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Accin citoptica
Se denomina accin citoptica la lesin que causan algunos virus a las
clulas en que se replican.
Las lesiones celulares pueden ser intensas y precoces, produciendo en
24 o 48horas la muerte celular, acompaada de lisis fcilmente
observable al inspeccionar los cultivos celulares con un microscopio. En
otras ocasiones las alteraciones morfolgicas que se producen en las
clulas son mnimas o tardas y muy difciles de detectar.
En las clulas infectadas por determinados virus pueden observarse
cuerpos de inclusin, acompaando a las alteraciones celulares ms o
menos importantes. Los cuerpos de inclusin pueden visualizarse,
despus de la tincin de las clulas con hematoxilina eritrosina, como
masas con morfologa ms o menos caracterstica y localizacin nuclear
o citoplasmtica tpica, segn los virus que los originan. Estn
constituidos por acmulos del material vrico sintetizado depositados en
zonas celulares alteradas; en ocasiones predomina o es exclusivo el
depsito de material vrico y en otras lo prominente o exclusivo es la
lesin celular.
El aspecto particular y caracterstico de cada tipo de inclusin suele
orientar sobre el grupo de virus que la produce. La formacin de cuerpos
de inclusin ocurre tanto in vivo, en las infecciones naturales, como en
los cultivos celulares infectados.
Ya se ha sealado que, aparte de la accin citoptica directa, la lesin de
las clulas infectadas por un virus puede deberse a la respuesta inmune

Cultivos celulares. Se denomina cultivo celular a la multiplicacin y


mantenimiento de clulas in vitro
Las clulas se obtienen de un fragmento de un rgano como el rin, el
pulmn u otros, por trituracin y posterior disgregacin con tripsina, lo que
permite obtener clulas aisladas que se introducen en frascos con medios
de cultivo adecuados. Los cultivos celulares, por tanto, estn formados por
clulas disgregadas que han perdido su organizacin tisular, a diferencia
de los cultivos de tejidos u rganos en que se conserva esa estructura.
Las clulas en los frascos pueden estar en suspensin, es decir, libres en el
medio de cultivo lquido o adosadas a la pared del frasco, como unas
baldosas, y baadas por el medio. En el primer caso se trata de clulas en
suspensin y en el segundo en monocapa.
Se denomina cultivo celular primario en suspensin o monocapa, al
obtenido a partir de las clulas normales de un rgano de un animal
adulto. Estas clulas se mantienen vivas algn tiempo en el cultivo, pero
no pueden propagarse in vitro. Se denominan lneas celulares o cultivos
celulares de lnea a los que tras la obtencin de las clulas de un rgano o
tejido pueden propagarse posteriormente in vitro.
Existen varios tipos de clulas de lnea, como las de tejidos embrionarios,
que slo permiten alrededor de 50 subcultivos y mueren y las clulas de
tejidos neoplsicos, que se propagan indefinidamente y se denominan
lneas celulares continuas, confirmndose este hecho cuando se han
propagado durante ms de 70 pases.
Los virus o las muestras clnicas se inoculan a estos cultivos celulares.
Segn el virus que se pretende aislar se utiliza uno u otro sistema celular.

Debido a que los virus, como ocurre con los


plsmidos, se replican solodentro de clulas vivas, la
investigacin sobre virus requiere el uso
dehospedadores apropiados. Para el estudio de los
virus bacterianos se usancultivos axnicos en medio
lquido o en medio semislido con agar. Como lamayor
parte de las bacterias son fciles de cultivar, resulta
relativamente simpleestudiar los virus bacterianos y
por esta razn se dispone de un crecimientodetallado
de la multiplicacin de estos virus.En lo que respecta
a los virus de los animales, el hospedador inicial
puedeser un animal susceptible al virus, pero a
efectos de investigacin es deseabledisponer de
hospedadores ms manejables. En 1907 el bilogo
estadounidenseRoss Granville Harrison descubre que
los tejidos vivos pueden cultivarse, es decir,pueden
crecer fuera de su rgano original. Este fue el
comienzo para el desarrollode los cultivos de tejidos y
mas adelante el de los cultivos celulares
(lneascelulares). Muchos virus animales pueden ser
cultivados en cultivos de tejidos ocultivos celulares, y

Los virus son microorganismos intracelulares y para


evidenciarlos, se debenutilizar sistemas basados en lneas
celulares que permitan su desarrollo. Loscultivos celulares
son un tipo de biosustrato empleados para la propagacin
de losvirus,
constituyen, desde 1950, el sistema ms empleado para el
aislamiento ypropagacin de la mayora de los virus,

consisten en un sistema formado por clulasprovenientes


de un rgano o un tejido, normal o tumoral, mantenidas en
medios decultivo de composicin qumica definida y en
condiciones de temperatura, pH,aireacin y humedad
controladas.
Dentro de stos, los ms usados son los cultivosen
monocapa, aunque hay otros sistemas (cultivos en
suspensin, explantos,cultivos de rganos, cultivos en
microcarriers, etc). Los cultivos celulares enmonocapa
consisten en una capa de clulas que crecen adheridas a
la superficiedel recipiente que las contiene. Estos cultivos
se preparan tratando el tejidooriginal u otra monocapa con
un agente que dispersa las clulas (una enzima o
unagente quelante, o ambos combinados) para luego
transferir la suspensin celularobtenida a un recipiente de

