.

Definicin
Es una tcnica de
separacin de mezclas en
sus constituyentes
individuales

Finalidad:

a) Purificacin

b) Anlisis

Inicios
Es una tcnica de separacin basada en la diferente

velocidad con que se mueven los solutos a travs de

un medio estacionario mediante el flujo en un
disolvente llamado eluente o fase mvil.
F. F. Runge qumico alemn, describi el proceso de
separacin que actualmente se conoce como
cromatografa en papel.
El ruso Mijail Tswett corresponde el haber establecido
las ventajas de la cromatografa y la adopcin parcial
de la terminologa, tambin fue quien sent las bases
de los principales procedimientos experimentales
relativos a sta tcnica.

Cromatografa - inicios
GRAPHOS
(Escritura)

KHROMATOS
(Color)

MIGUEL TSWEET (BOTANICO RUSO-1906). REALIZO LA PRIMERA

CROMATOGRAFA EN COLUMNA.
Eter de
petrleo

Eter de
petrleo

Mezcla de
pigmentos
vegetales
CaSO4

Eter de
petrleo

Inicios
A pesar de que el mtodo

cromatogrfico
prometa
simplificar la separacin de
sustancias
de
mezclas
complejas, no fue sino hasta
finales de la dcada de los
30 y principios de los 40
cuando se empez a
desarrollar
la
tcnica
teniendo
este
mtodo
diversas aplicaciones.

Las nicas sustancias que no

pueden ser examinadas por

cromatografa son:
Las insolubles
Las que descomponen con el

solvente o con la fase

estacionaria.

Laadsorcin, que es la retencin de una especie

qumica por parte de los puntos activos de la

Los
fenmenos
de interaccin
que se dan
superficie
de un slido
quedando delimitado
el
entre
las dos
: que separa las fases o
fenmeno
a lafases
superficie
superficie interfacial.
Laabsorcin, que es la retencin de una especie
qumica por parte de una masa, y debido a la
tendencia que esta tiene a formar mezcla con la
primera, absorcinpura, o a reaccionar
qumicamente con la misma, absorcincon
reaccinqumica, considerando ambas como un
fenmeno msico y no superficial.

Elementos bsicos de la
cromatografa
Fase estacionaria

Fija
Slida: Slica gel, almina,etc.
Lquida: Solventes polares, no polares, y mixtos.

Fase mvil

Se desplaza
Lquida: Solventes polares, no polares y mixtos.
Gaseosa: Gas inerte (Nitrgeno, helio, etc. )

Columna

Fase
Mvil

Inyeccin

Compuestos

Migracin

Elucin

Proceso en
separaciones
cromatogrficas
Es la distribucin
de los
constituyentes de
una mezcla entre la
fase estacionaria y
la fase mvil.

Fase mvil

Fase
estacionaria

Fase mvil

 La muestra se introduce en la fase mvil y es transportada a lo

largo de la columna que contiene una fase estacionaria

distribuida.
Las especies de la muestra experimentan interacciones

repetidas (repartos) entre la fase mvil y la fase estacionaria.

Cuando ambas fases se han escogido de forma adecuada, los

componentes de la muestra se separan gradualmente en

bandas en la fase mvil.
Los componentes abandonan la columna en orden creciente

de interaccin con la fase estacionaria.

La amplia gama de seleccin de materiales para la fase mvil

y la estacionaria permite separar molculas que difieren muy

poco en sus propiedades fsicas y qumicas.

Seal

k razn de reparto
tR tM
VR - VM
k=
=
tM

to

VM

Donde tM es el tiempo de retencin de

un compuesto que no interaccionara con
la fase estacionaria y tR es el tiempo de
retencin del compuesto de inters. Lo
mismo se puede expresar en relacin con
Los volmenes de retencin.

tB

tA
tiempo

Algunas sustancias son retenidas ms fuertemente en la fase

estacionaria por:
Su mayor polaridad, lo que favorece su adsorcin en dicha
fase.
La menor solubilidad en la fase mvil.

Otras sustancias son menos retenidas, debido a:

Su menor polaridad, lo que disminuye su capacidad de
adsorcin en la fase estacionaria.
Su mayor solubilidad en la fase mvil

Clasificacin de la
cromatografa
Esta tcnica analtica se clasifica de acuerdo a
su mecanismo de separacin en cromatografa
de:
Reparto
Adsorcin
Exclusin.
Intercambio inico
Cromatografa de afinidad

Cromatografa de Reparto
Usa una fase
La fase mvil puede ser un
estacionaria lquida que
lquido o un gas segn sea
el caso de la
forma una fina pelcula
sobre la superficie de un cromatografa; en caso de
que la cromatografa sea
soporte slido.
lquido / lquido la fase
El soluto est en
mvil ser un liquido, o de
equilibrio entre el lquido
un gas en cuyo caso es
estacionario y la fase
cromatografa gas/
mvil
lquido.

