Marcadores Moleculares Neurales

Facultad de Medicina
Universidad Nacional de Colombia

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Rol de la Neurotrofina 4-5 en la

Regeneracin Axonal

European Journal Of Neuroscience, 2011

European Journal of
Neuroscience
Publicacin oficial de FENS

Federacin
Europea de
Sociedades de
Neurociencias

ndice H: 149

Arthur W English PhD.

Departamento de Biologa Celular
Profesor de Medicina de la Rehabilitacin
Universidad de Emory
reas de inters:
Regeneracin axonal posterior a lesin de nervio perifrico

Manning J. Sabatier PhD.

Departamento de Ciencias Naturales
Profesor Asistente rea de Salud y Bienestar
Universidad de Clayton State
reas de investigacin:
Efectos fisiolgicos del ejercicio fsico

INTRODUCCIN

Nervio Perifrico

Lesin de Nervio Perifrico

Compromiso
Motor
(Parlisis Flccida)
Compromiso
sensitivo
(Anestesia o
disestesia)

Regeneracin
Axonal
1. Funcionalmente pobre
Alteracin de tubo endoneural-clulas de
Schwann

2. Fenmeno de Degeneracin Walleriana

(antergrada)
3. Crecimiento axonal lento
4. Mal direccionamiento en la reinervacin

Estado del Arte

Electroestimulacin:
Facilita regeneracin axonal
despus de transeccin nerviosa
Efectos en la 1 hora POP (2
veces/2 semanas)

Electroestimulacin

Neurotrofina
4-5

30 minutos de actividad fsica/ semana previene

enfermedades cardiovasculares, diabetes, HTA, mejora la
memoria y la cognicin. American College of Sports
Medicine

Neurotrofinas
(Factores neurotrficos)

Familia de protenas secretadas por

diferentes tejidos que se unen a
receptores p75 y TRK

Facilitan la supervivencia, crecimiento,

desarrollo y diferenciacin neuronal

NEUTROFINAS

RECEPTORES

Factor de crecimiento nervioso

(NGF)

TRKA

Factor Neurotrfico derivado del

cerebro (BNDF)

TRK

Neurotrofina 1-Novel (NNT-1)

Receptores de
glucoprotena 130
(gp130)

Neurotrofina 3 (NT-3)

TrKC y TrKB

Neurotrfina 4 (NT-4, NT-5, NTF4,

y NT-4/5)

TrKB

MATERIALES Y MTODOS

Materiales y Mtodos
Modelo animal transgnico
Thy 1- YPF (Yellow Protein
Fluorescence)
Ratones machos
2 meses de edad
44 nervios

Thy 1- YFP (Yellow Protein Fluorescence)

Modelo nervio tibial comn

1. Anestesia con
pentobarbital
2. Corte cerca al
origen del nervio
(nv ciatico)
3. Reparacin con
implante de 5-10
mm
4. Pegamento de
fibrina
5. Meloxicam oral
1mg/kg

Materiales y Mtodos
Modelo animal Knockout NT-4/5
Donantes de nervio

Materiales y mtodos
1

Remocin de segmentos
nerviosos de modelo KO

Pieza de papel de aluminio

Congelados en nitrgeno lquido

Inmersin en bao de SS 37C

(3 veces)

GE
28 nervios
Entrenamiento dia 3
de reparacin
quirrgica
1 hora/ 10 m/min
5 das/ semana

16 nervios
No Entrenamiento

Materiales y Mtodos
1- Sacrificio con Pentobarbital
2- Perfusin transcardiaca con SSN
3- Perfusin con Periodate-lysateparaformaldehyde fixative
4- Retiro de nervio
5- Montaje
6- Cubrimiento con Vectashield
7- Aplicacin de esmalte de uas
transparente

Materiales y Mtodos
Microscopia confocal
Imgenes completas del nervio con
intervalos de 10 um
Alineacin contigua de las imgenes de la
longitud completa del axn (Adobe
Photoshop)
Medicin de los perfiles de longitud axonal
Expresin en histogramas
U-test
ANOVA

U-Test
(Test de Mann-Whitney)
Mtodo no paramtrico
Evala la probabilidad en dos
distribuciones de frecuencia en
muestras independientes de la
misma poblacin

La media del perfil de longitud

axonal fue determinado por cada
nervio estudiado y los promedios
fueron computados para cada grupo
de tratamiento

