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Bacillus spp

Siever Morales Cauti


Médico Veterinario – UNMSM
Laboratorio de Microbiología
Género Bacillus
Características generales

 Bacilos grampositivos esporulados


 Aerobios o anaerobios facultativos
 Ubicuos en la naturaleza
 Especies más importantes:

B. anthracis: Carbunco
B. cereus: Intoxicaciones alimentarias
Bacillus anthracis
 Grampositivo bacilo

 Anaerobio Facultativo

 1 - 1.2µm ancho x 3 - 5µm


largo

 Pertenece a la familia B.
cereus
• Requiere para su
crecimiento Thiamin
• capsula de Glutamyl-
polypeptido
• No movil
http://www.bact.wisc.edu/Bact330/lectureanth
rax
 Endosporas de forma oval y
central
Características
 No móvil
 Aerobio
 Encapsulado
 Forma esporas que no produce
ensanchamiento de la bacteria, mide
aprox. 1 u
 Colonias grandes, blancas grisáceas, de
bordes ondulados “cabeza de medusa”
 Existen colonias lisas, rugosas y mucoides;
la rugosa es la más virulenta.
Bacillus Bacillus cereus Bacillus
anthracis subtillis
Motilidad - + +
Hemólisis - + +
TSA Cabeza de Rugosas Grisáceas
medusa irregulares dentadas
TSB Copos de algodón TUR. SED PEL. TRU SED

Cápsula + - -
Hidrólisis dela -
gelatina LENTA RAPIDA
Penicilina SENSIBLE NO SENSIBLE
Patogenicidad +++ -/+ -
Endospora
 Oxigeno necesario para la
esporulación

 Celulas deshidratadas
• Altamente resistente al calor,
frio, desinfectantes quimicos,
periodos secos

 El protoplasto contiene la
información para la siguiente
célula vegetativa

 La corteza proporciona
resistencia a la radiacion http://www.gsbs.utmb.edu/microbook/ch015.htm

 La pared porporciona resistencia


quimica y desinfectantes
Genética
 1 cromosoma
• 5.2 million bp
• Ames strain sequenced

 2 plasmidos
• px01
 184 kbp

 Isla de patogenicidad

• pX02
 95.3 kbp

 Cápsula

gib.genes.nig.ac.jp/single/ main.php?spid=Bant_AME
Where is Anthrax?

http://www.vetmed.lsu.edu/whocc/mp_world.htm
Anthrax
 De la palabra griega anthrakos para carbón
 Causado por esporas
 Primariamente una enfermedad de:
Herbivoros como ovinos, bovinos, equinos, cabras.

 Reservorio natural el suelo:


• No depende de un reservorio
• No puede ser cultivado de suelo, cuando no es
endémico
• Ocurre esporadicamente en diversas zonas.

 Zonas de Anthrax
• Suelo rico en materia organica (pH < 6.0)
• Cambios dramáticos de clima
Anthrax Infección - Diseminación
 Puede ser difundido por corrientes, insectos,
animales silvestres, aves, desechos, etc.

 Animales infectados por agua, alimento, o


mordedura de algun insecto.

• El riesgo de una infección natural es de


1/100,000
• Ocurre en areas endémicas, despues de un
brote en ganaderia
Muerte súbita
Tres formas de Anthrax
 Cutaneoanthrax
• Piel
• Mas comun
• Las esporas entran a traves de pequeñas lesiones

 Inhalacion anthrax
• Las esporas son inhaladas

 Gastrointestinal (GI) anthrax


• Esporas por ingestion
• Oral, faringeal, y abdominal
Bacillus cereus
Desarrollo en agar sangre a las 24 horas

Bacillus subtillis B. anthracis/B. subtillis


Bacillus anthracis
- 1769: Se describe por primera vez, la enfermedad en animales y en el
hombre

- 1847: Se describe el Carbunclo humano en Argentina (Dr. Francisco


Muñiz)

- 1850: Daver y Davaine observan al microscopio formas bacilares en


sangre.

