TERAPIA GNICA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULATD DE CIENCIAS QUIMCIAS
TECNOLOGIA FARMACEUTICA 2
DAVID CAMPUES

TERAPIA GNICA

DEFINICIN: Es el proceso por el cual se inserta material gentico en una

clula por medio de vectores, con el fin de hacer que esta produzca
una protena normal.
UTILIDAD: curar enfermedades unignicas
modificar totalmente el sistema inmune
La Terapia gnica se realiza con las siguientes acepciones:

somtica (tratamiento de las clulas enfermas),

germinal (para evitar la transmisin hereditaria de enfermedades)

perfectiva (manipula los genes para mejorar ciertas caractersticas)

eugnica (que busca mejorar cualidades complejas del individuo, tales

como la inteligencia).
Por lo tanto el propsito principal de la terapia gnica es:
Cambiar genotipo
para mejorar fenotipo

TERAPIA GNICA
VECTOR: Es aquel medio transportador que nos permitir insertar el
material gentico de inters en las clulas del paciente en cuestin.
Viral:

adeno, herpes, retro

TIPOS DE
VECTORES:
No viral:

liposoma
transferencia de genes mediante

receptores
inyecciones de DNA desnudo
bombardeo con partculas de oro
A continuacin se describe de forma breve el funcionamiento de cada vector,
comenzaremos por los no virales y despus por los virales.

LIPOSOMA: funcionamiento en base a propiedades de carga

elctrica.
-ADN a insertar (-) X fostatos de la doble hlice
-lpidos catinicos o liposoma (vector) (+)
-celula (-) X cido silico presente en su superficie

lpidos (+) + ADN (-)

cel
Liposoma con ADN (+) + membrana celular(-)

Penetra ADN dentro del liposoma, el vector se une

a los fosfolpidos de membrana y se libera el ADN
Por lo tanto el DNA evita la degradacin por lisosomas celulares

Liposoma se emplea en:

Tx. Fibrosis qustica
defecto gen CFTR que codifica
protena que mantiene libre de moco tubos areos de
pulmones.
ADN a insertar: uno que codifique gen CFTR
liposoma catinico a utilizar: DC-chol/DOPE
Cl. diana: cl. tracto respiratorio.
R: se impide signos de inflamacin o necrosis en el tejido caractersticos
de la enfermedad.

Esquema donde se muestra diversos

tipos de lipidos catinicos utilizados
como vectores en la Terapia Gnica.

TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE RECEPTORES: En este

caso al ADN a insertar se le adiciona un ligante (molculas
reconocidas por receptores especficos/tipo celular elegido) y un fusigeno
para evitar su degradacin por el lisosoma celular.
L

ADN + ligantes

ADN penetra X endocitosis

clula

L R

unin endosoma + lisosoma evitada por fusigenos

ADN entra al ncleo durante la divisin celular

TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE RECEPTORES se emplea en:

El tratamiento de la hipercolesterolemia
problema de hipercolesterolemia: gen codificador de receptores
LDL
ADN a insertar: Codificador de receptores para LDL
ligando: ASOR-PL
Receptor ASGPr (hgado)
R:
colesterol en suero sanguneo
Nota: Este mtodo a diferencia del liposoma va dirigido contra una
clula especfica por medio del reconocimiento ligando/receptor.

INYECCIONES DE DNA DESNUDO: Por este mtodo el ADN o ARN puro circular y
cerrado covalentemente es directamente inyectado dentro del tejido deseado.

BOMBARDEO DE PARTCULAS DE ORO:

1 plsmido de ADN revestido gotas de oro o tungsteno.
2 Estas partculas son aceleradas por una descarga elctrica y son " disparadas" hacia el
tejido.

Utilizado en: inyeccin directa en el msculo, del gen que codifica la protena de matriz del
virus influenza A para el Tx. de dicha enfermedad en el ratn.

VECTORES VIRALES
METODOLOGA:
Trasfieren
Gen a clula
Eucarionte

El DNA o RNA del vector

es cortado por enzimas de restriccin con el fin
de eliminar zonas patgenas e insertar en el lugar de estas e
vectores
gen de inters mdico

modificados

En ella INFECTAN : vector inicia mecanismos de trascripcin y traduccin de

protenas normales, pues sus protenas patgenas fueron reemplazadas por
estas anteriormente.
esenciales

genoma vrico modificado

VECTOR VRICO
componentes

secuencias vricas
DNA de inters

estructura del virin

RETROVIRUS

- ARN de cadena sencilla como genoma viral (huesped x TI ADN)

- tres genes que codifican:
- gag, el grupo especfico de antgenos, protena de la cpsida y de
la matriz
- pol , la transcriptasa inversa, proteasa, integrasa.
- env , protenas de la envoltura del virus
- LTRs promotor viral
- El genoma tambin incluye secuencias:
empaquetamiento del ARN vrico
corte y empalme entre donador y aceptor
ARNs mensajeros envueltos de forma separada.