RESULTADOS

1. Efectos del entrenamiento sobre

la regeneracin axonal
Distribuciones perfiles de longitud
axonal fueron mayores en
entrenados vs no entrenados
P< 0.01 (tres tiempos)
Nmero de axones regenerados no
fue diferente entre los dos gruppos

2. Efectos de la alteracin del ambiente

alrededor de los axones regenerados

Perfiles de longuitud axonal

mayores en grupo que expresa NT4/5 vs KO
No diferencias significativas
Indica que la regeneracin axonal
mediada por el ejercicio es
independiente de las condiciones
ambientales celulares

3. Entrenamiento y regeneracin
axonal en KO NT-4/5
Realce de la regeneracin axonal si la
reparacin proviene de tejido de animales que
expresan NT-4/5
Sometido a ejercicio aumenta la regeneracin
axonal
No hay regeneracin en animales de tejido
donante de KO
No hay diferencias entre entrenados y no
entrenados con expresin de NT-4/5
La distribucin de los perfiles de longuitud
axonal no es significativa

 DISCUSIN

Discusin
Fawcett & Keynes, 1990 y Scholz et al
2009 Describen que la dificultad en la
recuperacin
de
la
funcionalidad
despus de una lesin nerviosa es el
lento crecimiento de los axones.
Se ha demostrado que un entrenamiento
sencillo de ejercicio posterior a una
lesin
nerviosa
reparada
quirrgicamente
potencializa
el
crecimiento axonal (Sabatier et al. 2008)

Discusin
Los hallazgos del presente estudio
determinan que el entrenamiento
en ejercicio fsico potencializa el
crecimiento axonal independiente
del ambiente celular
La NT-4/5 localizada en los
extremos proximales de los nervios
cortados esta implicada en la
regeneracin axonal

Discusin
Se observa expresin de receptores tirosin
kinasa para BNDF y NT-4/5 durante la primera
semana de transeccin nerviosa (Funakoshi et
al.,
1993)
lo
cual
indica
que
la
neuroregeneracin axonal esta mediada por
estas neurotrofinas.
El crecimiento y la regeneracin axonal es muy
pobre cuando se disminuye una o ms de estas
neurotrofinas o sus receptores en las clulas de
Schwann (Boyd & Gordon 2002; Gordon et al.,
2003) o si las clulas de Schwann se destruyen
( Nadim et al., 1990; Sondell et al,.1998; Ghalib
et al., 2001; English et al.,2007)

Discusin
En el estudio se demuestra que un
entrenamiento fsico diario sencillo
despus
de
una
transeccin
nerviosa con reparacin, los axones
se
regeneran
y
crecen
robustamente
en
los
tramos
nerviosos en los que no hay clulas
de Schwann, lo cual sugiere que los
efectos del ejercicio fsico ocurren
de
forma
independiente
del

Discusin
Los resultados de los experimentos que
estudian la regeneracin axonal en ratones
Knockout para NT-4/5 son interpretados como
evidencia que los efectos potenciadores del
entrenamiento en ejercicio estn relacionados
con localizacin de NT-4/5 en los extremos
proximales, lo cual se relaciona con los
hallazgos de otros estudios con modelos
Knockout. (Liu et al., 1995; Liebl et al., 2000).

Discusin
Los resultados del estudio tienen una
amplia similitud con los hallazgos de
estudios
que
han
usado
la
electroestimulacin para promover la
regeneracin axonal. (Al-Majed et al.,
2000) cuyos resultados demuestran
que la electroestimulacin con una
dosis de una hora al tiempo de la
reparacin axonal resulta en una
potenciacin de la regeneracin

Conclusiones
Entrenamiento
en
banda
caminadora
potencia
la
regeneracin axonal en nervios
perifricos
cortados
independientemente del ambiente
en el cual crecen

Especulaciones
NT-4/5 localizado en las porciones proximales
de los axones de nervios cortados, esta
implicado en la regeneracin potenciada por
el entrenamiento fsico
Solo los axones que no expresan NT-4/5
sobreviven independientemente y llevan a
regeneracin neuronal
La regeneracin axonal en KO NT-4/5 es dada
por la respuesta de las clulas de Schwann
de nervios implantados que expresan NT-4/5

Inferencia
Los efectos del ejercicio en la
potencializacin de la regeneracin
axonal
son
directamente
dependientes de la cantidad de
clulas
que
expresan
NT-4/5
cercanas al segmento proximal