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Cromatografa de Gases

1.- Introduccin
La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica
en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza
de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por
el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los
otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona
con las molculas del analito; su nica funcin es la de
transportar el analito a travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la
cromatografa gas-slido (GSC) y la cromatografa gaslquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms
ampliamente, y que se puede llamar simplemente
cromatografa de gases (GC).

Cromatografa de Gases
2.- Introduccin
En la Cromatrografa Gas Slido (GSC) la fase
estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella
se produce mediante el proceso de adsorcin.
Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal,
es el que ha provocado que este tipo de cromatografa
tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito
sobre la superficie es semipermanente y se obtienen picos
de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin
de especies gaseosas de bajo peso molecular.
La cromatografa gas lquido (GLC) utiliza como fase
estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la
superficie de un slido inerte.

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3.- Instrumentacin
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de
gases. ste consta de diversos componentes
como:
Gas portador
Sistema de inyeccin.
Columna (generalmente dentro del horno)
Detector

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4.- Instrumentacin
Diagrama de un cromatgrafo de gases

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5.- Portador de Gas (gas portador)
El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su
reaccin con el analito o la columna. Generalmente se
emplean gases como el helio, argn, nitrgeno, hidrgeno o
dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones
depende del tipo de detector empleado. El almacenaje del
gas puede ser en balas normales o empleando un generador,
especialmente en el caso del nitrgeno y del hidrgeno.
Luego tenemos un sistema de manmetros y reguladores de
flujo para garantizar un flujo estable del gas, como puede ser
un tamiz molecular..

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6.- Gas Portador, (Cont.)
Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos
niveles: un primer manmetro se sita a la salida de la
bala o generador del gas y el otro a la entrada del
cromatgrafo, donde se regula el flujo. Las presiones de
entrada varan entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a
caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y
de 1 a 25 mL/min en columnas capilares. Para
comprobar el caudal se puede utilizar un rotmetro o un
simple medidor de pompas de jabn, el cual da una
medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a
la columna.

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7.- Sistema de Inyeccin
La inyeccin de muestra es una operacin crtica, ya
que se debe inyectar una cantidad adecuada, y debe
introducirse de tal forma (como un "tapn de vapor") que
sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas
de salida; este efecto se da con cantidades elevadas de
analito.
El mtodo ms utilizado emplea una micro jeringa (de
capacidades de varios microlitros) para introducir el
analito en una cmara de vaporizacin instantnea. Esta
cmara est a 50C por encima del punto de ebullicin
del componente menos voltil, y est sellada por una
junta de goma de silicona septa o septum.

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8.- Sistema de Inyeccin (cont.)
Inyector de muestra para un GC
Si es necesaria una reproducibilidad del tamao de muestra
inyectado se puede usar una vlvula de seis vas o vlvula de
inyeccin, donde la cantidad a inyectar es constante y
determinada por el tamao del bucle de dicha vlvula.
Si la columna empleada es ordinaria, el volumen a inyectar
ser de unos 20 L, y en el caso de las columnas capilares
dicha cantidad es menor, de 10-3 L. Para obtener estas
cantidades, se utiliza un divisor de flujo a la entrada de la
columna que desecha parte del analito introducido.
En caso de muestras slidas, simplemente se introducen en
forma de disolucin, ya que en la cmara de vaporizacin
instantnea el disolvente se pierde en la corriente de purga y
no interfiere en la elucin.

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9.- Sistema de Inyeccin (cont.)
Inyector de muestra para un Cromatgrafo de Gases

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10.- Columnas y sistema de control de
temperatura
En GC se emplean dos tipos de columnas: las
empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o
capilares. Estas ltimas son ms comunes en la
actualidad, debido a su mayor rapidez y eficiencia. La
longitud de estas columnas es variable, de 2 a 50 metros,
y estn construidas en acero inoxidable, vidrio, slice
fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de
ser introducidas en un horno, las columnas suelen
enrollarse en una forma helicoidal con dimetros de 10 a
30 cm., dependiendo del tamao del horno.