Obtencin del Vector: retrovirus naturales se les reemplaza genes

estructurales (gag, pol, env), por uno o varios genes teraputicos deseados.

Expresin de genes terapeticos estar dirigida por el promotor retroviral

(LTR)

estos vectores retrovirales (sin genes estructurales pero con LTR) pueden ser
producidos nicamente en unas lneas celulares de empaquetamiento, que son
capaces de aportar por transcomplementacin las protenas retrovirales
estructurales que son necesarias para la estructura del virin.
-desventaja: solo se integran en clulas que se replican
- ventaja: genes que se integran X retrovirus poseen expresin a largo plazo.

ADENOVIRUS
- Virus no desarrollados que contienen ADN lineal de cadena doble
- El ciclo de infeccin productiva comprende dos fases, la primera, la
ms importante para la sntesis del ADN, la segunda, durante la
cual las protenas estructurales y el ADN vrico son ensamblados en
viriones.

-cuatro unidades transcripcionales, cada una con su promotor,

codifican ARN mensajero empalmados .
- La transcripcin es secuencial en la que los genes E1 se expresan
pronto, y en parte activan la transcripcin de otros genes
tempranos .

-E1 rescata clulas de la quiescencia, dejndolas capaces de

sintetizar ADN vrico y protenas, usando predominantemente
las funciones del cdigo del hospedador.
- E2 : replicacin del ADN.
- E3 : detener los mecanismos de defensa de la clula hospedadora:
anular los efectos de (TNF) en clulas infectadas
bloquear el transporte de MHC I, reduce la presentacin de
pptidos vricos.
- E4 regula fase primaria y secundaria del ciclo de vida vrico.

- Obtencin del Vector: se le elimina E1 y E3, crecen en cl. 293

que aportaran por transcomplementacin los genes
estructurales necesarios para integrar el virin.
- Son capaces de infectar clulas quiescentes y persisten como
DNAs no integrado
- por su baja eficiencia es necesario utilizar virus a ttulos muy
altos que podran desencadenar respuesta inflamatoria
inespecfica.
- la expresin de la protena es limitada a solo semanas o meses
por la falta de integracin del DNA, por esto se requiere
readministracin que puede desencadenar respuesta inmune y
limitar su eficiencia.

ADENOASOCIADOS
-

Es un virus muy pequeo, muy simple, no autnomo, que contiene

ADN lineal de cadena sencilla. El virus requiere la coinfeccin con
adenovirus u otros para replicarse
rep, codifica protenas para replicacin e integracin.
cap, codifica tres protenas estructurales vricas.
Los extremos del genoma comprenden repeticiones terminales (TR) de cerca de
145 nucletidos
Vector: Contienen slo las secuencias vricas TR que bordean el ADN de inters.

HERPESVIRUS
-

ADN bicatenario lineal

Dos trozos de ADN bicatenario lineal unidos dando una estructura nica llamadas
molcula L y molcula S. Poseen en sus extremos secuencias repetidas
terminales ( TRL y TRS ) que son los sitios mediante los cuales permite unirse a
las dos molculas.

Vector: Contienen slo las secuencias vricas TRL TRS y DNA de inters.
Lleva grandes secuencias de ADN
Establece infecciones latentes de larga duracin en las cuales el genoma del
virus existe como un episoma con efectos no aparentes en la clula hospedadora
El herpes virus puede ser una herramienta muy valiosa en clulas
del sistema nervioso central.
Cl. en reposo.

APLICACIONES DE LA TERAPIA GNICA

Distrofia muscular de Duchenne:

Gen codificador de BMP-7 transducido por adenovirus en el Tx.

De la osteoporosis.

-OTROS:
-dolor: La expresin en forma continua de preproencefalina en neuronas
sensitivas
Tx. Dolor cncer, angina, artritis y neuropatas
perifricas.
-Ateroesclerosis: administracin de genes que expresan el factor de
crecimiento endotelial vascular (revascularizar la pierna).
-Disfx. Erctil e infertilidad: adm. gen KL-2 que potencia formacin y
crecimiento de cl. Sertoli (ratas).
-Ceguera: adm. gen RPE95 x virus impide degeneracin y reanudacin de la
actividad elctrica de la retina (animales).
-Alzhaimer: adm. Gen del factor de crecimiento neurolgico (NGF) (monos
viejos)
-Parkinson: gen de la descarboxilasa glutmica cida (GAD)/ cl. hperactivas
del ncleo subtalmico.
-Diabetes tipo I: gen PDX-1
hgado produce insulina (rata)

BIBLIOGRAFA:
Howe S, Thrasher AJ. Gene teraphy for inherited
immunodeficiences. Curr
Hematol Rep 2003; 2 (4):328-34

http://www.uclm.es/profesorado/jjordan/terapia.pdf
"Delivering therapeutic genes-matching approach and
aplication". Trends in Biochemical Sciences. Mayo 1.993. Vol11.