El soluto se disuelve en la
fase lquida con que est
recubierta el soporte
slido

CROMATOGRAFIA DE
REPARTO O PARTICIN
Fase estacionaria:
Lquido sostenido o
adsorbido en un slido inerte.
Fase mvil:
Lquido (CLL)
Gas (CLG)
Nota: Los lquidos de las 2 fases
deben ser inmiscibles entre s.

Cromatografa de Adsorcin
Usa una fase estacionaria

slida y una fase mvil lquida

o gaseosa
CROMATOGRAFA DE
ADSORCIN

Fase estacionaria: slido.

Fase mvil:

Lquido ( CSL)
Gas (CSG)

El soluto se adsorbe sobre las

superficie de las partculas

slidas, la separacin se
explica con la desercin de
sustancias contenidas en la
fase mvil sobre un
slido estacionario

Pueden ser sistemas

lquido/slido y gas/slido. En
cualquier fenmeno de
adsorcin influyen tres
variables:
adsorbente, eluente y solutos .

Cromatografa de adsorcin
El trmino adsorcin en el contexto cromatogrfico

se refiere a interacciones dbiles.

Xm

Cromatografa de adsorcin
Cromatografa lquido/

Cromatografa gas /slido:

slido: la fase
estacionaria suele ser gel de
slice , almina, carbn
activado y polvo poliamida.
Algunas veces al aplicar
almina pueden ocurrir
cambios qumicos, es decir,
quimisorcin durante el paso
del soluto por la fase
estacionaria.

los adsorbentes mas

usados son: almina, gel de
slice, carbn activado y
mallas moleculares. Se
realizan en columna.
El material que sea utilizado
como adsorbente debe
presentar una estructura
rgida, tamao uniforme y
ser qumicamente inerte.

Cromatografa de Exclusin
La separacin est basada en los diferentes

volmenes moleculares de los solutos.

El tiempo de elusin es proporcional al peso
molecular de los mismos, lo que provoca ser no
muy usada con compuestos de alto peso
molecular.
Principalmente en este proceso se emplean
geles no inicos de partculas uniformes y
porosos, como fase estacionaria.

Tambin llamada de filtracin por gel o

de permeacin por gel
Separa molculas por su tamao, las molculas

grandes pasan ms rpido que las pequeas, no

hay una interaccin entre la fase estacionaria y
el soluto, sino que la fase mvil pasa a travs de
un gel poroso.
Los poros pequeos dejan pasar a las
molculas grandes y las molculas pequeas
tardan ms tiempo en pasar a travs de la
columna.

Se excluyen las
molculas
grandes

Cromatografa de
En este tipo de
Los iones en disolucin
intercambio
inico
cromatografa existen
aniones como: -SO3- ,o
cationes como:
-N(CH3)3+ .

Iones covalentemente

unidos a la fase
estacionaria slida, que
ordinariamente es una
resina.

de carga opuesta son

atrados a la fase
estacionaria por fuerzas
electrostticas.
La fase mvil es un
lquido.

Cromatografa de
intercambio inico

Los aniones mviles

permanecen cerca de los
cationes que estn
covalentemente unidos a la
fase estacionaria

Resina catinica, que solo

fija aniones.

Cromatografa de Afinidad
Es la ms selectiva, emplea interacciones de

molculas de un soluto en particular y una

segunda molcula que est unida
covalentemente (inmovilizada) a la fase
estacionaria.
La molcula inmovilizada podra ser un
anticuerpo unido a una protena determinada.
Solo la protena que reacciona con el anticuerpo
se fija en la columna.

Cromatografa de Afinidad
Todas las dems molculas se eliminan

Una clase
especfica de
molculas, se une
a la fase
estacionaria

Aspectosfsicosdela
Cromatografa

La velocidad lineal de flujo, nos dice cuntos

cm recorre el disolvente dentro de la columna en

un minuto.
Cromatograma, es un grfico que representa la
respuesta del detector en funcin del tiempo de
elucin.
Tiempo de retencin tr, de un componente es
el tiempo necesario despus de la inyeccin de
una mezcla en la columna hasta que ese
componente llegue al detector.