- 1865: Davaine demuestra que como agentes causales de la enfermedad.

- 1876: Koch efectúa el primer cultivo puro.

- 1878: Koch demuestra la presencia de esporos.

- 1880-81: Pasteur prepara la vacuna.

- 1910: Ascoli y Valente efectúan la prueba de termoprecipitación.


Bacillus anthracis

El ántrax o carbunco es una enfermedad infecciosa


aguda que normalmente afecta a animales como
bovinos, ovinos, caprinos, camellos, y otros
herbívoros, pero también puede afectar a
humanos cuando se exponen a animales
infectados o tejidos de animales infectados,
mientras que las aves y los reptiles por su
temperatura corporal son resistentes.
Bacillus anthracis:
Factores de Virulencia
Factores de Virulencia
Los bacilos de ántrax expresan dos factores de
virulencia:

 Capsula.
 Toxina

 Todas las cepas de B. anthracis reportadas como


virulentas son portadoras de los plásmidos PXO1
y PXO2.

 La falta de uno de los dos da lugar a cepas


atenuadas que son las que se utilizan para la
producción de vacuna.
Genes
estructurales
capB
PXO2
capC
96 kb
capA

Síntes
Gen is ácido poli
regulador dep
D-glutámico

Cápsula
Cápsula
 Acido D-glutámico, es un polipéptido de alto peso
molecular

 Forma una cápsula, que envuelve la pared celular


y contribuye con la patogenicidad permitiendo:

• La evasión de los mecanismos de inmunidad y defensa


como la fagocitosis.

• Convierte en incoagulable la sangre

• Responsable de las reacciones inflamatorias y


necróticas.
PXO1 - 181
kb

Factor de Antígeno Factor


Edema Protector Letal

Toxina Toxina letal


edematizante

Edema en Muerte
piel.
Individualmente cada uno de los factores no exhiben
una actividad biológica significativa, necesita la
combinación de 2 o 3 para producir su efecto.
Toxina
 La toxina edematosa es una adenilciclasa dependiente
de calmodulina que aumenta el nivel del AMP cíclico,
perturbando la homeostasis del agua.

• Se piensa que es la responsable del edema masivo por


alteración del metabolismo del agua que se observa en las
formas cutáneas.

 La toxina letal es una zinc metaloproteasa que


inactiva MAPKK. (la proteína kinasa-kinasa mitógeno
activada)

• La toxina letal estimula en el macrófago la liberación de TNF


alfa y de lL-1beta que son en parte responsables de la
muerte súbita en los enfermos de ántrax.
Cápsula
 Glicocalix
• Adhesivo, Polimero
externo de la pared
celular

 pX02 plasmido

 De acido D-glutamico

 Rol importante durante el


establecimiento de la
enfermedad
• Proteje contra la
fagocitosis & Lisis en
estado vegetativo

http://textbookofbacteriology.net/BSRP.html
Toxinas
 pX01 plásmido
 AB model
• Binding
• Activating
 Protective antigen (PA),
edema factor (EF) &
lethal factor (LF)

http://www.rcsb.org/pdb/molecules/pdb28_1.html
 Individually non-toxic
• PA+LF  letal actividad
• EF+PA  edema
• EF+LF  inactive

• PA+LF+EF  edema & necrosis  letal.


Mechanism of Infection

http://kugi.kribb.re.kr/KUGI/Pathways/BioCarta/anthraxPathway/
Reguladores
 Bicarbonato o CO2 estimula capsula y formacion de
PA

 LF requiere iones zinc

 EF requiere calmodulina, a major intracellular


calcium receptor

 Regulador transcripcional AcpA en pX02, controla


expresión de la cápsula

 atxA en pX01 es un regulador necesario para la


transcripción de los genes de todas las toxinas.
Mecanismos de Esporulación
Tres formas clinicas de Anthrax

 3 types of anthrax infection occur in humans:

1) Cutaneous

2) Inhalation

3) GI
Anthrax cutaneo

 The most common naturally occurring form of


anthrax.