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11.- Columnas y control de temperatura
El grado de separacin de los diferentes analitos depende de la
temperatura, por ello esta debe ser ajustada con precisin de
dcimas de grado: Dicha temperatura depende del punto de
ebullicin del analito o analitos, usualmente se ajusta a un valor
igual o ligeramente superior a l.
Para estos valores, el tiempo de elucin va a oscilar entre 2 y
30-40 minutos.
Si tenemos varios componentes con diferentes puntos de
ebullicin, se ajusta la llamada rampa de temperatura con lo
cual sta va aumentando ya sea de forma continua o por
etapas.
En muchos casos, el ajuste correcto de la rampa puede
significar separar bien o no los diferentes analitos.
Es recomendable utilizar temperaturas bajas para la elucin,

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12.- Detectores
El detector se encarga de determinar cundo ha
salido el analito por el final de la columna.
Las caractersticas de un detector ideal son:
Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar
con precisin cundo sale analito y cuando sale
slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre
10-8 y 10-15 g/s de analito.
Respuesta lineal al analito con un rango de varios
rdenes de magnitud.
Tiempo de respuesta corto, independiente del
caudal de salida.

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13.- Detectores (cont.)
Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por
ejemplo desde temperatura ambiente hasta unos
350-400C, temperaturas tpicas trabajo.
No debe destruir la muestra.
Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a
cantidades iguales de analito debe dar salidas de
seal iguales.
Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de
operadores inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos, o
Respuesta selectiva y altamente predecible para un
reducido nmero de analitos.

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13.- Tipos de Detectores
Detector de ionizacin de llama (FID, Flame Ionization
Detector).
Detector de conductividad trmica (TCD, Thermical
Conductivity Detector).
Detector termoinico (TID, Thermo Ionic Detector).
Detector de captura de electrones (ECD, Electron-Capture
Detector).
Detector de emisin atmica (AED, Atomic Emission
Detector).
Otros detectores:
Detector fotomtrico de llama (PFD), empleado en
compuestos como pesticidas e hidrocarburos que
contengan fsforo o azufre. En este detector el gas eluido
pasa por una llama hidrgeno/oxgeno donde parte del
fsforo se convierte en HPO, el cual emite a = 510 y 526
nm, y simultneamente el azufre se convierte en S2, con
emisin a = 394 nm.

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15.- Tipos de Detectores (cont.)
Se han podido detectar otros elementos, como
algunos halgenos, nitrgeno, estao, germanio y
otros.
En el detector de fotoionizacin (PID), el gas eluido al
final de la columna se somete a una radiacin
ultravioleta con energas entre 8,3 y 11,7 eV,
correspondiente a una = 106-149 nm.
Mediante la aplicacin de un potencial a la celda de
ionizacin se genera una corriente de iones, la cual es
amplificada y registrada.

16.- Columnas y Tipos de fases


estacionarias
Columnas de relleno
Las columnas de relleno consisten en unos tubos de vidrio,
metal (inerte a ser posible como el acero inoxidable, cobre
o aluminio) o tefln, de longitud de 2 a 3 metros y un
dimetro interno de unos pocos milmetros, tpicamente de
2 a 4. El interior se rellena con un material slido, finamente
dividido para tener una mxima superficie de interaccin y
recubierto con una capa de espesores entre 50 nm y 1 m.
Para que puedan introducirse en el horno, se enrollan
convenientemente.
El material de relleno ideal consiste en pequeas
partculas, esfricas y uniformes, con una buena resistencia
mecnica, para tener una mxima superficie donde
interaccionar la fase estacionaria y el analito. La superficie
especfica mnima ha de ser de 1 m/g.

17.- Columnas y Tipos de fases


estacionarias
Columnas de relleno (Cont.)
Como todos los componentes de columnas para GC,
debe ser inerte a altas temperaturas (~400C) y
humectarse uniformemente con la fase lquida
estacionaria durante el proceso de fabricacin. El
material preferido actualmente es la tierra de diatomeas
natural, debido a su tamao de poro natural. Estas
especies, utilizaban un sistema de difusin molecular
para tomar nutrientes del medio y expulsar sus residuos.
Por tanto, debido a que el sistema de adsorcin
superficial del analito y la fase estacionaria es parecido,
son materiales especialmente tiles.

18.- Columnas y Tipos de fases


estacionarias
Columnas capilares
Las columnas capilares son de dos tipos bsicos: las de
pared recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto
(SCOT).
Las WCOT son simplemente tubos capilares donde la
pared interna se ha recubierto con una finsima capa de
fase estacionaria.
Las columnas SCOT tienen en su parte interna una fina
capa de material adsorbente como el empleado en las
columnas de relleno (tierra de diatomeas) donde se ha
adherido la fase estacionaria.
Las ventajas de las SCOT frente a las WCOT es la mayor
capacidad de carga de esta ltima, ya que en su
fabricacin se emplean mayores cantidades de fase
estacionaria, al ser la superficie de intercambio mayor.