No existe un cultivo celular


susceptible a todos los virus, de
modo que unlaboratorio de
diagnstico viral debe disponer de
distintos cultivos celulares.
Porejemplo, el virus herpes simplex
crece bien
in vitro
en cultivos primarios, cepas ylneas
celulares (MRC-5, RK, HEp-2, HeLa,
Vero u otras); en cambio, otro virus
de lamisma familia, el
citomegalovirus (CMV) slo crece en
cultivos primarios de pulmnfetal
humano o bien en algunas cepas
celulares derivadas del mismo rgano
yespecie (MRC-5). Por otro lado, una
lnea celular como HEp-2 puede ser
bastantesensible a adenovirus, VRS,
parainfluenza, herpes simples,
poliovirus y otros, pero nopermitir el
crecimiento de CMV, rotavirus,
influenza, etc; adems, es posible

Entre los sistemas de cultivo ms


utilizados tenemos:a)
Cultivos primarios
: Se caracterizan por tener varios
tipos de clulas. Lamayora son de
crecimiento limitado in vitro,
generalmente resisten 5 a
10subcultivos y son permisivas a un
amplio rango de virus; p. e., clulas
de rinembrionario humano (REH).b)
Cepas de clulas diploides
: Derivadas de tejidos normales, se
utilizan en laproduccin de vacunas,
aislamiento viral y como sustratos
para probar materialestxicos. Estn
constituidas por un tipo de clulas
que retienen su nmerocromosmico
diploide original; p.e., los fibroblastos
de pulmn.

c)
Lneas celulares
: Son clulas inmortalizadas en el laboratorio,
resisten (n)nmero de pases y se caracterizan
por derivarse de tejidos normales o de
tumoresmalignos y se han pasado por los menos
70 veces in vitro; p.e., clulas Vero (rinde
mono verde africano), LLC-MK2 (rin mono
rhesus) y BSC-1 (tambin detejido normal de
rin de mono) y HeLa y HEp-2 derivadas de
clulas humanasmalignas. stas generalmente
tienen un nmero variable de cromosomas y
aveces tambin son denominadas lneas
celulares heteroploides. Otras lneascelulares
existentes son A9 (fibroblastos subcutneos de
ratn), BHK21(fibroblastos de hmster), BRL3A
(epitelio de hgado de rata), GHI, GH3 (epiteliode
rata), L929, LS, S180 (fibroblastos de ratn),
L1210, L5178Y, P388D1 (linfocitosde ratn),
MCF7 (epitelio humano), 3T3-L1 (fibroblastos de
ratn suizo), 3T3-A31(fibroblastos de ratn
BALB/c) y NRK49F (fibroblastos de rin de rata).
Algunosejemplos de lineas celulares son:

HEP-2
: Clulas heteroploides humanas derivadas de
carcinoma larngeo.Recomendadas para RSV y
ADENOVIRUS.
MDCK
: Lnea celular diploide de rin canino; para
INFLUENZA y ocasionalmentePARAINFLUENZA.
LLC-MK2
: Lnea celular heteroploide de rin de mono
Rhesus. Se recomiendapara el aislamiento del virus
PARAINFLUENZA. Requiere el agregado de
tripsinacristalina al medio.
MRC5
: Lnea celular diploide fibroblstica de pulmn
embrionario humano. Serecomienda para el
aislamiento de CITOMEGALOVIRUS,
HERPESVIRUS.Entre las lneas celulares que se
emplean con ms frecuencia estn lasclulas Hep-2,
HeLa y Vero, en cuanto a clulas diploides las ms
utilizadas sonlas lneas de fibroblastos de pulmn
(MRC5) que se usan para el aislamiento
decitomegalovirus (CMV). El cultivo primario ms
utilizado es el rin humanoembrionario (RHE) que
es permisible a los virus de circulacin frecuente

Deteccin de cidos nucleicos


El mtodo mas utilizado para
deteccin de acidos nucleicos es la
Reaccin en Cadena de la
Polimerasa, PCR, que es una
reaccin de amplificacin de cidos
nucleicos, que utiliza una ADN
polimerasa y oligonucletidos
cebadores, primers, para producir
luego de varios ciclos, millones de
molculas del fragmento
seleccionado a partir de una sola
copia. Los productos de PCR pueden
ser detectados por tincin con
bromuro de etidio y electroforesis en
geles de agarosa.
Esta tcnica permite detectar
mnimas cantidades de cidos
nucleicos en muestras clnicas y por
lo tanto ha significado un gran