Aspectos fsicos.
Volumen de retencin

Vr, el volumen de la
fase mvil necesario
para eluir un soluto
determinado de la
columna.
Eluyente, fluido que
entra por la columna.
Eluato, fluido que sale
por el extremo de la
columna.(efluyente)

Coeficiente de

reparto, o particin, si
K es la constante de la
reaccin:

S en la fase 1 S en la fase 2

S 2
K
S 1

Aspectos fsicos.
Coeficiente de

distribucin D, se define:
D

concentracin total de la fase 2

concentracin total de la fase 1

En general, los

cocientes de particin
y distribucin se
asocian a la fuerza de
retencin de los
diferentes
componentes del
soluto por la fase
estacionaria

Aspectos fsicos.
Coeficiente de difusin, mide la velocidad a

que se mueve al azar una sustancia desde una

regin de mayor concentracin a otra de menor
concentracin.
Altura de plato, es la constante de
propocionalidad entre la varianza(s) de la banda
y la distancia que ha recorrido (x).Cuantoms
pequeaeslaalturadeunplato,msestrecha
eslabanda.

Eficiencia en la separacin
Diferencia de tiempos de elucin de los

respectivos picos, cuanto ms distantes

sean mejor.
Anchura de los picos, cuanto ms anchos

sean los picos, peor la separacin.

Resolucin = 0.75

Seal

Seal

Resolucin = 0.50

tiempo

tiempo

Resolucin = 1.50

Seal

Seal

Resolucin = 1.00

tiempo

tiempo

Cromatografa de Gases
La cromatografa tambin se puede clasificar en

cuanto al mtodo de anlisis en cromatografa

de gases:
Fase mvil: gas portador (He, N2 o H2)
Fase estacionaria: lquido no voltil, o un slido.
Analito: gas o lquido voltil

Cromatografa de gases
La cromatografa de gases es un mtodo

fsico de separacin en el cual los

componentes a separar se distribuyen
entre dos fases, una de las cuales
constituye la fase estacionaria, de gran
rea superficial, y la otra es un GAS (fase
mvil) que pasa a travs o a lo largo de la
fase estacionaria

Componentes de un
Cromatgrafo de gases
Un suministro y una entrada de gas

portador
Puerto de inyeccin
Columna localizada en el interior de una
cmara termostatizada (horno)
Detector
Sistema computarizado para analizar,
registrar e imprimir el cromatograma

Cromatgrafo de gases

Inyeccin de la muestra
Las muestras lquidas

Los productos de

se inyectan mediante
una jeringa a travs de
un disco de goma, en
un inyector caliente.
El gas portador arrastra
la muestra vaporizada
desde el inyector a la
columna

descomposicin y los
componentes no
voltiles de la muestra
se acumulan dentro de
un tubo de vidrio.
Se requieren distintos
tipos de inyeccin para
diferentes tipos de
muestras.

Inyeccin de la muestra
Inyeccin de muestra

Fase estacionaria

Flujo de la corriente
Muy soluble / tiende a adsorberse a la fase estacionaria
Poco soluble / tiende a ser eluida por la fase mvil

Puertos de inyeccin
Inyector

El puerto de inyeccin transforma de

manera instantnea la muestra lquida
inyectada en vapor antes de que esta sea
introducida en la columna. Esto se consigue
seleccionando una temperatura del inyector
superior a la del punto de ebullicin del
compuesto menos voltil de la muestra, a
menudo alrededor de los 150C.

Puertos de inyeccin
Inyeccin con divisin
Se utiliza cuando los analitos que

Inyector de split / splitless

Jeringa
Septo
1 ml/min

102 ml/min

Purga del
septo

Salida de la
divisin

Columna

100 ml/min
1 ml/min

interesan constituyen el 1 % de la
muestra en la columna
cromatogrfica.
La temperatura del inyector se
mantiene alta para facilitar una
evaporacin rpida.
El flujo del gas portador arrastra la
muestra a la cmarademezcla,
donde se realiza una completa
evaporacin y homogenizacin.
Al pasar por el capilar se produce
la divisin y slo pasa a la
columna el 1 % de la mezcla, el
resto se ventea.

Inyeccin con divisin(Split)

Se utiliza cuando los analitos constituyen >0.1%

de la muestra en la columna cromatogrfica.

Se introduce entre 0.2 y 2% de la muestra en la
columna.
La temperatura en el inyector se mantiene alta
para facilitar una evaporacin rpida.
El flujo del gas portador arrastra la muestra a la
cmarademezcla,dondeserealizauna
completaevaporacinyhomogenizacin.