19.- Columnas y Tipos de fases


estacionarias
Columnas capilares (Cont.)
Las columnas WCOT se fabrican a partir de slice
fundida, conocidas como columnas tubulares abiertas
de slice fundida o FSOT.
Estas columnas se fabrican a partir de slice
especialmente pura, sin apenas contenido de xidos
metlicos. Debido a la fragilidad inherente a este
material, en el mismo proceso de obtencin del tubo
se recubre con una capa de poliimida, de esta forma la
columna puede enrollarse con un dimetro de unos
pocos centmetros. Estas columnas, con propiedades
como baja reactividad, resistencia fsica y flexibilidad,
han sustituido a las WCOT clsicas.

20.- Columnas y Tipos de fases


estacionarias
Columnas capilares (Cont.)
Las columnas FSOT tienen dimetros internos variables,
entre 250 y 320 m (para columnas normales) y 150-200 m
para columnas de alta resolucin. Estas ltimas requieren
menor cantidad de analito y un detector ms sensible, al eluir
menor cantidad de gas. Existen asimismo columnas
macrocapilares con dimetros de hasta 530 m, que admiten
cantidades de analito comparables a las de relleno pero con
mejores prestaciones.
En estas columnas existe un problema debido a la adsorcin
del analito sobre la superficie de la slice fundida, adsorcin
debida a la presencia de grupos silanol (Si-OH), los cuales
interaccionan fuertemente con molculas polares orgnicas.
Este inconveniente se suele solventar inactivando la
superficie por sililacin con dimetilclorosilano (DMCS). La
adsorcin debida a los xidos metlicos se ve paliada en
gran parte por la elevada pureza de la slice empleada.

21.- Columnas y Tipos de fases


estacionarias
Fase estacionaria
Las propiedades necesarias para una fase estacionaria
lquida inmovilizada son:
Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y
factor de selectividad ) adecuados al analito.
Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase
estacionaria debe ser al menos 100C mayor que la
mxima temperatura alcanzada en el horno.
Baja reactividad.
Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin
durante la elucin.

22.- Columnas y Fases estacionarias


Fase estacionaria (Cont.)
Existen varios disolventes con estas caractersticas.
En la seleccin, debe tenerse en cuenta la polaridad del
analito, ya que a mayor polaridad del analito, mayor polaridad
deber tener la fase estacionaria. Algunas fases, son:
*Polidimetilsiloxano, fase no polar, tiles para hidrocarburos,
aromticos, polinucleares, drogas, esteroides y PCBs.
*Poli(fenilmetidifenil)siloxano (10% fenilo), para steres
metlicos de cidos grasos, alcaloides, drogas y compuestos
halogenados.
*Poli(fenilmetil)siloxano (50% fenilo), para drogas, esteroides,
pesticidas y glicoles.
*Poli(trifluoropropildimetil)siloxano, para aromticos clorados,
nitroaromticos, bencenos alquilsustituidos.
*Polietilenglicol, para compuestos como glicoles, alcoholes,
teres, aceites esenciales.
*Poli(dicianoalildimetil)siloxano, para cidos grasos
poliinsaturados, cidos libres y alcoholes.

23.- Columnas y Tipos de Fases


estacionarias
Fase estacionaria (Cont.)
Otro tipo de fase estacionaria son las quirales, lo cual
permite resolver mezclas enantiomricas. Este tipo de
fases suelen ser aminocidos quirales o algn derivado
adaptado al trabajo en columna.
El grosor de la pelcula vara entre 0,1 y 5 m; el grosor
depende de la volatilidad del analito. As, un analito
muy voltil requerir una capa gruesa para aumentar el
tiempo de interaccin y separar ms efectivamente los
diferentes componentes de la mezcla. Para columnas
tpicas (dimetros internos de 0,25 o 0,32 mm) se
emplean grosores de 0,25 m, y en las columnas
macrocapilares el grosor sube hasta 1 m. El grosor
mximo suele ser de 8 m

Cromatografa de Gases
24.- Aplicaciones
La Cromatografa de Gases tiene dos importantes campos
de aplicacin:
Por una parte su capacidad para resolver (separar)
mezclas orgnicas complejas, compuestos
organometlicos y sistemas bioqumicos.
Su otra aplicacin es como mtodo para determinar
cuantitativa y cualitativamente los componentes de la
muestra.
Para el anlisis cualitativo se suele emplear el tiempo de
retencin, que es nico para cada compuesto dadas unas
determinadas condiciones (mismo gas portador, rampa de
temperatura y flujo), o el volumen de retencin.
En aplicaciones cuantitativas, integrando las reas de
cada compuesto o midiendo su altura, con los calibrados
adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad
presente de cada analito.