la ingeniera gentica


C) Medioambientales.
La biorremediacin consiste en recuperar el medio ambiente contaminado mediante la
Biotecnologa. Existen microorganismos capaces de captar y fijar metales pesados.
Otros permiten recuperar un suelo o aguas contaminadas

Depuracin de aguas residuales (ver biotecn. I)


Vertidos de petrleo: cepas que puedan trabajar a temperaturas muy
bajas o que sus necesidades nutricionales se adapten al medio marino en el
que van a desarrollar.
Residuos generados por explotaciones mineras: se est trabajando con
cepas descontaminadoras, que puedan concentrar metales pesados o que
aceleren el ritmo de descontaminacin. Entre las plantas con actividad
fitorremediadora se encuentran las crucferas del gnero Brassica, capaces
de acumular metales pesados y arsnico. Estas plantas son objeto de
estudio y seleccin en los laboratorios de clonacin.

5. Ingeniera gentica y biotica.


PROYECTO GENOMA HUMANO
El Proyecto Genoma Humano comenz en 1990 en los Estados Unidos con un
presupuesto de 375.000 millones de pesetas y un plazo de 15 aos, con el objetivo
de analizar molecularmente la herencia gentica humana.
Se trata de realizar mapas de cada uno de los cromosomas humanos. Implica dividir
los cromosomas en pequeos fragmentos que puedan ser caracterizados y
posteriormente ordenados en el cromosoma.
El 26 de junio de 2000: el genoma humano fue descifrado en sus partes esenciales

Mapas genticos: posicin relativa de los


diferentes genes. Para esta confeccin se estn
estudiando la transmisin de caracteres
hereditarios, capaces de ser objetivados de una
generacin a otra en grandes familias.
Por ejemplo, en Estados Unidos se han localizado
muchos genes gracias a estudios realizados en
comunidades mormonas, cuya endogamia es
notoria.
En 1994 se termin el primer mapa gentico de
todo el genoma humano.

Mapas fsicos: Se obtiene la secuencia de


nucletidos de un gen. Se realiza
fundamentalmente mediante la electroforesis en
geles de distintos fragmentos de ADN y la ayuda
de ordenadores.
En 2000 se termin el mapa fsico del genoma
humano.

REPERCUSIONES TICAS DE LA INGENIERA GENTICA


1975- Reunin Internacional en el Centro de Conferencias Asimolar de Pacific Grove, en
California: directrices para el trabajo con el ADN recombinante.

1993 - inicio de la investigacin gentica en la especie humana, clonacin de embriones, etc.=


creacin de un Comit Internacional de Biotica, UNESCO.
Problemas sanitarios. Aparecin de nuevos microorganismos patgenos que provoquen enfermedades
desconocidas, o el uso de frmacos de diseo provoquen efectos secundarios no deseados.
Problemas ecolgicos. La liberacin de nuevos organismos en el ambiente puede provocar la
desaparicin de especies contra las cuales se lucha, con consecuencias an desconocidas, ya que
cumplen una funcin en la cadena trfica de la naturaleza. Se puede pensar en posibles nuevas
contaminaciones debidas a un metabolismo incontrolado.
Problemas sociales y polticos. Las aplicaciones de la Biotecnologa en el campo de la produccin
industrial, agrcola y ganadera, pueden crear diferencias an ms grandes entre pases ricos y pobres.
El sondeo gnico en personas puede llevar a consecuencias nefastas en la contratacin laboral, por
ejemplo, y atenta contra la intimidad a que tiene derecho toda persona.
Problemas ticos y morales. La experimentacin en la especie humana puede atentar contra la
dignidad de la misma. Poder conocer y modificar el patrimonio gentico humano puede ser una puerta
abierta al eugenismo.
[Terapia Gnica en clulas somticas para corregir enfermedades. Prohibido en la lnea germinal ]

Biotica
Conocimientos y avances
Gentica: patrimonio de la

en

Ingeniera

humanidad

Los Organismos Internacionales creados para


ello han de ser capaces de vencer las
reticencias que crean los intereses polticos y
econmicos, logrando una legislacin adecuada
y justa, que recoja las voces razonables de
todos los sectores sociales.