Inyeccin sin divisin

(splitless)
Es apropiada para analizar trazas del analito
que constituyen menos del 0.01% de una
muestra de alto punto de ebullicin, en
disolventes de bajo punto de ebullicin.
Se inyecta dentro de la gua, en un volumen de
2 microlitros de disolucin diluido en disolventes
de bajo punto de ebullicin.
La temperatura del inyector en la inyeccin debe
ser menor 220C.

Inyeccin en columna
Se usa con muestras que se descomponen por

encima de su punto de ebullicin.

La disolucin se inyecta directamente en la
columna, sin pasar por un inyector caliente.
La temperatura inicial de la columna es
suficientemente baja para que condensen los
solutos en una banda estrecha.
Para una mejor inyeccin en columna se usan
jeringas de 0.25 a 0.32 mm de dimetro.

Gas portador
El gas portador cumple bsicamente dos propsitos:
Transportar los componentes de la muestra
Crear una matriz adecuada para el detector.
Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:
Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la

muestra como con la fase estacionaria)

Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar

COLUMNAS
MATERIAL DEL RECIPIENTE: Acero Inoxidable, vidrio,

aluminio, cobre, tefln.

SOPORTE SOLIDO: Esferas de polmeros, esferas de
vidrio, tierra de diatomeas calcinadas, (P, W, WAN,
SILANIZADAS)
FASE ESTACIONARIA:
CGL:
Lquidos polares (Carbowax)
Lquidos no polares (OV-1)
Lquidos semipolares (OV-17)
CGS:

Slidos (Slica Gel, Almina)

Columnas cromatogrficas

Columnas capilares

Columnas Empacadas

Ejemplos de fases estacionarias en cromatografa

de gases

Separaciones por punto de ebullicin de compuestos en

un intervalo amplio de pesos moleculares:
Escualano
Polidimetilsiloxano

Para hidrocarburos insaturados y otros compuestos

polidifenildimetilsiloxano
policarboranometilcianoetilsilicn

Para compuestos nitrogenados

poliamida
policianoetilmetilsilicon

Detectores

Caractersticas ideales de un detector para Cromatografa de

Gases:
Sensibilidad alta y estable; tpicamente 10-8 g soluto/s
Bajo nivel de ruido
Respuesta lineal en un amplio rango dinmico
Tiempo de respuesta corto
Buena respuesta para toda clase de compuestos orgnicos
Insensibilidad a las variaciones del flujo y la temperatura
Estabilidad y robustez
Simplicidad en su operacin
Identificacin de compuestos positiva
Tcnica no destructiva
Pequeo volumen en prevencin del mezclado de
componentes

Detectores:
Un detector nos indica qu
sale de la columna.

Conductividad trmica

Los detectores ms comunes

y utilizados son:

Ionizacin de Flama (FID)

Captura de electrones

Detector de N y P

Fotomtrico de flama

Conductividad
electroltica
Fotoionizacin
Infrarrojo
de masas

Detector de conductividad
trmica
Responde a todos los analitos, pero la

conductividad trmica no es suficientemente

sensible para detectar cantidades pequeas cuando
se trabaja con columnas tubulares abiertas con
dimetro inferior a 0.53 mm.
Laconductividadtrmica mide la capacidad de una
sustancia para trasmitir calor de una regin caliente
a una fra.
Se utiliza H2 o He como gas portador para dar el
menor lmite de deteccin.
La sensibilidad aumenta cuando; aumenta la
corriente en el filamento.

Detector de ionizacin de
flama
(FID)de la muestra que salen de la
Los componentes
columna se queman en una mezcla de hidrgeno
y aire.
Los cationes que se producen en la llama
conducen la corriente elctrica desde la punta
del quemador que acta de nodo y un colector
catdico. Esta corriente elctrica es la seal que
capta el detector.
Es sensible a otros gases son H2, He2, N2, O2,
NO, CO, o sea que no es universal.

Detector de captura
electrnica
Es sensible en particular a las molculas que contienen
halgenos, carbonilos conjugados, nitrilos,
nitrocompuestos y compuestos organometlicos.
Es insensible a los hidrocarburos, alcoholes y cetonas.
El gas portador tiene que ser con un 5% de metano.
Contiene un istopo de Ni63 radiactivo que lanza e- y
mantiene un campo estable, al llegar la muestra es
golpeada por los e- y libera ms e-, la diferencia de
potencial elctrico se capta en el detector.
e-(electrones)
Es insensible a los hidrocarburos, alcoholes y cetonas