 Ulcers are usually 1-3 cm in diameter.

 Incubation period:
• Usually an immediate response up to 1 day

 Case fatality after 2 days of infection:


• Untreated (20%)
• With antimicrobial therapy (1%)
Inhalation Anthrax
 The infection begins with the
inhalation of the anthrax spore.

 Spores need to be less than 5


microns (millionths of a meter) to
reach the alveolus.

 Macrophages lyse and destroy


some of the spores.

 Survived spores are transported


to lymph nodes.

 At least 2,500 spores have to be


inhaled to cause an infection.

Inhalation Anthrax, Introduction, DRP, Armed Forces Institute of Pathology


Inhalation Anthrax (2)
 Disease immediately follows
germination.

 Spores replicate in the lymph


nodes.

 The two lungs are separated


by a structure called the
mediastinum, which contains
the heart, trachea, esophagus,
and blood vessels.

 Bacterial toxins released


during replication result in
mediastinal widening and
pleural effusions
(accumulation of fluid in the
pleural space).

Inhalation Anthrax, Introduction, DRP, Armed Forces Institute of Pathology


Inhalation Anthrax (3)
 Death usually results 2-3 days after the onset of
symptoms.

 Natural infection is extremely rare (in the US, 20 cases


were reported in last century).

 Inhalation Anthrax is the most lethal type of Anthrax.

 Incubation period:
• 1–7 days
• Possibly ranging up to 42 days (depending on how
many spores were inhaled).

 Case fatality after 2 days of infection:


• Untreated (97%)
• With antimicrobial therapy (75%)
Gastrointestinal Anthrax
 GI anthrax may follow
after the consumption
of contaminated,
poorly cooked meat.

 There are 2 different


forms of GI anthrax:
1) Oral-pharyngeal
2) Abdominal

 Abdominal anthrax is
more common than
the oral-pharyngeal
form.

http://science.howstuffworks.com/anthrax1.htm
Ocasiona el Antrax llamado también carbunco
bacteridiano, fiebre carbonosa, pústula maligna

es primariamente una enfermedad de los herbívoros, en


particular del ganado vacuno y ovino, y en menor
extensión en caballos, cerdos y cabras.

Los perros y otros carnívoros son relativamente inmunes


a la infección espontánea.
Cultivo
 Aerobio y anaerobio facultativo 24 horas.

 pH 7 a 7,4 y 37°C.

 Colonias grandes, blancas, opacas de


bordes irregulares “cabeza de medusa”

 Cultivos con Temp mayor de 43 produce


cepas inactivas
 Crece facilmente en agar simple
 No presenta hemolisis*
Transmisión
 Se propaga por suelos, alimento, agua contaminada
Los suelos arenosos absorben y filtran el agua,
mientras que los arcillosos, permiten que el agua
refluya a la superficie, llevando consigo esporas que
pueden estar en capas más profundas.
Micrografía
electrónica que
muestra las
partes
principales de
una endospora
Continuación.....
 Se multiplican activamente en bazo,
alterando el parénquima esplénico. Luego
se produce una septicemia tardía y muerte
del animal.

 Una vez muerto el animal la temperatura


en el cadáver sigue subiendo hasta 44 0
45° C, durante unos 30 minutos por la
fermentación del glucógeno.
Diagnostico del laboratorio
 Examen microscopico directo de la sangre
mediante coloración GRAM, azul de metileno,
Wright o Giemsa
 Hemocultivo en agar simple o TSA, agar
sangre
 Inoculación en ratones
 ELISA
 Western Blot
 ensayo cromatográfico
 Pruebas de ácido fluorescentes.
 PCR
 http://www.sumanasinc.com/webconten

 http://www.bt.cdc.gov/training/historyof
http://www.bt.cdc.gov/training/historyo