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Tema 7.4
Presenta: Maritza Payan Parra
197446
RESULTADOS DE APRENDIZAJE
ERRORES FRECUENTES
No comprender el procedimiento de la
clonacin molecular.
ELEMENTOS
Segmento de DNA
Vector
Plasmido
Porcin del genoma de un virus
bacteriano ()
Clula
Enzimas
ENZIMAS UTILIZADAS EN LA
TECNOLOGIA DEL DNA
RECOMBINANTE
ENZIMA
FUNCION
DNA ligasa
Transcriptasa inversa
Polinucleotido quinasa
Transferasa terminal
Exonucleasa III
Fosfatasa alcalina
TIPOS DE
ENDONUCLEASAS
Las del tipo I cortan el DNA al azar.*
- Las de tipo III cortan el DNA a unos 25 pb de
la secuencia de reconocimiento.*
- Las de tipo II no necesitan ATP y cortan el
DNA en la misma secuencia de
reconocimiento.
* Se mueven a lo largo del DNA mediante un
mecanismo que requiere ATP
-
ESQUEMA BASICO
Vector + Fragmento de DNA
DNA Recombinante
Replicacin del DNA recombinante dentro de
las clulas husped
Aislamiento, secuenciacin y manipulacin del
fragmento de DNA purificado
CLONACION EN E. coli
INTERACCION DE LA ENDONUCLEASA
DE RESTRICCION EcoRV CON SU
SECUENCIA DIANA
1.
2.
3.
4.
5.
Los
fragmentos
pueden
ligarse a un
plasmido
2.
3.
4.
CLONACION E IDENTIFICACION
DE DNA FORANEO EN E. coli
1.
2.
3.
4.
El DNA digerido se
fracciona por
electroforesis en gel
o centrifugacin con
gradiente de
densidad y los
fragmentos de 20 kb
de largo (aprox) se
incorporan
EL FRAGMENTO LAMBDA
1.
2.
3.
EL CROMOSOMA
ARTIFICIAL BACTERIANO
Puede aceptar
grandes fragmentos de
DNA (hasta 500 kb)
Son plasmidos
bacterianos
especializados
EL CROMOSOMA
ARTIFICIAL DE LEVADURA
Puede aceptar
segmentos de DNA
de hasta 1000 kb
Son versiones
artificiales de un
cromosoma
artificial de
levadura
APLICACIONES
RATONES TRANSGENICOS
Se muestra un par de
hermanos de la misma
camada de 10 semanas
de edad.
El mas grande se
desarrollo con un huevo
inyectado con DNA + GH.
El mas grande pesa 44 gr,
y el pequeo 29 gr.
El gen GH se transmiti a
los descendientes.
BIBLIOGRAFIA